畜禽肉毒梭菌中毒癥的診治

劉偉德

（山東省安丘市畜牧局，山東 安丘 262100）

畜禽肉毒梭菌中毒癥的診治

劉偉德

（山東省安丘市畜牧局，山東 安丘 262100）

畜禽；肉毒梭菌中毒；診斷；防治

肉毒梭菌中毒癥簡(jiǎn)稱肉毒中毒，是機(jī)體吸收肉毒梭菌毒素后人獸共患的急性中毒病。臨診表現(xiàn)主要為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)進(jìn)行性麻痹和延腦麻痹為特征，確診需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。避免畜禽吃腐敗的動(dòng)物尸體和腐爛草料是預(yù)防的重點(diǎn)。早期治療以抗生素為主，對(duì)癥治療可應(yīng)用大劑量鹽類瀉劑。

1 流行病學(xué)

肉毒梭菌的芽孢廣泛分布于自然界，因此人類和動(dòng)物的感染多來自自然界。人類肉毒中毒基本上都由食物中含有肉毒毒素所致。本病在鴨、雞、牛、馬較為多見，綿羊、山羊次之，豬、犬、貓少見，兔、豚鼠和小鼠都很易感。其發(fā)病原因主要是由于畜禽攝食了腐敗尸體、腐爛的草料而引起的。

2 臨診癥狀

本病潛伏期的長(zhǎng)短取決于畜禽種類不同和攝入毒素量多少等，一般多為4～20h，長(zhǎng)的可達(dá)數(shù)日。以及個(gè)體對(duì)毒素的敏感性等，一般為2～4h，長(zhǎng)者可達(dá)數(shù)天或更長(zhǎng)。本病的特有癥狀，基本上皆屬于神經(jīng)麻痹的表現(xiàn)。馬、牛、羊等動(dòng)物主要表現(xiàn)精神沉郁，銜草咀嚼無力，吞咽困難，腸蠕動(dòng)音減弱，頑固性便秘，步態(tài)不穩(wěn)，肌肉震顫，瞳孔散大，臥地不起，呼吸困難，伸展頭頸以助呼吸，最后死于呼吸麻痹。家禽則主要表現(xiàn)為頸部肌肉麻痹，頭頸軟弱無力，向前低垂，翅膀、腿部肌肉麻痹，翅膀下垂，行動(dòng)困難，閉目瞌睡，處于昏迷狀態(tài)。中毒輕的，可以恢復(fù)。豬很少發(fā)病，主要表現(xiàn)肌肉進(jìn)行性衰弱和麻痹，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞變性。

3 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

肉毒菌的芽孢對(duì)外界環(huán)境的抵抗力很強(qiáng)，廣泛分布于自然界，在土壤、糞便、腐敗的動(dòng)植物尸體，變質(zhì)的肉品、魚類、食品和飼料以及動(dòng)物腸道內(nèi)容物中常有存在。存在于動(dòng)物消化道內(nèi)的肉毒梭菌及其芽孢，一般對(duì)動(dòng)物無害處，因此從標(biāo)本和病料中分離出肉毒梭菌一般也不能肯定其致病作用，因而無特別重要的診斷價(jià)值。臨床上發(fā)生可疑病例時(shí)，通過調(diào)查發(fā)病原因和發(fā)病經(jīng)過，根據(jù)臨床癥狀和病理變化進(jìn)行分析，可作出初步診斷。如同群動(dòng)物中有多只動(dòng)物發(fā)生明顯運(yùn)動(dòng)神經(jīng)麻痹癥狀，而體溫、反射正常，剖檢無特異性，可作為診斷的依據(jù)。但本病的確診，主要依靠在飼料、腸內(nèi)容物和尸體內(nèi)檢出毒素。

3.1檢驗(yàn)方法

（1）被檢材料中毒素的提?。撼Ｓ脽o菌生理鹽水或0.2%明膠緩沖液（pH6.5）提取毒素或作稀釋。為完成全部檢驗(yàn)程序，經(jīng)處理得到的標(biāo)本液最好不少于20mL，為控制雜菌可加青、鏈霉素。室溫超過22℃時(shí)，應(yīng)在冰浴中處理標(biāo)本，以免毒素活性降低。有形標(biāo)本研碎、浸提、離心后取上部液備用。水液標(biāo)本可用如下絮凝法處理：絮凝劑一般用明礬，取水液標(biāo)本500mL，濾紙過濾后，濾液中加入5%明礬水溶液2.5mL，沿同一方向緩緩攪動(dòng)幾分鐘，靜置至結(jié)絮。用薄脫脂棉層過濾，再用10～15mL稀釋液洗下結(jié)絮，1000轉(zhuǎn)/min離心1～2min（或待其自然沉降），吸去上清液，留下約2.5～5mL，加入緩沖液溶解備用。

（2）毒素定性檢出：目前仍然沿用小鼠（或豚鼠）試驗(yàn)，即生物學(xué)法。

A.小鼠（或豚鼠）接種法：小鼠對(duì)各型毒素均較敏感，常采用皮下或腹腔注射（腹腔接種更為敏感）。各型肉毒毒素均能分別被各自的相應(yīng)型抗毒素中和而消除毒性作用，可借此反應(yīng)進(jìn)行毒素、抗毒素動(dòng)物體中和試驗(yàn)，以對(duì)毒素進(jìn)行定性鑒定。蘭州生物制品研究所生產(chǎn)有A-F混合型診斷血清，每毫升能中和相應(yīng)型毒素至少104小鼠致死量。操作：取檢樣液（可適當(dāng)稀釋）分為三份，一份加等量稀釋劑，一份加等量稀釋劑后煮沸15min（水浴中），另一份加等量混合型肉毒診斷血清37℃作用45min。三種檢樣液分別腹腔注射15～20g小鼠2只，每只0.5mL，觀察動(dòng)物反應(yīng)到第四天。若煮沸與加血清的2組動(dòng)物健康存活，而未作任何處理的1組動(dòng)物呈現(xiàn)典型的麻痹癥狀：先失聲（鑷子夾尾巴時(shí)不能叫），四肢無力，繼而腰部凹陷如“蜂腰”，全身癱軟，呼吸困難，一般2日內(nèi)因呼吸衰竭而死亡（如毒素含量大，可于24h內(nèi)急性死亡），據(jù)此表明標(biāo)本含有肉毒毒素。

某些肉毒梭菌產(chǎn)生的毒素前體，因毒力弱，毒素檢出可能得出陰性結(jié)果。對(duì)此可用胰酶進(jìn)行激活處理（檢樣液與1：250胰蛋白酶的水溶液按9：1混合，調(diào)pH6.0～6.2，37℃作用45min），使之活化提高活力?；夹笱夯蚰c道內(nèi)容物不作此處理，因毒素前體在腸道內(nèi)已被激活。

B.禽眼接種法：無小鼠時(shí)可選用禽類如雞、鴿、家雀等作眼瞼注射，但不同禽類對(duì)不同型別的毒素敏感性也有差別。雞和家雀對(duì)A型較敏感，鴿對(duì)C型較敏感。致人獸中毒的主要毒素型都可用雞、鴿、家雀檢出。試液分為二份，一份不加熱滅活，另一份100℃加熱15min滅活。用雞作試驗(yàn)，分別吸取上述液體，由內(nèi)眼角的下方注射下眼瞼皮下（一側(cè)試驗(yàn)用，另一側(cè)供對(duì)照），注射后眼瞼隆起，幾分鐘后接種液被吸收，眼瞼復(fù)原。如于注射0.5h后試驗(yàn)的眼瞼發(fā)生麻痹，逐漸閉合，而對(duì)照眼瞼仍正常。一般毒素含量越多，合眼越快。如毒素超過實(shí)驗(yàn)禽體致死量，試驗(yàn)雞則出現(xiàn)麻痹和呼吸困難等癥狀，經(jīng)過幾小時(shí)到十幾小時(shí)死亡。本試驗(yàn)也可用2只以上禽只作中和試驗(yàn)。須注意，如注射后20min內(nèi)死亡，或注射局部出現(xiàn)發(fā)炎壞死，即使有合眼癥狀也不能定為肉毒毒素所引起。

（3）毒素分型鑒定：因抗毒素血清有嚴(yán)格的型特異性，因此預(yù)防和治療都要求作出毒素的型別鑒定。中和試驗(yàn)是證明毒素和鑒定型別最可靠的方法。為獲得正確的結(jié)果，含毒素的樣品、抗毒素血清都應(yīng)作適當(dāng)?shù)南♂?。毒素可?jīng)小鼠腹腔接種后，按死亡時(shí)間概略估計(jì)毒素的含量。一般0.5～1h內(nèi)死亡，毒素含量為105小鼠最小致死量；2h左右死亡，為104小鼠最小致死量：3h左右死亡，為103小鼠最小致死量；5h后死亡，毒素含量一般在10個(gè)小鼠最小致死量?jī)?nèi)。中和試驗(yàn)前，將檢樣清液稀釋成10～100個(gè)小鼠最小致死量/mL。如用蘭州生物制品研究所生產(chǎn)的A、B、C、D、E、F六型分型血清，可將檢樣液分裝8支試管，作如此處理：第一支：加等量明膠緩沖液或生理鹽水；第二支：加等量明膠緩沖液或生理鹽水后，加熱到80℃30min；第三至第八支：分別加等量A、B、C、D、E、F肉毒診斷血清，置37℃處理45min。

各支分別腹腔注射體重15～20g健康小鼠2只，每只0.5mL，觀察4d。如第二組和第三至第八組中某組小鼠得到保護(hù)，其他各組均在觀察期內(nèi)以肉毒中毒癥狀死亡，則該中和組的型別即為標(biāo)本中毒素的型別。為節(jié)省診斷血清，也可先用A～F混合型肉毒血清作中和試驗(yàn)，出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果時(shí)再進(jìn)一步分型。鑒于我國(guó)動(dòng)物肉毒中毒除馬外主要為C型，人中毒主要是A、B及E型，可酌情先按常見的型別邊行中和試驗(yàn)，必要時(shí)再擴(kuò)大范圍。

多年來，為了使肉毒中毒的實(shí)驗(yàn)診斷更快速、更簡(jiǎn)便，克服需要實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有時(shí)遇到的困難，人們已對(duì)數(shù)種免疫血清學(xué)方法進(jìn)行過研究。已報(bào)告的血細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)用于檢出肉毒毒素，和敏感的小鼠腹腔接種法的檢出量接近，可用以鑒定A、B、C型毒素，但不適于其他型。瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、免疫熒光和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）也都有報(bào)告，可用于肉毒毒素檢驗(yàn)的鑒定，但需進(jìn)一步完善，目前但還不能完全代替生物學(xué)法。

（4）肉毒梭菌檢出試驗(yàn)

A.增菌產(chǎn)毒培養(yǎng)試驗(yàn)：取標(biāo)本接種于適宜的培養(yǎng)基（如肝肉湯培養(yǎng)基），30℃者養(yǎng)5d，離心取上清液作肉毒毒素檢出試驗(yàn)，方法同前。據(jù)此可確認(rèn)標(biāo)本中是否含有肉毒梭菌，并確定型別。

B.分離培養(yǎng)和鑒定：特殊需要時(shí)，可取上述增菌產(chǎn)毒培養(yǎng)物接種于卵黃瓊脂平板，30～35℃厭氧培養(yǎng)2～3d。挑選表面和周圍有虹彩樣毛澤的菌落（除G型外，各型肉毒梭菌產(chǎn)生的脂酶能分解卵黃中的脂質(zhì)，因而會(huì)出現(xiàn)此色澤），再接種增菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基培基，并進(jìn)行肉毒毒素檢出試驗(yàn)，據(jù)此可確認(rèn)分離到的菌落。

3.2 判定標(biāo)準(zhǔn)

（1）初步報(bào)告：有下列情況之一者，可初步報(bào)告標(biāo)本中含有肉毒毒素：A.小白鼠腹腔接種時(shí)，加熱滅活組全部活存，毒素組有典型的肉毒中毒癥狀，并于20min后到4d內(nèi)死亡。B.禽眼瞼閉合試險(xiǎn)時(shí)，加熱滅活對(duì)照組不閉眼，試驗(yàn)毒素組閉眼，或因呼吸困準(zhǔn)緩慢死亡。C.增菌產(chǎn)毒培養(yǎng)A驗(yàn)和分離培養(yǎng)物接種動(dòng)物，結(jié)果與上兩條之一相符。

（2）確定報(bào)告：混合型肉毒診斷血清中和試驗(yàn)即可確定報(bào)告檢出肉毒毒素，分型中和試驗(yàn)陽(yáng)性可確定型別。

3.3 注意事項(xiàng)

（1）肉毒毒素對(duì)熱和堿不穩(wěn)定：環(huán)境溫度超過25℃時(shí)，應(yīng)將含毒標(biāo)本放冰浴葉操作。pH6.0和4℃是保存毒素的穩(wěn)定條件。

（2）標(biāo)本的保存：有的標(biāo)本，特別是糞便，或污染較重的食品、飼料，可能含有致畜禽急死的其他毒性物質(zhì)，以致得出假陽(yáng)性結(jié)果；或由于畜禽提前死于其他毒性物質(zhì)而掩蓋了中毒癥狀，以致無法判定結(jié)果。為防止這些現(xiàn)象，可對(duì)供試液作如下處理：①凍放逾夜，然后融化。②再適當(dāng)稀釋。③加適量的健康牛普通血清（中和檢樣中的細(xì)菌內(nèi)毒素）。④透析（除掉小分子毒性物質(zhì)）。⑤供試液用稀鹽酸，調(diào)pH值3.0～4.0，收集沉淀，用適量磷酸鹽緩沖液（pH7.0）溶辭。⑥防止試驗(yàn)動(dòng)物受其他病原菌的感染。

4 防治措施

首先要避免畜禽吃腐敗的動(dòng)物尸體和腐爛飼料。在經(jīng)常發(fā)生本病的地區(qū)，可用同型類毒素進(jìn)行預(yù)防接種。治療本病，在早期可用多價(jià)抗毒素，靜脈或肌肉注射，4～6h重復(fù)一次，直至病情緩解為止。在毒素型確立后，用同型抗毒素治療本病。對(duì)癥治療可用大劑量鹽類瀉劑，以促進(jìn)消化道內(nèi)毒素的排除。例如，患鴨可飲用5%硫酸鎂溶液作緩瀉，以促進(jìn)消化道內(nèi)毒素的排出。

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10．3969/J.ISSN．1671-6027．2015．10.014

劉偉德（1974～），山東省安丘人，本科，中級(jí)獸醫(yī)師