療骨膠囊提取工藝優(yōu)選

廖興隆，劉才英

（重慶市中醫(yī)骨科醫(yī)院，重慶 400012）

療骨膠囊提取工藝優(yōu)選

廖興隆，劉才英

（重慶市中醫(yī)骨科醫(yī)院，重慶 400012）

目的：優(yōu)選療骨膠囊的最佳提取工藝。方法：以浸膏得率、黃芪和秦艽薄層色譜以及烏頭堿限量檢測結(jié)果為考察指標，采用L9 （34）正交試驗優(yōu)化提取工藝。結(jié)果：制川烏、制草烏的提取工藝為提取兩次，第1次加水10倍，煎煮2．5h，第2次加水8倍，煎煮2h。黃芪等藥材加水量10倍，每次煎煮1h，煎煮3次，薄層色譜斑點清晰，烏頭堿限量符合要求。結(jié)論：優(yōu)選的提取工藝穩(wěn)定可行，可用于療骨膠囊的大生產(chǎn)。

療骨膠囊；提取工藝；正交試驗；TLC

4 漏 乳

楊某，女，28歲，2014年2月19日就診。1個月前生育第2胎后即乳汁自出，經(jīng)中西醫(yī)反復(fù)調(diào)治無效。曾于受孕后是否繼續(xù)妊娠糾結(jié)不已。分娩之初并無乳汁，行人工喂養(yǎng)，半月后才有乳汁分泌，始行混合喂養(yǎng)。時時乳汁自出，乳量卻不能滿足乳兒之需。體質(zhì)尚佳，面色紅赤，肌膚濕潤，乳房作脹，時有噯氣。脈艱澀有力，舌質(zhì)紅苔薄干。診為漏乳，辨證氣機郁滯，乳行逆亂。以疏肝理氣，通經(jīng)行乳為治。遣化裁之柴胡疏肝散。藥用柴胡15g，枳殼12g，香附20g，青皮15g，黨參15g，白芍15g，當歸15g，川芎15g，甘草10g。每日1劑，每劑之初需將藥物以適量水液浸泡30min，再煎煮致沸后15min，過濾取汁后，再將其藥加適量清水煎煮，如此煎煮3次，將3次所得藥汁混勻，分3次溫熱口服，連服4劑。2月25日復(fù)診，服藥2劑之后，漏乳之癥即已大減，4劑服畢已無漏乳。仍感乳房作脹，時有噯氣。面紅潤，舌淡紅苔白，脈平。藥用柴胡15g，枳殼12g，香附20g，黨參15g，白芍15g，當歸15g，川芎15g，浮小麥20g，甘草10g。每日1劑，煎服法同前，再連服3劑。1個月后隨訪病愈，母子俱健。

5 體 會

通因通用即用通利的藥物治療具有實性通泄癥狀的病證［1］。多汗例以四逆散加味收功。是切合肝郁氣滯的病機，結(jié)合病變在肝膽脾胃及其經(jīng)絡(luò)、官竅、五體，即可［2］。滑精例用沉香散能疏達肝氣，行下焦之氣血而通利水道［3］。經(jīng)行吐衄遣越鞠丸愈病和漏乳用柴胡疏肝散蘊含行氣、解郁、活血、通絡(luò)等“通”意于中。各例用方均由其證治特點所確定，乃因“只有在辨證論治的基礎(chǔ)上，依據(jù)一定的法則，才能組成有效的方劑”［4］。

“通因通用”意義在通，然有生理之通、病理之通、治法之通和通固相因。對此了然于心，方可游刃無阻。人體是“行塞互護”、“泄攝共存”、“吐納相助”的有機整體，通中有固，固中有通，肝心脾肺腎各系莫不如此。氣機的運行，血液的循環(huán)，津液的敷布，水谷的運化表現(xiàn)為行與塞、泄與攝和吐與納的和諧，是生理之通的結(jié)果。泄攝有度則汗出汗止、便行便終、經(jīng)來經(jīng)停、乳泌乳收正常。病理之通總因生理之通失常，以致泄強攝弱，泄多攝少。汗出、滑精、吐衄、漏乳即是如此。治法之通不能簡單理解為通下、利下，實為助力于生理之通的各種治法。多汗例的疏通陽氣，布達水津；滑精例的疏肝行氣，兼以利濕；經(jīng)行吐衄例的行氣疏肝，助血歸經(jīng)；漏乳例的疏肝理氣，通經(jīng)行乳均是以治法之通除病理之通，求生理之通。生理之通是泄與攝的統(tǒng)一，而泄與攝都需耗氣。病理之通總由生理之通的不足而致，所謂“邪之所湊，其氣必虛”［5］。所治雖是有通泄實證，但也需時時顧護正氣，在通泄方藥中酌加補益護正之品。并要通中顧攝，適當加入收澀之品。一般宜首重通后重澀，通藥先重后輕，澀藥先輕后重。總之，“因人、因時、因地制宜地針對個體患者調(diào)整其各系統(tǒng)之間的具體紊亂，促進其自愈機制，使之在新的水平上重新恢復(fù)相對平衡”［6］。

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療骨膠囊為我院老中醫(yī)長期使用的經(jīng)驗方，由制川烏、制草烏、黃芪、秦艽等組成，具有活血通絡(luò)、散寒除濕、補益肝腎之功效，主要用于退行性骨關(guān)節(jié)病、風濕性、類風濕性關(guān)節(jié)炎、股骨頭缺血性壞死等屬肝腎虧損、筋脈瘀滯證。原方以湯劑應(yīng)用，攜帶不便，故擬改劑型為膠囊劑，現(xiàn)進行其提取工藝的優(yōu)選。根據(jù)其功效及有效成分，擬采取綿萆薢、薏苡仁粉碎為細粉，制川烏、制草烏單獨水提，藥渣與黃芪、秦艽等10味藥材混合提取，以浸膏得率、黃芪、秦艽的薄層色譜及烏頭堿的限量為考察指標，為療骨膠囊的提取工藝提供試驗依據(jù)。

1 材 料

DBQ-Ⅱ型薄層自動鋪板器（重慶南岸貝爾德儀器廠），BRANSON超聲波清洗器［必能信超聲（上海）有限公司］，TDL80-2B型低速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠），212型電子天平［奧豪斯儀器（上海）有限公司］，HW·SY21-K型電熱恒溫水浴鍋（北京市長風儀器儀表廠），DHG-9146A型電熱鼓風干燥箱（上海精宏實驗設(shè)備有限公司），CAMAG薄層掃描儀及成像系統(tǒng)（瑞士卡瑪）。中藥飲片均購于重慶市桐君閣股份公司，經(jīng)鑒定符合2010年版《中國藥典》一部相關(guān)項下規(guī)定，黃芪甲苷對照品（批號110781-200613）、龍膽苦苷（批號110770-201013），烏頭堿（批號110720-200410）由中國藥品生物制品檢定所提供，所用化學試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 出粉率考察［1］

按處方比例分別稱取綿萆薢50g、薏苡仁100g，混為1份，共3份，粉碎過篩（80目）稱重，計算出粉率，結(jié)果見表1。

表1 出粉率結(jié)果

2.2 制川烏、制草烏水提取工藝考察

烏頭堿限量檢查［2，3］。精密稱取濃縮樣品6g，加溫水50mL使溶解，加稀鹽酸調(diào)pH值1～2，離心（3000轉(zhuǎn)/min）15min，取上清液用乙醚提取3次（20、20、10mL）；酸水液加濃氨水調(diào)pH9～10，再用乙醚提取4次（25、20、15、10mL）；離心時余下的沉淀物用乙醚洗滌2次，每次15mL。合并乙醚提取液，用適量無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液回收乙醚至干，殘渣加無水乙醇1mL使溶解，作為供試品溶液。取烏頭堿對照品，加無水乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述供試品溶液10μL，對照品溶液8μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，用氨蒸氣飽合后，以正已烷-醋酸乙酯-乙醇（6.4∶3.6∶1）為展開劑，氨蒸氣飽和20min，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液，置日光下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，檢視出相應(yīng)烏頭堿斑點小于對照品的斑點或不出現(xiàn)斑點。

制川烏、制草烏提取工藝考察［4，5］?？紤]其有效成分，參考相關(guān)文獻及預(yù)試驗的基礎(chǔ)上，確定制川烏、制草烏采用水提取兩次，第1次加水10倍煎煮2.5h，第2次加水8倍煎煮2h，藥渣與剩余10味藥合并提取，提取液濃縮成樣品，烏頭堿限量檢查。

2.3 黃芪等藥材提取工藝考察

黃芪、秦艽TLC。①黃芪薄層鑒別［6，7］：取樣品5g，加水50mL，水浴中溫浸1h，取出，放冷，超聲處理20min，離心（3000轉(zhuǎn)/分）15min，吸取上清液置分液漏斗中，用乙醚30mL洗滌，棄去乙醚液，水液用水飽和的正丁醇提取4次（30、30、20、20mL），合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次20mL，棄去氨試液后蒸干。殘渣用乙醇5mL溶解，加于已處理好的中性氧化鋁柱（8g，內(nèi)徑1.2cm，干法裝柱）上，用50%乙醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液10μL，對照品溶液2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。②秦艽薄層鑒別［8-10］：取樣品6g，加環(huán)己烷50mL，置水浴上加熱回流2h，濾過，棄去濾液，藥渣加丙酮50mL，置水浴上加熱回流30min，濾過，棄去濾液，藥渣加甲醇50mL，超聲處理30min，濾過，濾液濃縮至約2mL，加于已處理好的中性氧化鋁柱（120目，中性氧化鋁8g，內(nèi)徑1.2cm，干法裝柱）上，用甲醇洗脫至無色，收集洗脫液，濃縮至約2mL，作為供試品溶液。取龍膽苦苷對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液5μL，對照品溶液5μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（30∶10∶3）的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，至紫外光燈（254nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

提取工藝考察。在預(yù)試驗的基礎(chǔ)上，選擇對有效成分溶出量影響較大的3個因素，即加水量（A）、煎煮時間（B）、煎煮次數(shù)（C）為考察因素，選用L9（34）正交實驗對其進行了優(yōu)化研究，每因素選擇3個水平，提取工藝因素水平見表1。

表1 因素水平表

按處方比例稱取黃芪、秦艽、牛膝等10藥材，共9份，同時分別加入制川烏、制草烏水提后的藥渣，按照L9（34）正交試驗表安排的因素水平條件進行煎煮，濃縮制成樣品。

正交試驗結(jié)果見表2，方差分析見表3。

表2 L9（34）正交試驗表

表3 方差分析表

由表3直觀分析可知，各因素對水提工藝的影響依次為C＞A＞B，方差分析表明，C因素對提取結(jié)果有非常顯著性影響（P＜0.01），A因素對提取結(jié)果有顯著性影響（P＜0.05），B因素無顯著性影響，故最佳提取工藝為A3B1C3，其結(jié)果為：加水量10倍，煎煮時間每次1h，煎煮3次。

驗證試驗：按處方比例稱取各味藥材，根據(jù)優(yōu)選工藝結(jié)果進行提取，平行三次試驗，黃芪等十味藥材的浸膏得率為12.5%、11.6%、12.8%，黃芪、秦艽薄層鑒別斑點清晰，烏頭堿限量檢查符合規(guī)定。此工藝穩(wěn)定可行，重復(fù)性好。

3 討 論

制川烏、制草烏為方中君藥，其藥效成分、毒性成分均為雙酯型生物堿，具有散寒止痛之功效，用于風濕性關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)痛、腰腿痛、神經(jīng)痛等的治療，烏頭堿類藥物對風寒濕痹的關(guān)節(jié)疼痛有治療作用［11］，能明顯對抗角叉菜膠引起的大鼠和小鼠后踝關(guān)節(jié)腫，抑制組織胺引起的皮膚滲透性增加，減少受精雞胚漿膜囊上肉芽組織形成。但劑量過大可導(dǎo)致呼吸麻痹和中樞抑制，文獻報道煎煮時間在6h，能發(fā)揮較好的鎮(zhèn)痛功效［5］。結(jié)合實際情況，為保障本制劑安全、有效，預(yù)試驗比較了制川烏、制草烏與黃芪等藥味合并與分開提取，合并提取3h后，烏頭堿不能達到控制劑量，故參考相關(guān)文獻，確定制川烏、制草烏單獨提取4.5h后，再與其余藥味合并提取。同時進行烏頭堿成分的限量檢查，確保毒性成分在安全劑量范圍。

秦艽祛風除濕、活血通絡(luò)，黃芪益氣健脾、利濕消腫，威靈仙祛風濕，通經(jīng)絡(luò)，用于風濕痹痛，肢體麻木，筋脈拘攣，屈伸不利，共為方中臣藥，選擇秦艽、黃芪進行薄層色譜鑒定，以控制本制劑的質(zhì)量。在預(yù)試驗中進行了單因素試驗，比較煎煮次數(shù)對浸膏得率的影響，結(jié)果表明，前3次提取的浸膏得率的累計總和為92.3%，第4次的得率小于10%，故確定提取次數(shù)為3次。

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［收稿日期］2015-01-05

Objective：To optimize the extraction process for Liaogu Capsules. Method：With the extract yield， 15min，過濾取汁后，再將其藥加適量清水煎煮，如此煎煮3次，將3次所得藥汁混勻，分3次溫熱口服，連服4劑。10月30日復(fù)診，已來月事，胸部作脹，噯氣頻頻，時有頭暈，尚無嘔吐和鼻出血，經(jīng)色經(jīng)量正常，手足麻木感減弱，面色稍欠榮潤，舌淡紅苔白潤，脈弦細。病有減勢，守方以治。藥用香附15g，川芎15g，蒼術(shù)15g，神曲15g，柴胡15g，枳實15g，白芍20g，郁金20g，甘草10g。每日1劑，煎服法同前，連服4劑。11月6日復(fù)診，僅有嘔吐感覺，未嘔出，也未出鼻血。面色已顯紅潤，舌淡紅苔白干，脈弦細。囑其精神放松，多參加團體活動，用紅花、山楂等適量泡水代茶飲，余不再藥。半年后回訪，病愈體健。

Liaogu Capsules；extraction process；orthogonal test；TLC

R284.2

B

1004-2814（2015）05-0473-03

2015-01-04