慢性粒細(xì)胞白血病的生物治療

袁小飛，高炳華

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院血液科，河北張家口075000)

慢性粒細(xì)胞白血病(chronic myeloid leukemia，CML)臨床較常見(jiàn)，是造血干細(xì)胞的惡性克隆增殖性疾病。骨髓或外周血干細(xì)胞移植是CML治療的主要方案，但因供體的缺乏，加之移植手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)較大，導(dǎo)致臨床治愈率偏低。腫瘤細(xì)胞的生物治療是以分子生物學(xué)、免疫學(xué)等前沿科學(xué)為基礎(chǔ)，通過(guò)調(diào)節(jié)或增強(qiáng)機(jī)體原本固有的內(nèi)在防御機(jī)制，達(dá)到抑制或消除惡性腫瘤的目的，主要包括分子靶向治療、免疫治療、基因治療等。

1 發(fā)病的分子機(jī)制

CML主要表現(xiàn)為Ph染色體t(9;22)(q34;q11)細(xì)胞遺傳學(xué)的陽(yáng)性特征，Ph染色體由位于第22號(hào)染色體bcr基因與第9號(hào)染色體的c-abl原癌基因易位，而形成表達(dá)P210bcr-abl融合蛋白的bcr-abl融合基因。研究［1-2］證實(shí)，P210bcr-abl融合蛋白的酪氨酸激酶活性(PTK)異?；钴S，可降低細(xì)胞對(duì)骨髓基質(zhì)的黏附性，引起造血細(xì)胞過(guò)度增殖，進(jìn)而造成基質(zhì)細(xì)胞、造血細(xì)胞、細(xì)胞內(nèi)黏附分子介導(dǎo)的膜信號(hào)相互作用，引起細(xì)胞凋亡障礙。該融合蛋白上包含位于abl區(qū)的肌動(dòng)蛋白結(jié)合區(qū)、DNA結(jié)合區(qū)、核定位信號(hào)區(qū)、SHZ和SH3結(jié)構(gòu)域、酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域等，這些功能結(jié)構(gòu)域通過(guò)銜接蛋白分子相互作用，可激活NF-κB、PI3KAKT、Ras-Raf-MAPK等多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，促進(jìn)Bcl-XL蛋白表達(dá)，抑制促凋亡蛋白活性及線粒體釋放促凋亡蛋白，阻止DNA片段化和Caspase-3的活化，從而抑制細(xì)胞凋亡。

2 基因治療

2.1 通過(guò)基因轉(zhuǎn)染使腫瘤細(xì)胞抗原標(biāo)志過(guò)度表達(dá)，而起到抗腫瘤作用 梁偉等［3］針對(duì)siRNA轉(zhuǎn)染K562細(xì)胞，研究了抑制甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT)對(duì)K562細(xì)胞中癌-睪丸抗原(CTA)表達(dá)的影響;正常情況下CTA在骨髓細(xì)胞及外周血細(xì)胞并無(wú)陽(yáng)性表達(dá)，但在髓性白血病細(xì)胞中CTA可存在不同程度、種類的表達(dá)。朱雪姣等［4］在LipofectamineTM 2000介導(dǎo)下，對(duì)阿糖胞苷(Ara-C)的藥物敏感性與AMO-miR-21轉(zhuǎn)染及與Pdcd4(miRNA-21的靶基因)的關(guān)系進(jìn)行研究，結(jié)果表明 AMO-miR-21、Ara-C聯(lián)合使用，可促進(jìn)細(xì)胞凋亡，提高藥物敏感性。AMO-miR-21可顯著抑制miRNA-21表達(dá)，同時(shí)增強(qiáng)Pdcd4表達(dá)，表明AMO-miR-21可抑制miRNA-21表達(dá)，并參與Pdcd4的調(diào)控，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。JTV1基因是致癌基因C-myc的負(fù)性調(diào)控因子，同時(shí)具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用。吳燕等［5］將攜帶有JTV1基因的pcDNA3·1-JTV1載體轉(zhuǎn)染人K562細(xì)胞，觀察其對(duì)人白血病K562細(xì)胞系的影響。結(jié)果表明，JTV1基因表達(dá)上調(diào)后，可顯著降低K562細(xì)胞的增殖能力，并可升高G期細(xì)胞比例及mRNA水平，提示JTV1基因高表達(dá)能促進(jìn)K562腫瘤細(xì)胞凋亡。

2.2 通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞增殖、下調(diào)相關(guān)原癌基因表達(dá)來(lái)發(fā)揮抗腫瘤作用 劉媛媛等［6］研究Apolloon反義寡核苷酸的轉(zhuǎn)錄對(duì)K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響。Apollon的BIR序列是其抑制caspase活性、抗凋亡的重要結(jié)構(gòu)。Apollon特有的結(jié)構(gòu)域UBC能夠加強(qiáng)Apollon的抗凋亡作用，研究者以脂質(zhì)體作為載體，將Apollon錯(cuò)義寡核苷酸、反義寡核苷酸通過(guò)脂質(zhì)體導(dǎo)入白血病細(xì)胞株K562，通過(guò)流式細(xì)胞儀的檢測(cè)顯示，Apollon反義寡核苷酸可促進(jìn)K562細(xì)胞凋亡，有效抑制K562細(xì)胞的增殖，Apollon錯(cuò)義寡核苷酸則無(wú)明顯作用，提示應(yīng)用反義寡核苷酸技術(shù)封閉Apollon表達(dá)，可促進(jìn)白血病細(xì)胞凋亡，進(jìn)而達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞增殖的目的。楊玉枝等［7］研究顯示，manumycin能夠下調(diào)K562細(xì)胞中survivin蛋白的表達(dá)，起到抑制細(xì)胞增殖的作用。manumycin是法尼?；D(zhuǎn)移酶的特異性抑制劑，可與FPP競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合法尼酰基轉(zhuǎn)移酶，干擾細(xì)胞膜上Ras蛋白的功能及Ras基因的表達(dá)，啟動(dòng)細(xì)胞凋亡通路，阻斷腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)信號(hào)通路。

3 過(guò)繼免疫治療

過(guò)繼免疫治療(ACI)是指將具有介導(dǎo)抗腫瘤效應(yīng)的免疫細(xì)胞直接或單位注入腫瘤內(nèi)的治療手段，主要為細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)的移植治療，CIK細(xì)胞是具有細(xì)胞毒活性的殺傷性細(xì)胞，由多種細(xì)胞因子共同培養(yǎng)而成，殺瘤活性高，增殖能力亦較強(qiáng)［8］。馬杰等［9］研究刺激因子對(duì) NK細(xì)胞增殖的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，添加IL-2、IL-15可使NK細(xì)胞有效活化和高效擴(kuò)增，并可顯著提高K562細(xì)胞的殺傷作用，提示高純度的NK細(xì)胞對(duì)正常的淋巴細(xì)胞無(wú)明顯細(xì)胞毒活性，但對(duì)腫瘤細(xì)胞株具明顯的殺傷功能。

4 結(jié)語(yǔ)

隨著現(xiàn)代腫瘤學(xué)研究的不斷深入，抗癌治療將從細(xì)胞毒性藥物攻擊向非細(xì)胞毒性藥物調(diào)節(jié)進(jìn)行轉(zhuǎn)變，在未來(lái)，生物、基因療法將成為抗癌治療的主流。ACI聯(lián)合分子靶向藥物可以實(shí)現(xiàn)協(xié)同效應(yīng)，可能會(huì)對(duì)提高腫瘤患者生存時(shí)間及生存質(zhì)量起到良好的效果［10］。

［1］J?R?S M，JOHNELS P，AGERSTAM H，et al.Expression of P190 and P210 BCR/ABL1 in normal human CD34(+)cells induces similar gene expression profiles and results in a STAT5-dependent expansion of the erythroid lineage［J］.Experimental Hematology，2009，37(3):367-375.

［2］ANDREU E J，LLEDóE，POCH E，et al.BCR-ABL induces the expression of Skp2 through the PI3K pathway to promote p27Kip1 degradation and proliferation of chronic myelogenous leukemia cells［J］.Cancer Research，2005，65(8):3264-3272.

［3］梁偉，徐蘭，楊榮秉，等.DNA甲基轉(zhuǎn)移酶基因干擾對(duì)K562細(xì)胞癌-睪丸抗原表達(dá)的影響［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011，11(20):3801-3804，3808.

［4］朱雪姣，李育敏，谷景義，等.靶向抑制miRNA-21提高白血病K562細(xì)胞對(duì)阿糖胞苷的敏感性［J］.生命科學(xué)研究，2011，15(4):317-322.

［5］吳燕，劉北忠，王翀，等.JTV1對(duì)K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其機(jī)制［J］.解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2011，36(5):452-455.

［6］劉媛媛，賈秀紅，李建廠，等.Apolloon反義寡核苷酸對(duì)K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響［J］.腫瘤防治研究，2011，38(6):636-638.

［7］楊玉枝，馬寧，許穎，等.Manumycin對(duì)人髓系白血病細(xì)胞株K562細(xì)胞的增殖抑制作用［J］.吉林大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2011，37(6):1098-1101.

［8］KIM H M，LIM J，YOON Y D，et al.Anti-tumor activity of ex vivo expanded cytokine-induced killer cells against human hepatocellular carcinoma［J］.International Immunopharmacology，2007，7(13):1793-1801.

［9］馬杰，趙衛(wèi)東，張麗娜，等.不同刺激因子組合誘導(dǎo)NK細(xì)胞體外擴(kuò)增及其功能的研究［J］.免疫學(xué)雜志，2011，27(6):510-513，518.

［10］張碧紅，吳燕峰，岑丹陽(yáng)，等.IL-2和IL-15刺激臍血NK細(xì)胞對(duì)K562/Jurkat細(xì)胞的殺傷活性研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2011，19(2):358-362.