老年高血壓并抑郁癥與血管緊張素原G-6A位點(diǎn)基因多態(tài)性的相關(guān)性研究

王毅鵬，金醒昉，何 燕，楊文慧，魏云鴻

·論著·

老年高血壓并抑郁癥與血管緊張素原G-6A位點(diǎn)基因多態(tài)性的相關(guān)性研究

王毅鵬，金醒昉，何 燕，楊文慧，魏云鴻

目的 探討老年高血壓并抑郁癥與血管緊張素原(AGT)基因G-6A位點(diǎn)基因多態(tài)性的關(guān)系。方法 選擇2010年12月—2013年11月昆明市延安醫(yī)院干療/老年病科及云南省精神病院收治的老年高血壓患者400例，根據(jù)患者是否并發(fā)抑郁癥分為高血壓并抑郁癥組和高血壓組，各200例；另選取同期就診于昆明市延安醫(yī)院體檢中心的200例老年體檢健康者作為健康對照組。采用基因測序方法檢測AGT基因G-6A位點(diǎn)基因多態(tài)性。結(jié)果 (1)高血壓并抑郁癥組和高血壓組AGT基因G-6A位點(diǎn)G/G基因型所占比例高于健康對照組、A/A基因型所占比例低于健康對照組，高血壓并抑郁癥組AGT基因G-6A位點(diǎn)GG基因型所占比例高于高血壓組(P<0.05)。(2)高血壓并抑郁癥組和高血壓組等位基因頻率分布分別與健康對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，OR(95%CI)分別為3.389(2.475，4.651)、2.336(1.698，3.215)；高血壓并抑郁癥組和高血壓組等位基因頻率分布比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，OR(95%CI)為1.452(1.094，1.928)。結(jié)論 AGT基因G-6A位點(diǎn)基因多態(tài)性與老年高血壓并抑郁癥遺傳易患性有關(guān)，攜帶AGT基因G-6A位點(diǎn)G/G基因型及G等位基因的高血壓患者患抑郁癥的風(fēng)險(xiǎn)較高，攜帶AGT基因G-6A位點(diǎn)A/A基因型及A等位基因的人群患高血壓及高血壓并抑郁癥的風(fēng)險(xiǎn)較低。

血管緊張素原；老年人；高血壓；抑郁癥；基因多態(tài)性

國內(nèi)外眾多研究發(fā)現(xiàn)，抑郁癥與心血管疾病有關(guān)，特別是與高血壓關(guān)系密切[1]。流行病學(xué)研究表明，高血壓與抑郁癥的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，心血管疾病患者常伴有抑郁癥狀，其中高血壓患者抑郁癥患病率明顯增高[2]。目前，隨著社會老齡化進(jìn)程加快，老年人口數(shù)量日益增多，人均壽命明顯延長，老年高血壓合并抑郁癥的發(fā)生率越來越高，但其發(fā)生機(jī)制尚不明確。高血壓和抑郁癥均具有明顯的家族聚集性，提示高血壓和抑郁癥的發(fā)病機(jī)制可能與遺傳有關(guān)。有研究顯示，血管緊張素原(Angiotensinogen，AGT)基因多態(tài)性與高血壓有關(guān)，與抑郁癥可能也有關(guān)，但其在老年高血壓并抑郁癥的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著怎樣的作用目前尚不明確。因此，本研究對老年高血壓并抑郁癥與AGT基因 G-6A位點(diǎn)基因多態(tài)性的相關(guān)性進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選擇2010年12月—2013年11月昆明市延安醫(yī)院干療/老年病科及云南省精神病院收治的老年高血壓患者400例，根據(jù)患者是否并發(fā)抑郁癥分為高血壓并抑郁癥組和高血壓組，各200例，均為昆明地區(qū)漢族人。高血壓的診斷參照第7版《內(nèi)科學(xué)》中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，抑郁癥的診斷參照第3版《國際精神與行為障礙分類診斷標(biāo)準(zhǔn)(ICD-10)》中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，均排除腦意外急性期、近期有手術(shù)、創(chuàng)傷或精神性創(chuàng)傷等應(yīng)激狀態(tài)、精神分裂癥等其他精神疾病、繼發(fā)性高血壓、感染、肝腎功能不全、自身免疫性疾病及腫瘤、試驗(yàn)前1周服用過血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑和血管緊張素受體阻滯劑患者。另選取同期就診于昆明市延安醫(yī)院體檢中心的200例老年體檢健康者作為健康對照組，排除高血壓、腦梗死、神經(jīng)疾病、心理疾病、自身免疫性疾病、癌癥及其他慢性疾病。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本采集 采用乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid，EDTA)抗凝管，取受檢者空腹(禁食12 h后)靜脈血2 ml，置于-80 ℃冰箱中保存，為提取基因組DNA做準(zhǔn)備。

1.2.2 DNA的提取 采用AXYGEN公司“AxyPrep血基因組DNA試劑盒”從收集到的全血標(biāo)本中提取基因組DNA，保存于-80 ℃冰箱中。

1.2.3 目的片段聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR) (1)根據(jù)AGT基因G-6A位點(diǎn)特征，用軟件Primer 5.0設(shè)計(jì)引物序列，交由上海生物工程有限公司(Sangon)合成引物，G-6A位點(diǎn)上游引物序列為5′-ATCTGGCTGTGCTATTGTTGG-3′，下游引物序列為5′-ACATCTGAGAGAGACAAGACCGA-3′，PCR目的片段長度為706 bp。(2)PCR：選用25 μl PCR體系，由PCR Master Mix(2×)12.5 μl(Fermentas公司)、上下游引物各0.5 μl、DNA模板3 μl、滅菌無核酸酶水8 μl組成，放置于梯度PCR儀(美國BIO-RAD公司)中進(jìn)行反應(yīng)，PCR條件為95 ℃變性5 min后，按94 ℃變性30 s，58 ℃退火35 s，72 ℃延伸40 s，以上三步循環(huán)35次，最后72 ℃延伸5 min。PCR完成后用瓊脂糖凝膠電泳對PCR產(chǎn)物進(jìn)行檢驗(yàn)。

1.2.4 PCR產(chǎn)物純化 將PCR產(chǎn)物用AxyPrep PCR清潔試劑盒(Axygen公司)進(jìn)行純化。

1.2.5 基因測序 將純化后的PCR產(chǎn)物送到上海生物工程有限公司進(jìn)行基因測序，儀器為ABI-PRISM3730，試劑為BigDyeterminator v3.1。

2 結(jié)果

2.1 3組基本資料比較 3組受檢者性別、年齡、FBG、TC、TG及LDL-C比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；3組受檢者HDL-C和UA比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表1)。

表1 3組基本資料比較

注：FBG=空腹血糖，TC=總膽固醇，TG=三酰甘油，LDL-C=低密度脂蛋白膽固醇，HDL-C=高密度脂蛋白膽固醇，UA=血尿酸；與高血壓并抑郁癥組比較，*P<0.05；與高血壓組比較，△P<0.05

2.2 基因型分析 PCR目的產(chǎn)物電泳后，紫外線燈下可見706 bp長度電泳條帶(見圖1)?；驕y序見AGT基因G-6A位點(diǎn)的3種基因型(見圖2)。3組受檢者AGT基因G-6A位點(diǎn)基因型分布和等位基因頻率分布比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中高血壓并抑郁癥組和高血壓組AGT基因G-6A位點(diǎn)G/G基因型所占比例高于健康對照組、A/A基因型所占比例低于健康對照組，高血壓并抑郁癥組AGT基因G-6A位點(diǎn)G/G基因型所占比例高于高血壓組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。高血壓并抑郁癥組和高血壓組等位基因頻率分布與健康對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為60.330、27.758，P<0.05)，OR(95%CI)分別為3.389(2.475，4.651)、2.336(1.698，3.215)；高血壓并抑郁癥組和高血壓組等位基因頻率分布比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.697，P=0.010)，OR(95%CI)為1.452(1.094，1.928)。

表2 3組AGT基因G-6A位點(diǎn)基因型及等位基因頻率分布比較

〔n(%)〕

Table 2 Comparison of frequency distribution of genotype and allele about AGT gene G-6A site among 3 groups

組別例數(shù)基因型A/A A/G G/G等位基因頻率A G健康對照組200128(64 0)65(32 5)7(3 5)321(80 3)79(19 7)高血壓組20070(35 0)?114(57 0)16(8 0)?254(63 5)?146(36 5)高血壓并抑郁癥組20040(20 0)?▲138(69 0)22(11 0)?▲218(54 5)?▲182(45 5)χ2值84 25660 953P值0 0000 000

注：與健康對照組比較，*P<0.05；與高血壓組比較，▲P<0.05

圖1 AGT基因G-6A位點(diǎn)PCR擴(kuò)增目的片段的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

Figure 1 Results of agarose gel electrophoresis about AGT gene G-6A site PCR amplification fragment

圖2 AGT基因G-6A位點(diǎn)基因測序結(jié)果

3 討論

原發(fā)性高血壓簡稱高血壓，是以血壓升高為主要臨床表現(xiàn)的綜合征，其伴或不伴有多種心血管疾病危險(xiǎn)因素。血壓升高將影響多種重要臟器的結(jié)構(gòu)與功能，導(dǎo)致臟器功能衰竭，到目前為止高血壓仍是心血管疾病死亡的主要原因之一[2]。臨床流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，高血壓患者中抑郁癥發(fā)病率明顯升高，提示高血壓與抑郁癥間具有重要聯(lián)系[3-4]。隨著社會老齡化進(jìn)程的加快，老年人口數(shù)量日益增多，同時人們生活節(jié)奏加快、壓力增加，導(dǎo)致老年高血壓并抑郁癥的發(fā)生率越來越高。張帆等[5]對2 274例高血壓患者進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)抑郁癥發(fā)生率為5.7%；馬麗娜等[6]研究結(jié)果顯示，老年高血壓患者抑郁癥發(fā)生率為38.36%。

腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin system，RAS)在調(diào)節(jié)水鹽代謝、維持血管張力等方面作用重大[7]，其活性升高在高血壓發(fā)生發(fā)展中的作用已明確，并有研究顯示其可能增加抑郁癥相關(guān)危險(xiǎn)[8]。RAS是一個激素系統(tǒng)，主要包括腎素、AGT、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶、血管緊張素Ⅱ1型受體及功能產(chǎn)物血管緊張素Ⅱ。1992年Jeunemaitre等[9]在高血壓同胞配對研究中首次發(fā)現(xiàn)AGT基因與高血壓有關(guān)。在腎素作用下主要由肝臟合成和釋放的AGT可轉(zhuǎn)化為血管緊張素Ⅰ，在血管緊張素轉(zhuǎn)換酶作用下血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)換為血管緊張素Ⅱ。血管緊張素Ⅱ與位于靶器官的血管緊張素Ⅱ受體結(jié)合可刺激AGT合成增多，使血液循環(huán)中AGT水平升高，AGT升高又使血管緊張素Ⅱ生成增加，引起血管收縮，從而導(dǎo)致個體血壓發(fā)生改變[10-11]。有研究表明，AGT作為血管緊張素Ⅱ前體，其在腎素、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶等作用下可最終生成血管緊張素Ⅱ[12]。血管緊張素Ⅱ具有縮血管、調(diào)節(jié)水鹽代謝、增加心肌收縮力和神經(jīng)系統(tǒng)功能作用，從而引起血壓升高[13]。因此，AGT通過影響血管緊張素Ⅱ產(chǎn)生數(shù)量而達(dá)到調(diào)節(jié)血壓的作用。AGT是血管緊張素Ⅱ前體，是RAS系統(tǒng)的唯一底物，血管緊張素Ⅱ水平能隨著AGT水平增加而升高，最終導(dǎo)致血壓升高。

早在2005年Zobel等[14]就指出，焦慮抑郁是一種慢性應(yīng)激狀態(tài)，通過束縛試驗(yàn)或強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)形成長期慢性應(yīng)激可建立抑郁癥的動物模型。徐曙等[8]認(rèn)為，老年抑郁癥患者在慢性應(yīng)激作用下可激活RAS系統(tǒng)，促使AGT水平升高，最終導(dǎo)致血管緊張素Ⅱ等效應(yīng)終產(chǎn)物增加。血管緊張素Ⅱ與抑郁焦慮關(guān)系的作用機(jī)制可能如下：(1)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，血管緊張素Ⅱ的主要作用是調(diào)節(jié)單胺類纖維釋放神經(jīng)遞質(zhì)，涉及多巴胺和多巴胺與5-羥色胺(5-HT)平衡的調(diào)節(jié)；(2)在動物實(shí)驗(yàn)中，血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)的類似抗抑郁作用可以被納洛酮逆轉(zhuǎn)，說明血管緊張素Ⅱ與阿片樣受體的作用有關(guān)，也說明抑郁與阿片系統(tǒng)功能降低有關(guān)[15]。有研究發(fā)現(xiàn)，抑郁癥可引起自主神經(jīng)系統(tǒng)功能和下丘腦-垂體-腎上腺軸功能調(diào)節(jié)紊亂，從而增加血管緊張性及血管阻力，不利于血壓的控制[16]。

可見，高血壓與抑郁癥的發(fā)病均與RAS系統(tǒng)密切相關(guān)，而在發(fā)現(xiàn)高血壓和抑郁癥具有家族聚集傾向的基礎(chǔ)上，AGT作為RAS的唯一底物，其基因多態(tài)性也將成為影響高血壓與抑郁癥發(fā)生發(fā)展的重要因素。本研究結(jié)果顯示，高血壓并抑郁癥組AGT基因G-6A位點(diǎn)G/G基因型及G-6A位點(diǎn)G等位基因分布頻率均高于健康對照組和高血壓組，同時，健康對照組AGT基因 G-6A位點(diǎn)A/A基因型及A等位基因分布頻率均高于高血壓并抑郁癥組和高血壓組。以上結(jié)果提示攜帶AGT基因G-6A位點(diǎn)G/G基因型及G-6A位點(diǎn)G等位基因的高血壓患者及健康人群抑郁癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)較高，攜帶G-6A基因G-6A位點(diǎn)A/A基因型及A等位基因的人群患高血壓及高血壓并抑郁癥的風(fēng)險(xiǎn)較低。通過Genebank查詢AGT基因序列發(fā)現(xiàn)，G-6A位點(diǎn)位于核心啟動子區(qū)域，推測這個基因位點(diǎn)的基因多態(tài)性可能會影響到AGT轉(zhuǎn)錄的基礎(chǔ)速率，從而使后續(xù)翻譯產(chǎn)生的AGT蛋白水平發(fā)生差異，從而導(dǎo)致個體血壓、神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)遞質(zhì)的不同變化，最終影響到高血壓并抑郁癥的發(fā)生發(fā)展。

總之，AGT基因G-6A位點(diǎn)基因多態(tài)性在高血壓及高血壓并抑郁癥的發(fā)生發(fā)展中具有重要價(jià)值，攜帶AGT基因G-6A位點(diǎn)G/G基因型及G等位基因的高血壓患者患抑郁癥的風(fēng)險(xiǎn)較高，攜帶AGT基因G-6A位點(diǎn)A/A基因型及A等位基因的人群患高血壓及高血壓并抑郁癥的風(fēng)險(xiǎn)較低。因此，檢測高血壓患者AGT基因G-6A位點(diǎn)的基因型及等位基因頻率，可以作為預(yù)測高血壓患者發(fā)生抑郁癥的一項(xiàng)重要指標(biāo)，為進(jìn)一步探索高血壓并抑郁癥的發(fā)病機(jī)制提供了一個新的研究方向。

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(本文編輯：謝武英)

Correlation between Aged Hypertension Complicated with Depression and Angiotensinogen G-6A Gene Polymorphism

WANGYi-peng，JINXing-fang，HEYan，etal.Yan′anHospitalofKunming,Kunming650051，China

Objective To investigate the correlation between aged hypertension complicated with depression and angiotensinogen G-6A gene polymorphism.Methods From December 2010 to November 2013,400 aged hypertension patients were selected in the Department of Geriatrics，Yan′an Hospital of Kunming and Yunnan Provincial Mental Hospital，and they were divided into groups A(with depression)and B(without depression)according to the incidence of depression，each of 200 cases.A total of 200 healthy cases were selected as control group in the Physical Examination Center of Yan′an Hospital of Kunming at the same time.Gene sequencing method was used to detect the angiotensinogen G-6A gene polymorphism.Results The proportion of G/G genotype of groups A and B were higher than that of control group，respectively，while the proportion of A/A genotype was lower，respectively(P<0.05)；the proportion of G/G genotype of A groups was higher than that of B group(P<0.05).There was statistically significant differences of allele frequency among the three groups(P>0.05)，and the OR(95%CI)of groups A and B was 3.389(2.475，4.651)，2.336(1.698，3.215)when compared with control group.There was statistically significant differences of allele frequency between groups A and B(P>0.05)，and the OR(95%CI)of A group was 1.452(1.094，1.928)when compared with B group.Conclusion angiotensinogen G-6A gene polymorphism is correlated with the hereditary susceptibility of aged hypertension complicated with depression，G/G genotype and G allele can increase the risk of depression in hypertension patients，A/A genotype and A allele can reduce the risk of hypertension and hypertension complicated with depression.

Angiotensinogen；Aged；Hypertension；Depressive disorder；Genetic polymorphism

云南省科技廳計(jì)劃項(xiàng)目(2010ZC200)：老年高血壓并抑郁癥與血管緊張素原基因多態(tài)性的相關(guān)性研究

650051云南省昆明市延安醫(yī)院

魏云鴻，650051云南省昆明市延安醫(yī)院；E-mail：66560309@qq.com

R 544.1 R 749.41

A

10.3969/j.issn.1008-5971.2015.02.013

2014-09-16；

2015-01-21)

王毅鵬，金醒昉，何燕，等.老年高血壓并抑郁癥與血管緊張素原G-6A位點(diǎn)基因多態(tài)性的相關(guān)性研究[J].實(shí)用心腦肺血管病雜志，2015，23(2)：42-45.[www.syxnf.net]

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