薄層色譜法鑒別金烏骨通膠囊中淫羊藿苷

徐作剛等

【摘要】目的：薄層色譜法鑒別金烏骨通膠囊中的淫羊藿苷。方法：采用薄層色譜法對制劑中含有淫羊藿苷進行定性鑒別。結果：薄層色譜法檢出淫羊藿苷，且斑點清晰。結論：該方法可作為金烏骨通膠囊中淫羊藿的定性鑒別方法，結果穩(wěn)定性、重復性較好。

【關鍵詞】金烏骨通膠囊；淫羊藿；薄層色譜

【中圖分類號】R2841【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2014）02-0012-02

金烏骨通膠囊是由金毛狗脊、木瓜、烏梢蛇、葛根、淫羊藿、姜黃、補骨脂等多味藥組成，具有滋補肝腎，祛風除濕，活血通絡的功效。用于肝腎不足，風寒濕痹，骨質疏松，骨質增生引起的腰腿酸痛、肢體麻木等癥[1]。其中淫羊藿具有補腎陽，強筋骨，袪風濕的作用，用于腎陽虛衰，陽痿遺精，筋骨痿軟，風濕痹痛，麻木拘攣[2]（P308）。淫羊藿藥材中主要含有淫羊藿苷、淫羊藿次苷、巫山淫羊藿苷、寶藿苷VI、生物堿、揮發(fā)油等。本實驗選用淫羊藿苷為對照對藥品中的淫羊藿進行定性鑒別，該方法簡便易操作，結果重復性較好。

1儀器與試藥

SK250LHC超聲波清洗器（上?？茖x器有限公司），梅特勒AG135電子天平，卡瑪Linomat5半自動點樣儀。淫羊藿苷對照品（批號：110737-200415）購于中國藥品生物制品檢定所；樣品和缺淫羊藿陰性樣品由貴州盛世龍方制藥有限公司提供，硅膠G預制板（批號：20090406）和硅膠G（批號：0110916）（青島海洋化工廠分廠）；水為純凈水（娃哈哈）；其它試劑均為分析純。

2方法[3]與結果

21提取方法的考察分別稱取金烏骨通膠囊內容物細粉10g，按下述方法處理：①加乙酸乙酯10ml，超聲提取15分鐘；②加70%乙醇溶液10ml，超聲提取30分鐘；③加甲醇10ml，超聲提取30分鐘；④加乙醇20ml，超聲提取30分鐘[2]（P307）。提取后，放冷，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇2ml超聲使溶解，靜置，取上清液為供試品溶液①-④。取缺淫羊藿陰性10g，照方法④提取，作為陰性對照溶液。另取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成1mg/ml的溶液，作為對照品溶液。

取上述各供試品溶液、陰性對照溶液、對照品溶液各3μl，點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水 （135：6：2 ） 靜置至澄清的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃下加熱至斑點顯色清晰。結果方法①無對應主斑點，方法②③主斑點清晰但背景較深，方法④主斑點清晰且背景較淺，陰性對照無干擾。故選取方法④為淫羊藿苷薄層鑒別的提取方法。

22展開系統(tǒng)的考察取三個批號金烏骨通膠囊按提取方法④分別制成供試品溶液。取供試品溶液、陰性對照溶液和對照品溶液各3μl，點于薄層板上，分別在下述各展開系統(tǒng)中展開：①硅膠G板，氯仿-甲醇-丁酮 （1：2：2）；②硅膠G板，氯仿-甲醇-水 （135：6：2）靜置至澄清的下層溶液；③硅膠H板，乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水 （10：1：1：1）[2]（P307）。展開后，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃下加熱至斑點顯色清晰。結果系統(tǒng)①分離效果差，系統(tǒng)②分離效果較好，主斑點位置居中，陰性無干擾，背景干擾小，系統(tǒng)③主斑點位置對應不理想，陰性對照無干擾。故選取系統(tǒng)②為淫羊藿苷薄層鑒別展開系統(tǒng)。

23顯色方法的考察取三個批號金烏骨通膠囊按提取方法④分別制成供試品溶液。取供試品溶液、陰性對照溶液和對照品溶液各3μl，分別點于硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水（135：6：2）靜置至澄清的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，分別以下述各方法顯色：①噴以5%三氯化鐵乙醇溶液，晾干，日光下檢視，顯墨綠色斑點；②噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，在紫外燈（365nm）下檢視，顯橙紅色熒光斑點；③噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃下加熱，日光下檢視，顯黃綠色斑點。結果顯色劑①斑點略顯模糊邊界不明顯，色彩與背景對比不強；顯色劑②斑點熒光較弱，與背景熒光混合較嚴重，斑點邊界不明顯，不易辨識；顯色劑③斑點顏色鮮明，與背景顏色對比較強，斑點邊界明顯；陰性對照無干擾。故選取顯色方法③為淫羊藿苷薄層鑒別的顯色方法。

24點樣量的考察取金烏骨通膠囊按提取方法④制成供試品溶液。取供試品溶液2、3、4、5、6μl、陰性對照溶液和對照品溶液各3μl，點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水 （ 135：6：2）靜置至澄清的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃下加熱至斑點顯色清晰。結果點樣量較小斑點不夠清晰，點樣量較大則背景顏色較深，點樣量5μl時斑點顯色清晰且背景干擾較小，陰性對照無干擾。

故選取5μl為淫羊藿苷薄層鑒別的點樣體積。

25耐用性考察按照國家藥典委員會“中藥分析方法驗證指導原則實施細則”的相關要求，進行以下耐用性考察：①溫度的考察：進行了低溫（4℃）、室溫（24℃）、高溫（40℃）的考察，分離結果均較好。②濕度的考察：進行了低濕度（25%）、中等濕度（60%）和高濕度（75%）的考察，結果表明在上述條件下都能較好分離。

3討論

淫羊藿為金烏骨通膠囊中的重要組成藥味，在生產(chǎn)中的質量控制和流通中監(jiān)督檢查均應將其作為藥品質量的指標之一，而原標準中此項目暫缺，本方法可對其進行有效補充。根據(jù)上述不同條件下的實驗結果進行組合，金烏骨通膠囊中淫羊藿苷的薄層色譜鑒別方法為：取本品內容物10g，加乙醇20ml，超聲提取30分鐘，放冷，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇2ml超聲使溶解，靜置，取上清液為供試品溶液。取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成1mg/ml的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水（135：6：2）靜置至澄清的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃下加熱，日光下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同黃綠色的斑點。

展開系統(tǒng)的考察中，系統(tǒng)③為淫羊藿薄層鑒別的經(jīng)典系統(tǒng)，但在反復試驗后發(fā)現(xiàn)其展開效果并不理想，雖斑點清晰位置適中，但由于藥品中其他物質的干擾，對照品主斑點位置總是明顯高于樣品中主斑點位置，故最終選用無此現(xiàn)象的系統(tǒng)②。缺淫羊藿陰性對照在此薄層色譜系統(tǒng)中無干擾，故可采用淫羊藿苷作為對照品溶液對藥品中的淫羊藿進行定性鑒別；色譜中主斑點清晰明顯，位置居中，無論是預制板還是手工板，結果穩(wěn)定，重現(xiàn)性較好。此方法可作為金烏骨通膠囊中淫羊藿藥材的薄層色譜定性鑒別。

參考文獻

[1]WS-10140（ZD-0140）-2002，金烏骨通膠囊[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

（收稿日期：20131207）