IL-10、IL-17在子宮內膜癌中的表達及其與臨床病理的關系

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IL-10、IL-17在子宮內膜癌中的表達及其與臨床病理的關系

歐陽小明，史文靜，冀天星，郝卓芳，廖德貴

(廣州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院，廣東 廣州510260)

子宮內膜癌(endometrial carcinoma)作為臨床常見的婦科惡性腫瘤，多發(fā)生于50歲及以上的絕經(jīng)婦女，并且其發(fā)病率有呈逐漸升高的趨勢，嚴重威脅患者的健康和生命質量。關于其發(fā)病機制，目前尚無統(tǒng)一結論，有研究證實多種細胞因子可能參與了子宮內膜癌的發(fā)生及發(fā)展過程[1]。白細胞介素10(interleukin-10，IL-10)主要由T調節(jié)細胞(regulatory T cells，Treg)分泌，具有抑制功能性T淋巴細胞活性和抗腫瘤免疫反應等功能。T輔助淋巴細胞(T helper 17 cells，Th17)作為可以誘導組織產生炎癥反應的CD4+T細胞亞群，它通過分泌白細胞介素17(interleukin-17，IL-17)使中性粒細胞聚集而引起機體產生炎癥性反應。有研究表明Treg和Th17保持平衡可維持機體的免疫穩(wěn)態(tài)，失衡將導致機體發(fā)生癌變，而這種失衡與癌癥的臨床病理因素也有關[2]。本研究試圖通過檢測子宮內膜癌患者體內IL-10和IL-17的表達，以探討其與臨床病理特征之間的關系。

1資料與方法

1.1　一般資料

選擇2012年1月-2014年1月我院收治的子宮內膜癌和良性子宮病變患者為研究對象。子宮內膜癌63例，年齡36-71歲，平均(55.0±6.3)歲，其中絕經(jīng)45例，未絕經(jīng)18例；內膜樣腺癌39例，內膜樣腺癌伴鱗化14例，內膜樣腺癌伴黏液性腺癌10例；IA期43例，IB期15例，Ⅱ期5例；G1級32例，G2級24例，G3級7例；腫瘤大小≤1 cm者15例，1-2 cm者28例，≥2 cm者20例；未出現(xiàn)肌壁浸潤者40例，浸潤≤1/2肌壁者19例，浸潤>1/2肌壁者4例。良性子宮病變患者175例，年齡33-75歲，平均(53.3±7.5)歲，其中絕經(jīng)126例，未絕經(jīng)者49例；子宮肌瘤者58例，子宮腺肌瘤73例，子宮內膜異位癥者44例。 納入標準：①所有的患者術后均經(jīng)病理檢查結果確診；②子宮內膜癌的病理分期標準參照2009年國際婦產聯(lián)盟(FIGO)子宮內膜癌手術-病理分期[3]；③兩組患者無自身免疫性疾?。虎苄g前無放化療史；⑤患者及家屬知情同意，并簽署知情同意書；⑥符合醫(yī)學倫理學要求。子宮內膜癌手術的范圍包括廣泛子宮切除術及雙附件切除術，如果出現(xiàn)惡性腫瘤浸潤肌層、中或低分化或者特殊的組織類型時進行的是盆腔淋巴結清掃手術，單純的子宮切除手術已經(jīng)排除了惡性腫瘤。

1.2　方法

1.2.1標本采集手術前1天，分別抽取患者外周靜脈血3 ml,并以255 r/min的速度進行離心5 min，將離心后的上清液置于EP試管中保存在-80℃環(huán)境下，留待后用。手術后半小時內切取小塊子宮內膜組織并以10%的福爾馬林進行固定，標本均采用蘇木素-伊紅(HE)和鏈霉親和素-生物素-過氧化物酶復合物免疫組織化學(SABC-IHC)染色。

1.2.2檢測方法采用雙夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定患者的血清IL-10和IL-17水平，IL-10、IL-17的ELISA試劑盒均由美國R&D公司提供，吸光度值采用酶標儀為美國BIORAD680型測量，波長為450 nm，操作過程嚴格按照試劑盒說明書進行；將SABC-IHC染色的組織標本切厚度為4 μm的薄片并常規(guī)脫蠟脫水→1份3%的雙氧水+10份蒸餾水→在室溫下，滅活內源性過氧化物酶10 min，并以濃度為0.01 mol/L的枸櫞酸鹽進行抗原修復后再5%BSA室溫下保存10 min→4℃下孵育1∶100兔抗人IL-10單抗(由北京博奧森公司提供)+1∶50兔抗人IL-17單抗(Abcam公司提供)→37℃下孵育30 min的1∶100羊抗兔IgG(武漢博士德公司提供)+37℃下孵育30 min的1∶100鏈霉親和素-生物素-過氧化物酶復合物(武漢博士德公司提供)→室溫下DAB(武漢博士德公司提供)顯色5-30 min→顯微鏡下控制顯色時間，并以蘇木素復染色2 min+脫水+透明的中性樹膠進行封片，并在顯微鏡下觀察。其中陰性對照選用PBS代替一抗。最后通過IPP6.0圖像軟件以分析高倍鏡視野(×200)的積分光密度值(integrated option density，IOD)，而切片的IOD值為5個高倍鏡視野下的IOD平均值。

1.3　統(tǒng)計學分析

2結果

2.1　子宮內膜癌與良性子宮病變患者血清IL-10、IL-17的表達情況比較

子宮內膜癌患者與良性子宮病變患者的血清IL-10、IL-17水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，子宮內膜癌患者的血清IL-10、IL-17水平均高于良性子宮病變。見表1。

表1　　子宮內膜癌及良性子宮病變患者血清IL-10、

2.2　子宮內膜癌與良性子宮病變患者組織中IL-10、IL-17表達的IOD值比較

SABC-IHC染色結果顯示抗原陽性物在顯微鏡下呈現(xiàn)為棕黃色或者棕褐色的顆粒，在腫瘤細胞以及間質細胞的細胞質中可見IL-10、IL-17的表達，并且經(jīng)定量分析發(fā)現(xiàn)，IL-10、IL-17在子宮內膜癌和良性子宮病變中的表達差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，子宮內膜癌組織中IL-10、IL-17的IOD值高于良性子宮病變。見表2。

表2　子宮內膜癌與良性子宮病變患者組織中IL-10、

2.3　子宮內膜癌患者的血清IL-10、IL-17與臨床病理特征之間的關系

子宮內膜癌患者血清IL-10、IL-17在不同分期、不同細胞分級、有無肌層浸潤時，表達差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，F(xiàn)IGO IA期、G1級以及無肌層浸潤的子宮內膜癌患者血清IL-10水平最低，而IL-17水平則最高；血清IL-10、IL-17的表達在不同組織學類型、腫瘤大小中的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表3。

3討論

子宮內膜癌作為女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，常發(fā)生于絕經(jīng)期以及絕經(jīng)后女性的上皮組織，發(fā)病率僅次于卵巢癌和宮頸癌。由于子宮內膜癌發(fā)病早期無特異性的臨床表現(xiàn)，因此很難通過臨床表現(xiàn)進行篩查和診斷，而通過了解子宮內膜癌的發(fā)病機制，可為臨床初步篩查子宮內膜癌作出重要指導。

表3　子宮內膜癌患者的血清IL-10、IL-17與臨床病理

有研究證實許多細胞因子參與了惡性腫瘤的免疫學機制，IL-10是由Treg分泌的細胞因子，在宮頸癌的相關研究中，IL-10在宮頸癌以及子宮頸上皮內瘤變中的表達高于健康對照組，提示IL-10參與了機體的抗腫瘤免疫反應[4]。Th-17作為CD4+T細胞亞群，它通過參與機體的自身免疫性疾病、腫瘤以及移植物抗宿主等的發(fā)生及發(fā)展過程而介導炎性反應，并且影響疾病的預后。IL-17作為一種含有多種功能的細胞因子，主要由Th-17所分泌，因此在機體的免疫反應中也具有重要作用。

作者查閱相關文獻發(fā)現(xiàn)，關于IL-10、IL-17在子宮內膜癌發(fā)生機制中的作用的研究還相對較少，本研究試圖從這一角度出發(fā)，對子宮內膜癌的發(fā)生機制展開研究。結果顯示，子宮內膜癌患者的血清IL-10水平均高于良性子宮病變，差異有統(tǒng)計學意義。說明Treg細胞分泌的IL-10參與了機體對惡性腫瘤的免疫耐受過程，與有關研究結果一致[5]。并且子宮內膜癌患者的血清IL-17高于良性子宮病變，可能與子宮內膜癌時，可能誘導機體發(fā)生炎癥性反應，從而引起機體的Th-17分泌IL-17來介導機體的免疫反應有關。SABC-IHC染色結果發(fā)現(xiàn)子宮內膜癌組織中IL-10、IL-17的IOD值均高于良性子宮病變，進一步說明了子宮內膜癌時，炎癥因子參與了機體的免疫過程，從而增強機體的抗腫瘤免疫能力，與相關研究結果一致[5]。

有研究表明Treg/Th17保持平衡狀態(tài)有利于機體維持免疫穩(wěn)定，而失衡將導致機體產生各種惡性病變，并且臨床研究證實Treg的水平可以評估宮頸癌的分化程度，Th-17的水平則與宮頸癌的臨床病理特征如臨床分期以及有無轉移等，有明顯的正相關關系[6]。本研究結果顯示，子宮內膜癌患者血清IL-10、IL-17在不同分期、不同細胞分級、有無肌層浸潤時表達差異有統(tǒng)計學意義，F(xiàn)IGO IA期、G1級以及無肌層浸潤的子宮內膜癌患者血清IL-10水平最低，而IL-17水平最高。結果提示子宮內膜癌進展越快，IL-10水平越高，而IL-17越低，因此兩者可作為評估子宮內膜癌進展情況的重要指標。而在不同組織學類型以及腫瘤大小中，血清IL-10，IL-17的表達無差異，與有關研究結果相似[7]。

綜上所述，IL-10，IL-17可能參與了子宮內膜癌的發(fā)生及發(fā)展過程，而通過檢測兩者在子宮內膜癌中的表達可評估惡性腫瘤的進展情況，從而為臨床治療提供指導。

參考文獻：

[1]Santacana M,Maiques O,Valls J,et al.A 9-protein biomarker molecular signature for predicting histologic type in endometrial carcinomaby immunohistochemistry[J].Hum Pathol,2014,45(12):2394.

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[4]劉驥,黃明莉,王寶菊,等.子宮內膜癌血管生成相關因子的研究進展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學進展,2014,14(9):1790.

[5]李林,程矗,段瑞岐,等.IL-10、IL-17在子宮內膜癌中的表達及意義[J].四川大學學報(醫(yī)學版),2014,45(5):793.

[6]李林,程矗,段瑞岐,等.白細胞介素-10，-17及叉狀/翼狀螺旋轉錄因子，維甲酸相關孤兒受體-γt在子宮內膜癌中的表達及意義[J].中華婦幼臨床醫(yī)學雜志(電子版),2013,9(5):599.

[7]Yamagami W,Susumu N,Tanaka H,et al.Immunofluorescence-detected infiltration of CD4+FOXP3+ regulatory T cells is relevant to the prognosis of patients with endometrial cancer[J].Int J Gynecol Cancer,2011,21(9):1628.

(收稿日期：2014-06-09)

文章編號：1007-4287(2015)05-0791-03