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    凍前預(yù)處理對(duì)薩??巳庋蚓豪鋬鲂Ч挠绊?/h1>
    2015-03-01 09:01:54茍想珍王珂何茂昌楊薦俊劉彥軍
    中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘 2015年8期
    關(guān)鍵詞:薩???/a>活率定西

    茍想珍王 珂何茂昌楊薦俊劉彥軍

    (1.甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所,甘肅平?jīng)?744000;2.定西旺盛養(yǎng)殖有限公司,甘肅定西 743000;3.定西市團(tuán)結(jié)鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站,甘肅定西 743000)

    凍前預(yù)處理對(duì)薩福克肉羊精液冷凍效果的影響

    茍想珍1王 珂1何茂昌1楊薦俊2劉彥軍3

    (1.甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所,甘肅平?jīng)?744000;2.定西旺盛養(yǎng)殖有限公司,甘肅定西 743000;3.定西市團(tuán)結(jié)鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站,甘肅定西 743000)

    通過對(duì)薩??巳庋蛐迈r精液在離心前進(jìn)行不同時(shí)間的靜置,選擇不同的離心速度及離心時(shí)間進(jìn)行冷凍前預(yù)處理,以解凍后精子活率,復(fù)蘇率為判斷指標(biāo),比較了各種不同預(yù)處理對(duì)薩??司豪鋬鲂Ч挠绊憽=Y(jié)果表明:離心前在37℃環(huán)境下靜置60min的凍后效果(活率達(dá) 0.47和復(fù)蘇率達(dá)到73.8%)優(yōu)于 30min 和 90min 的凍后效果(p<0.05);離心過程以 1000r/min 的速度離心 10min 較好,凍后活率 0.45,復(fù)蘇率達(dá)到74.5%,優(yōu)于500r/min 和 1500r/min轉(zhuǎn)速和其他時(shí)間(p<0.05)。

    薩??巳庋?冷凍精液 預(yù)處理 冷凍效果

    精液的冷凍保存技術(shù)是隨著人工授精(AT)的發(fā)展而發(fā)展起來的,是通過降低或抑制精子新陳代謝強(qiáng)度從而達(dá)到延長(zhǎng)精子在體外生存的目的。以精液體外保存為基礎(chǔ)的人工授精技術(shù)的廣泛應(yīng)用已經(jīng)加速了動(dòng)物的遺傳選擇并使生產(chǎn)能力得到極大的提高。

    薩??巳庋蛱?hào)稱世界上長(zhǎng)得最快的肉用型品種,早熟,生長(zhǎng)快,產(chǎn)肉多,肉質(zhì)好,適應(yīng)性強(qiáng),繁殖率達(dá)到160%-210%。為了有效地解決肉用種羊缺乏的現(xiàn)狀,節(jié)省優(yōu)質(zhì)種羊引種費(fèi)用和飼養(yǎng)管理成本,開發(fā)薩福克肉羊高端品質(zhì)冷凍精液,擴(kuò)大良種覆蓋率,建立良種繁育體系,良種雜交改良體系,質(zhì)量監(jiān)督體系,開展集約化,精準(zhǔn)化,產(chǎn)業(yè)化,綠色化的發(fā)展模式。

    1 材料與方法

    1.1 樣品來源

    精液樣品采集于甘肅定西旺盛養(yǎng)殖有限公司選擇成年,體質(zhì)健康,性欲旺盛,配種頻率正常的薩福克肉羊,收集中段富含精子部分,經(jīng) 4 層滅菌紗布過濾,用保溫瓶在 37℃左右運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室,生物顯微鏡下進(jìn)行精液品質(zhì)常規(guī)檢查,選擇活率 0.7 以上,密度“中”級(jí)以上的精液用于實(shí)驗(yàn)。

    1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

    隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱,800 型電動(dòng)離心機(jī),400-600X 生物顯微鏡,電子天平,超低溫溫度計(jì),氟板,5L 液氮罐,烘箱,高溫高壓滅菌器,普通冰箱及羊用采精器械和冷凍器械等。

    1.3 精液的預(yù)處理

    1.3.1 離心前靜置時(shí)間

    將采集的合格精液保存在 37℃左右的保溫瓶中,分別靜置30min、60min 和 90min。

    1.3.2 離心

    分別以 500r/min、1000r/min、1500r/min 的速度離心 7min、10min 和 15min。

    1.4 冷凍精液制作與解凍

    用液氮熏蒸法制作細(xì)管凍精,劑量為 0.5ml,解凍時(shí)用40~45℃溫水。

    1.5 數(shù)據(jù)處理

    應(yīng)用 t 檢驗(yàn)和方差分析法對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 離心前靜置時(shí)間對(duì)薩??巳庋騼鼍盥始皬?fù)蘇率的影響

    本研究在稀釋前采用 30 min、60 min 和 90 min 3 種不同的靜置時(shí)間對(duì)精液凍后活率的影響見表1。精液離體后靜置 60 min 再采取 1 000 r/min 的速度離心,凍后活率及復(fù)蘇率明顯優(yōu)于靜置30 min和90 min(p<0.05),凍后精子活率達(dá) 0.47,復(fù)蘇率達(dá)73.8%。

    2.2 離心速度及離心時(shí)間對(duì)凍后活率及復(fù)蘇率的影響

    對(duì)薩??诵迈r精液采用 500 r/min、1 000 r/min 和 1 500 r/min的速度分別離心 7 min、10 min和 15 min,分別制成細(xì)管凍精和顆粒凍精,同時(shí),在相同條件下解凍(45℃溫水)。結(jié)果見表2。當(dāng)采用500 r/min 的速度離心時(shí),離心時(shí)間的長(zhǎng)短對(duì)凍后精子活率及復(fù)蘇率的影響都非常明顯。而采用 1 000 r/min 的速度離心,精子活率最高可達(dá) 0.45,復(fù)蘇率也能達(dá)到 74.5%,這表明,離心時(shí)間對(duì)精液的凍后活率影響較大,通常以離心 10 min 較好,在細(xì)管凍精中表現(xiàn)非常明顯(P<0.05)。離心速度以1 000 r/min 較為理想。

    表1 離心前靜置時(shí)間對(duì)凍后活率及復(fù)蘇率的影響

    表2 離心速度及離心時(shí)間對(duì)凍后活率及復(fù)蘇率的影響

    3 討論

    (1)本研究在稀釋前將精液分別靜置 30min,60min 和90min,結(jié)果表明,平衡 60min可有效地使精子和精清接觸,以增強(qiáng)精子對(duì)冷休克及冷凍損傷的抵抗能力,靜置時(shí)間太長(zhǎng)可引起精漿變質(zhì)而對(duì)精子產(chǎn)生影響,同時(shí),精子不運(yùn)動(dòng)也容易形成假死狀態(tài),該結(jié)果與 Paulenz所采用的豬精液 Beltsville 預(yù)處理方法所獲得的結(jié)果相同。

    (2)本研究采用不同的離心速度和離心時(shí)間,結(jié)果表明,以1000r/min 的離心速度離心10min 較好,解凍后活率達(dá)到 0.45。這主要是由于不離心,精液體積過大稀釋效果不佳,而過快的離心速度則使精子在離心管底部凝結(jié),導(dǎo)致形態(tài)異常,活率降低。也有報(bào)道表明,薩福克精液凍前以 1200r/min 的速度離心 10 分鐘較好,本研究認(rèn)為,在平?jīng)龅貐^(qū)以 1000r/min 的速度離心較好。

    4 結(jié)論

    (1)精液稀釋前的靜置時(shí)間,以在37℃下靜置60min較好,優(yōu)于30min和90min(p<0.05)。

    (2)離心時(shí)以 1000r/min 的速度離心 10min 較好,優(yōu)于其他的速度時(shí)間。

    [1] Pursel V G,Johnson L A. Freezing of boar spermatozoa:fertilizing capacity with concentrated semen and a new thawing procedure[J]. Journal of Animal Science,1975,40:99—102

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