TNF-α-308位點(diǎn)基因多態(tài)性與阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征的相關(guān)性分析

朱琳琳，麥靜愔(上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院，上海200021)

TNF-α-308位點(diǎn)基因多態(tài)性與阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征的相關(guān)性分析

朱琳琳，麥靜愔
(上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院，上海200021)

摘要:目的探討TNF-α-308位點(diǎn)基因多態(tài)性與阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(OSAHS)的相關(guān)性。方法采用PCR產(chǎn)物直接測(cè)序法，對(duì)上海地區(qū)200例OSAHA患者(OSAHA組)和200例健康體檢者(對(duì)照組)進(jìn)行TNF-α-308位點(diǎn)基因多態(tài)性檢測(cè)。結(jié)果TNF-α-308位點(diǎn)存在GG、GA和AA三種基因型。OSAHA組與對(duì)照組GA基因型頻率分別為23.0%和15.5%，AA基因型頻率分別為15.0%和1.5%，A等位基因頻率分別為25.6%和9.6%，OSAHA組均明顯高于對(duì)照組(P＜0.05或＜0.01)。多因素Logistic回歸分析顯示，GA基因型(OR =1.13，95%CI: 1.11～1.16)、AA基因型(OR =1.23，95%CI: 1.17～1.29)、A等位基因(OR =1.06，95%CI: 1.05～1.07)為OSAHS的易感因素，P均＜0.01。結(jié)論OSAHA的發(fā)病與TNF-α-308位點(diǎn)基因多態(tài)性存在相關(guān)性，攜帶AA基因型者發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)較高。

關(guān)鍵詞:阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征;多態(tài)性; TNF-α基因

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(OSAHS)是一種常見的睡眠障礙性疾病，具有家族聚集性和遺傳性［1］;近年來(lái)遺傳因素在OSAHS中的重要性日益受到重視，但結(jié)論不一［2，3］。關(guān)于OSAHS與易感因素相關(guān)性的研究逐漸成為研究的熱點(diǎn)。本研究選取上海地區(qū)200例OSAHS患者為研究對(duì)象，對(duì)TNF-α-308位點(diǎn)進(jìn)行基因多態(tài)性檢測(cè)，探討其與OSAHS的相關(guān)性。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇2012～2014年在上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院呼吸科及睡眠呼吸監(jiān)測(cè)中心就診的OSAHS患者200例(OSAHS組)，其中男162例、女38例，年齡(49.2±8.7)歲。OSAHS患者均接受多導(dǎo)睡眠呼吸檢測(cè)，均符合《阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征診治指南》的診斷標(biāo)準(zhǔn)［1］。排除慢性呼吸系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病及其他感染性疾病。選擇同期健康體檢者200例作為對(duì)照組，其中男154例、女46例，年齡(47.7±6.8)歲。兩組性別、年齡具有可比性。所有入選者均系近三代為上海地區(qū)、彼此間無(wú)血緣關(guān)系的原住居民，且簽署書面的志愿書。本研究由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院的倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2多導(dǎo)睡眠呼吸監(jiān)測(cè)所有受試者在上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院睡眠監(jiān)測(cè)中心接受多導(dǎo)睡眠呼吸監(jiān)測(cè)(晚20: 00至次日晨8: 00)，采用澳大利亞生產(chǎn)的E型多導(dǎo)睡眠呼吸監(jiān)測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

1.3 TNF-α-308位點(diǎn)基因多態(tài)性檢測(cè)采用PCR產(chǎn)物直接測(cè)序法。采集兩組清晨空腹靜脈血5mL，注入含有EDTA的抗凝管中，搖勻，對(duì)樣本編號(hào)并登記，留取全血置于－80℃冷凍保存。標(biāo)本按照試劑盒說(shuō)明，使用離心柱型柱式血液基因組DNA抽提試劑盒進(jìn)行DNA提取，－20℃保存?zhèn)溆?。參照Sakao等［4］設(shè)計(jì)的引物，正向引物為5'-AGGCAATAGGTTTTGAGGGCCAT-3'，反向引物為5'-GAGCGTCTGCTGGCTGGGTG-3'。引物由北京鼎國(guó)生物工程公司合成。PCR反應(yīng)體系為35 μL: 10mmol/LdNTP混合物2 μL，10×Taq Buffer 3.5 μL，2U TaqdNA聚合酶，10 μmol/L上下游引物各1 μL，超純水補(bǔ)足至35 μL。所用試劑均購(gòu)置于北京鼎國(guó)生物工程公司。PCR擴(kuò)增條件: 95℃預(yù)變性5min; 95℃變性30 s，63℃退火40 s以及72℃延伸60 s共35個(gè)循環(huán);然后72℃延伸10min，最后4℃保存。將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物5mL加入預(yù)先加有溴化乙錠核酸染料的1.0%瓊脂糖凝膠中電泳(電壓120 V，20min)，在自動(dòng)成像分析儀上成像。PCR產(chǎn)物由北京鼎國(guó)公司進(jìn)行純化測(cè)序。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。直接計(jì)數(shù)法計(jì)算等位基因及基因型頻率，各組間基因型

和等位基因頻率的比較及Hardy-Weinberg遺傳平衡定律的吻合度檢驗(yàn)［5］采用χ2檢驗(yàn);計(jì)量資料以珋x±s表示，多因素調(diào)整采用Logistic回歸分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1 TNF-α-308位點(diǎn)基因多態(tài)性測(cè)序結(jié)果TNF-α-308位點(diǎn)存在GG、GA和AA三種基因型，見插頁(yè)Ⅱ圖6。統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)個(gè)體中三種基因型的數(shù)目，經(jīng)χ2檢驗(yàn)后基因型符合Hardy-Weinberg平衡定律(P＞0.05)，說(shuō)明本研究采用的研究對(duì)象具有群體代表性。

2.2 TNF-α-308位點(diǎn)基因型及等位基因頻率兩組TNF-α-308位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或＜0.01)。見表1。

表1　兩組TNF-α-308位點(diǎn)基因型和等位基因頻率比較［例(%)］

2.3TNF-α基因-308位點(diǎn)基因型及等位基因與OSAHS易感性的關(guān)系經(jīng)多因素Logistic回歸分析，GA基因型(OR = 1.13，95% CI: 1.11～1.16)、AA基因型(OR = 1.23，95% CI: 1.17～1.29)、A等位基因(OR =1.06，95% CI: 1.05～1.07)為OSAHS的易感因素(P均＜0.01)。

3　討論

人類TNF-α基因位于染色體6p21.1-p21.3區(qū)域。研究表明，TNF-α基因多態(tài)性主要存在其啟動(dòng)子上游，包括－1196C/T、－1031T/C、－863C/A、－857C/T、－572A/C、－376G/A、－316G/A、－308G/A、－238G/A、－204T/C和+ 489G/A［6］。Louis等［7］發(fā)現(xiàn)，TNF-α-308 G/A突變雜合子的TNF-α產(chǎn)量顯著性高于GG野生型，說(shuō)明在機(jī)體發(fā)生相同的病理刺激后，TNF-α-308突變影響TNF-α基因的表達(dá)量，進(jìn)而影響OSAHS的發(fā)生、發(fā)展。

本研究對(duì)TNF-α-308位點(diǎn)基因測(cè)序發(fā)現(xiàn)，OSAHS組GA和AA基因型頻率及A等位基因頻率均明顯高于對(duì)照組。經(jīng)多因素Logistic回歸分析，GA基因型、AA基因型、A等位基因?yàn)榛糘SAHS的易感因素，且攜帶GA基因型和攜帶AA基因型者患OSAHS的風(fēng)險(xiǎn)增加(1.13倍和1.23倍)，明顯大于攜帶GG基因型者。本研究結(jié)果與劉輝國(guó)等［8］、Wilson等［9］、關(guān)鍵等［10］、Riha等［11］的研究結(jié)果一致: A等位基因與OSASH的發(fā)病有相關(guān)性。

總之，TNF-α基因可能是OSAHS的一個(gè)遺傳候選基因，啟動(dòng)子上游第308位點(diǎn)基因多態(tài)性增加了對(duì)OSAHS的易感性。OSAHS是復(fù)雜的多基因遺傳病，不同種族人群之間的易感性可能存在一定的差異，在今后的研究中應(yīng)繼續(xù)擴(kuò)大樣本量，研究不同人群中TNF-α基因與OSAHS組易感性的相關(guān)性，同時(shí)對(duì)與OSAHS易感性相關(guān)的其他基因進(jìn)行研究為最終揭示OSAHS發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制提供更多的科學(xué)依據(jù)。

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收稿日期:( 2014-08-08)

通信作者:麥靜愔，E-mail:maijingyin@126.com

文章編號(hào):1002-266X(2015)36-0053-02

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B

中圖分類號(hào):R767.13

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.36.020