禽流感血清抗體和卵黃抗體的比較研究

何賢海

（貴州省德江縣農(nóng)牧科技局動物疫病預(yù)防控制中心，貴州德江 565200）

禽流感血清抗體和卵黃抗體的比較研究

何賢海

（貴州省德江縣農(nóng)牧科技局動物疫病預(yù)防控制中心，貴州德江 565200）

禽流感是一種人畜共患的急性、烈性傳染病，感染家禽死亡率非常高，對養(yǎng)殖業(yè)造成的經(jīng)濟損失難以估量。常規(guī)監(jiān)測禽流感疫苗免疫效果的方法是檢測禽流感血清抗體，但存在采血過程費時費力、容易引起家禽應(yīng)激反應(yīng)等問題。大量試驗證明，禽流感卵黃抗體效價與血清抗體效價基本一致，且具有操作簡單的優(yōu)點，為禽流感的抗體檢測提供了新的選擇。

禽流感 血清抗體 卵黃抗體 比較研究

禽流感（AI）是由A型流感病毒引起的一種人畜共患的急性、烈性傳染病，禽類一旦感染，輕者可引起禽類產(chǎn)蛋量急劇降低，嚴(yán)重者可導(dǎo)致禽類突然死亡，且死亡率非常高[1]，是近年來在家禽養(yǎng)殖業(yè)中造成嚴(yán)重危害的傳染病之一。如果接觸到感染禽流感病毒的禽及其排泄物、分泌物、雞胚、種蛋和精液，或者是接觸到受到污染的飼料、水、墊草等媒介，禽流感就能經(jīng)呼吸道、消化道傳播，傳播速度非常迅速。水禽和候鳥也是禽流感的主要傳播者，傳播面積巨大。一旦禽流感暴發(fā)，不僅會給養(yǎng)殖業(yè)帶來災(zāi)難性的危害，造成難以估量的經(jīng)濟損失，甚至?xí){到人類的生命安全。因此，日常中做好高致病性禽流感的監(jiān)測工作，其為疫病防控起到了重要作用。

1 禽流感血清抗體檢測法

目前，在家禽養(yǎng)殖過程中防控禽流感病毒流行的主要方法是對家禽進行禽流感疫苗接種。接種后，為了能夠及時掌握疫苗的免疫效果、了解雛雞母源性抗體水平的高低以便建立科學(xué)的免疫計劃，確定是否實施強化免疫等，常規(guī)的監(jiān)測方法是檢測免疫家禽血清中的免疫抗體水平。但是這種方法的弊端在于，在采血過程中容易使家禽受到驚嚇，引起應(yīng)激反應(yīng)，使產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)量急劇下降，甚至導(dǎo)致家禽死亡，給養(yǎng)殖戶造成不必要的經(jīng)濟損失，而且采血過程也比較麻煩，采血中如果稍微不注意造成血液污染或者溶血等情況發(fā)生，會影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2 禽流感卵黃抗體檢測法

以特異性抗原免疫母雞后，母雞體內(nèi)產(chǎn)生相對應(yīng)的特異性抗體，這種抗體除了存在于血清中，也存在于禽蛋的卵黃中，我們稱之為卵黃抗體（Yolk antibody，IgY）。

2.1 卵黃抗體檢測的可行性

早在20世紀(jì)80年代，我國就有利用卵黃樣本替代血清樣本進行新城疫免疫抗體效價監(jiān)測的做法[2]，而且也逐漸延伸應(yīng)用到傳染性法氏囊、減蛋綜合征、傳染性喉氣管炎等禽病的防治中。近年來，國內(nèi)針對禽流感血清抗體和卵黃抗體的監(jiān)測效果也進行了大量的研究討論。付興周對80只150日齡海蘭蛋雞進行禽流感疫苗免疫后，采用β—微量法在30天內(nèi)多次測定血清及蛋黃中AI 的血凝抑制（HI）抗體，檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，免疫5天后，血清中開始檢測出HI抗體，到免疫后的第19天，抗體效價達到最高峰，而蛋黃中在免疫后的第7天可以檢測出HI抗體，之后抗體水平逐漸上升，至免疫后19～21天達到最高值，而且與血清中的HI抗體水平接近，差異不顯著[3]；呂運蓮等的試驗顯示，禽流感血清抗體和卵黃抗體效價分別為6.55和6.75，表明血清抗體效價與卵黃抗體效價基本一致[4]。這些試驗都證明了用卵黃抗體代替血清抗體檢測效價是可行的。

2.2 卵黃抗體的特點

卵黃抗體的優(yōu)點有很多。第1，卵黃抗體的產(chǎn)量很高。產(chǎn)蛋母雞經(jīng)特異性抗原免疫后，可以產(chǎn)生持久性應(yīng)答反應(yīng)，抗體效價可維持?jǐn)?shù)月之久；第2，卵黃抗體耐酸、耐堿、耐熱，理化性質(zhì)非常穩(wěn)定；第3，卵黃抗體免疫測定中的干擾小，IgY不會和免疫球蛋白IgA和IgG結(jié)合，可避免這些因素所造成假陽性或假陰性結(jié)果[5]；第四，簡單方便，從卵黃中檢測IgY比從動物血清中檢測抗體更加方便，也免去了免疫動物采血的痛苦。

2.3 卵黃抗體測定的局限性

雖然大量試驗都證明用卵黃抗體代替血清抗體進行禽流感疫苗效價檢測是可行的，但是這種方法仍然有一定的局限性。由于卵黃的形成需要9～10 d的時間，所以卵黃抗體與血清抗體的檢測結(jié)果相比有一定的滯后性，在抗體上升期間不能用卵黃代替血清進行HI抗體監(jiān)測，所以不適用于發(fā)生AI疫情時的檢測，只適用于日常的疫情監(jiān)測。

3 結(jié)束語

運用雞蛋卵黃抗體檢測法，能把因檢測抽血造成的應(yīng)激反應(yīng)、產(chǎn)蛋率下降等不利影響降到最低，且方法操作簡單易行，檢測結(jié)果與血清抗體檢測結(jié)果基本一致，是一種值得日常疫情監(jiān)測中大面積推廣應(yīng)用的方法。

[1] 姚海潮，曾江勇，張成福.淺談禽流感的危害及防控[J].西藏科技，2008，（6）：54-56.

[2] 李向東，左興惠，劉文亮.不同日期所產(chǎn)雞卵與母雞血清中雞新誠疫抗體水平的比較[J].家畜傳染病，1988，（30）：12-13.

[3] 付興周.蛋雞血清及其蛋黃中禽流感病毒抗體的相關(guān)性[J].養(yǎng)禽與禽病防治，2005，（5）：16-17.

[4] 呂運蓮，趙晏平，程朝友，周繼國.蛋雞血清抗體與卵黃抗體效價對比試驗[J].當(dāng)代畜牧，2013，（9）：47-48.

[5] 韓麗麗.卵黃抗體的應(yīng)用研究進展[J].科技視界，2012，（30）：85-86.

表1 RPHA法和AG法對比試驗結(jié)果

從表1顯示，山羊痘待檢樣品RPHA法陽性率80%，AGP法陽性率僅50%，試驗中還發(fā)現(xiàn)AGP法陽性樣品，RPHA法一定是陽性。病毒培養(yǎng)液檢測結(jié)果，RPHA法陽性率100%，而AGP法陽性率為0。說明RPHA法敏感性明顯高于AGP法。

3 討論與分析

3.1本研究采用兔抗山羊痘病毒IgG致敏紅細(xì)胞建立的反向間接血凝試驗，對山羊痘病毒抗原具有特異性和敏感性，與其他動物病毒抗原不發(fā)生交叉反應(yīng)，比AGP法敏感，且致敏紅細(xì)胞的血凝性穩(wěn)定。本研究建立的方法可用于山羊痘的診斷和流行病學(xué)檢測，是一種靈敏、操作簡單、快速的檢測方法。

3.2紅細(xì)胞的醛化固定和致敏方法較多。本試驗采用了戊二醛醛化，結(jié)合鞣酸化處理，使紅細(xì)胞更具有穩(wěn)定性更敏感，消除了綿羊個體之間的差異而影響試驗的重復(fù)性。