凱美欣對大鼠亞慢性毒性作用分析

李莉莎，倪宏波*

（黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院，黑龍江大慶 163363）

凱美欣對大鼠亞慢性毒性作用分析

李莉莎，倪宏波*

（黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院，黑龍江大慶 163363）

凱美欣，主要活性成分為磺胺氯噠嗪鈉（Sulfachlorphrazine，SPZ）和按一定比例添加甲氧芐啶（Trimethoprim，TMP）。本實驗主要檢測該復(fù)方藥物及其主要方劑通過對大鼠灌服不同劑量的凱美欣后的臨床癥狀、血液指標(biāo)和病理變化等，對藥物的安全性進行檢測分析。

1 實驗材料

1.1 試劑

SPZ原粉；瑞氏染液；BUN、CREA、SOD、MDA、C-GT、AKP、尿蛋白、尿NAG測定試劑盒；二甲苯；蘇木精；伊紅；阿氏液等。生理鹽水、無菌注射用水、灌胃針、胃導(dǎo)管、若干一次性1ml注射器。

1.2 實驗動物

大鼠80只，體重180g。所有動物試驗前進行臨床檢查，觀察一周，試驗期間常規(guī)飼養(yǎng)。

1.3 儀器設(shè)備

電子分析天平，離心機，漩渦振蕩器，組織切片機。

2 實驗方法

2.1 實驗動物分組

大鼠共80只，隨機分成5組，雌雄各半，16只/組。第Ⅰ-Ⅳ組為試驗組，根據(jù)藥品對大鼠LD50的測定，結(jié)果由低到高設(shè)為正常量、5倍、10倍和20倍組，第Ⅴ組為對照組。第Ⅰ-Ⅳ組中大鼠按20～30mg/kg·bw的劑量分別灌服不同梯度的凱美欣，第Ⅴ組灌服1mL生理鹽水作對照。每1d灌服1次，連續(xù)給藥2周。每日觀察，在7、14、21d時稱重，代謝取尿，剖殺取血。

2.2 實驗動物給藥

在大鼠盒內(nèi)固定好其頭部,使腹部輕貼在盒內(nèi)壁上，處于自然站姿。右手持灌胃器，從大鼠左嘴角緩慢進針，用針輕壓其上腭使口腔與食道成一直線，等灌胃針深入約5cm時，用食指輕推注射器的活塞使藥液緩慢入胃。

2.3 實驗動物樣本采集

（1）尿液將載玻片置于大鼠籠內(nèi)，任其小便于玻片上；輕壓大鼠后下腹部，使其直接排尿在玻片上；用1mL注射器吸取排于實驗臺上的尿液。

（2）血液鼠尾采血：用50℃左右的溫水浸泡尾部約2min，待充血后用酒精棉消毒，剪去尾尖5～10mm，從尾根部向尾尖按摩，血自會流出。心臟采血：用乙醚將大鼠迷暈，使腹側(cè)朝上，針頭緊貼胸部劍突下，緩慢進針，發(fā)現(xiàn)針頭泵入少量血液時將采血針軟管的另一頭插入真空采血管內(nèi)，血液即可大量流出。

2.4 血常規(guī)檢測

每次選取5只大鼠，采血待檢。檢測包括血液中的白細胞、紅細胞、淋巴細胞、血小板計數(shù)以及血紅蛋白的含量。

2.5 血液生化檢測

包括肝功能的檢測和腎功能的檢測。每次選取五只大鼠，分離出肝、腎臟，采集血清直接用ELISA試劑盒檢測。肝臟功能主要檢測GGT、AKP、ALT、甘油三脂、總蛋白、白蛋白等。腎臟功能主要檢測：血清尿素氮和肌酐。

2.6 臟器指數(shù)測定

隨機選擇采樣大鼠，剖殺前稱重，每組剖殺5只，取其主要臟器稱重，計算大鼠的各臟器指數(shù)。臟器指數(shù)即臟器重量（mg）與活體體重（g）的比值。

2.7 病理解剖學(xué)與組織學(xué)檢測

（1）病理解剖學(xué)觀察：剖殺大鼠，取出主要臟器如肝臟、脾臟、腎臟等，觀察其病變。

（2）病理組織學(xué)檢查：將已有病變的器官，浸于10%的福爾馬林中，石蠟固定切片，H.E.染色，置于光鏡下觀察。

3 實驗結(jié)果

3.1 血常規(guī)檢測結(jié)果

將血常規(guī)主要檢測指標(biāo)結(jié)果分別用折線圖表示。白細胞數(shù)量介于9×109/L～14×109/L之間，個別數(shù)據(jù)低于或高于這個區(qū)間；除20倍量組部分個體以外，紅細胞計數(shù)絕大多數(shù)介于6×1012/L～10×1012/L之間；血紅蛋白含量介于140～200g/L，少數(shù)超出此范圍；血小板數(shù)據(jù)點折線圖在500× 109/L～700×109/L范圍內(nèi)，淋巴細胞（LY%）均在70%～90%之間。結(jié)果表明，各劑量組數(shù)據(jù)保持比較穩(wěn)定的走勢，無顯著差異。

3.2 血液生化檢測結(jié)果

血液是運輸動物機體營養(yǎng)物質(zhì)和代謝廢物的載體，也是機體實現(xiàn)體液調(diào)節(jié)的途徑。血液的生化指標(biāo)反映機體全身或局部帶些變化和組織正常生理功能較為敏感的指標(biāo)。

3.2.1 肝功能指標(biāo)（1）酶是細胞的物質(zhì)成分，是生物體內(nèi)物質(zhì)代謝的催化劑。谷-丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）是動物肝細胞的細胞核及線粒體中重要的轉(zhuǎn)氨酶，與氨基酸、蛋白質(zhì)的代謝有關(guān)，反映動物肝損傷的敏感性。ALT介于40～70U/L之間，AST除20倍組個別數(shù)據(jù)有差異，其他保持在150～250U/L。堿性磷酸酶主要存在于骨化的軟骨組織中，與骨鹽沉積、骨膠原蛋白的形成和動物正常生長發(fā)育密切相關(guān)，數(shù)據(jù)點顯示各組ALP、GGT數(shù)據(jù)大體穩(wěn)定，無明顯變化。

（2）甘油三酯（TG）和總膽固醇（CHOL）的水平反映動物機體內(nèi)脂類代謝狀況。TG是人體內(nèi)含量最多的脂類，在0.8～1.5mmol/L范圍內(nèi)；膽固醇是動物組織細胞中不可或缺的重要物質(zhì)，試驗數(shù)據(jù)多在0.7～1.2mmol/L內(nèi)；葡萄糖（GLU）指標(biāo)趨于8～15mmol/L之間，各組數(shù)據(jù)基本無差異。

（3）總蛋白（TP）可以反映肝臟合成蛋白質(zhì)的能力。白蛋白是衡量肝臟功能的重要指標(biāo)?？偟鞍孜挥?0g/L～90g/L之間，白蛋白介于20～35g/L，球蛋白介于30～50g/L，有各數(shù)據(jù)點折線圖分析可知，各組指標(biāo)大體保持穩(wěn)定。

3.2.2 腎功能指標(biāo)血清尿素氮（BUN）和肌酐（CREA）是反映腎功能的重要檢測指標(biāo)。BUN的濃度與動物體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝和氨基酸平衡狀況息息相關(guān)。肌酐是肌酸的代謝產(chǎn)物，在體內(nèi)生成的量是相對恒定的，絕大部分由腎小球濾過后排出體外。血清尿素氮在各劑量組中比較穩(wěn)定，在3～5mmol/L之間。肌酐指標(biāo)在25～40umol/L范圍內(nèi)，各組之間無顯著性差異性。

3.3 臟器指數(shù)測定結(jié)果

從取樣后的三組指數(shù)得知，對照組與各實驗組的胸腺、脾、腎、肝的臟器指數(shù)均在正常參考值范圍內(nèi)，各給藥組的指標(biāo)差異不顯著（P＞0.05），不同劑量的凱美欣對實驗動物的正常生長發(fā)育并無明顯影響。

3.4 病理解剖學(xué)與組織學(xué)檢測結(jié)果

用肉眼觀察對照組與試驗各組的各個取樣臟器表面、內(nèi)膜均無淤血等現(xiàn)象，胸腔、腹腔均無積液等病理改變，各組織臟器正常，未見異常的病理變化。無論是在40×還是200×顯微鏡下觀察組織切片不難發(fā)現(xiàn)：對照組與各實驗組雖用藥劑量不同，但對脾臟、腎臟及肝臟并未產(chǎn)生致病作用，可清晰的看到各器官無明顯的病理變化，說明這種復(fù)方藥物對大鼠的肝臟、腎臟等主要器官為造成毒性影響，無毒副作用可以應(yīng)用到生產(chǎn)中。

4 討論

給藥后試驗動物活動量減少，精神不振，排泄物呈藥物顏色，說明動物機體在灌服藥液后產(chǎn)生了反應(yīng)，隨后每日灌服機體也恢復(fù)正常且試驗期間無一死亡。與對照組相比，試驗各組指標(biāo)趨于穩(wěn)定，無顯著差異（P＞0.05），證明了凱美欣這種復(fù)方磺胺類藥物對大鼠的正常生長發(fā)育無不良影響。從病理解剖學(xué)與組織學(xué)檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)試驗大鼠并未產(chǎn)生任何的毒副作用和不良反應(yīng)，在短期內(nèi)使用此藥有一定的安全性。同時磺胺類藥物也因療效顯著且價格低廉，性質(zhì)穩(wěn)定，吸收快等優(yōu)點適用于臨床應(yīng)用，但為了確保長期使用的安全性還可進行深入探究。

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10．3969/J.ISSN．1671-6027．2015．05.021

李莉莎（1987～），黑龍江哈爾濱人，碩士研究生

★通信作者：倪宏波