冠心病血瘀證患者與健康人血清蛋白質(zhì)表達(dá)的差異

劉 燁

（山東省濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院 醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，山東濟(jì)寧272000）

·論 著·

冠心病血瘀證患者與健康人血清蛋白質(zhì)表達(dá)的差異

劉 燁

（山東省濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院 醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，山東濟(jì)寧272000）

目的：研究冠心病瘀血證患者與健康人在血清蛋白質(zhì)表達(dá)方面存在的差異。方法：選取8例冠心病血瘀證患者以及8名健康人士作為本次實(shí)驗(yàn)的研究對象，分析兩組患者血清蛋白質(zhì)存在的差異。結(jié)果：冠心病血瘀證患者與健康人士相差12個蛋白質(zhì)點(diǎn)。結(jié)論：冠心病血瘀證患者的相關(guān)蛋白主要集中在脂質(zhì)代謝與炎癥反應(yīng)方面，并且發(fā)現(xiàn)了具有進(jìn)一步研究價值的黃醇結(jié)合蛋白4。

冠心病血瘀證；健康人士；血清蛋白；表達(dá)差異

血瘀證是冠心病中比較常見的一類疾病。在中醫(yī)領(lǐng)域中蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的應(yīng)用，給中醫(yī)研究提供了實(shí)質(zhì)性的研究新方法［1］。為了進(jìn)一步提高冠心病血瘀證的治療技術(shù)，本院采用蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)對關(guān)系并血瘀證患者與健康人士的血清蛋白進(jìn)行了對比分析，希望能夠找到冠心病血瘀證患者的相關(guān)特異性蛋白?，F(xiàn)將本次實(shí)驗(yàn)做如下詳細(xì)報道。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：選取我院2014年3月～2015年3月所診治的8例冠心病血瘀證患者以及8例健康人士作為本次實(shí)驗(yàn)的研究對象，冠心病血瘀證患者有男性患者4例，女性患者4例，平均年齡為（32.897±1.58）歲，健康人士中有男性5例，女性3例，平均年齡為（33.567±1.63）歲。兩組對象在年齡與性別分布方面不存在明顯差異，（P＜0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 血清標(biāo)本的采集與電泳：（1）清晨采集兩組人群的外周靜脈血，標(biāo)準(zhǔn)3mL，然后將采集的血液放置于非抗凝的真空采血管中，使用3000rpm對血清進(jìn)行分離，10min后將其放置在－80℃的環(huán)境中存儲，備用。（2）使用Bradford法測定兩組人群的血清樣本的蛋白質(zhì)濃度，并進(jìn)行雙向的凝膠電泳。時間30min。（3）每塊膠使用17W的恒定功率進(jìn)行電泳，指導(dǎo)溴酚藍(lán)的指示線達(dá)到凝膠底邊，2－DE凝膠固定以后，使用G－250考馬斯亮藍(lán)進(jìn)行染色。

1.2.2 圖像分析：使用ImageScanner和LabScan對凝膠脫色后的血清樣本進(jìn)行透射掃描，然后使用PD－Quest軟件對凝膠圖譜的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行檢查，并進(jìn)一步進(jìn)行統(tǒng)計、分析，尋找兩組人群的平均蛋白質(zhì)點(diǎn)差異。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析：將數(shù)據(jù)納入SPSS19.0統(tǒng)計軟件中進(jìn)行分析，計數(shù)資料比較采用χ2比較，以率 （%）表示，計量資料比較采用t檢驗(yàn)，并以 （±s）表示，若（P＜0.05）則差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2－DE結(jié)果：對所采集的兩組中的任一單個血清樣本分別進(jìn)行雙向得到凝膠電泳分離，每個血清樣本都獲得了8個凝膠圖譜，圖一為典型的雙向凝膠電泳圖。使用PDQuest軟件對圖譜信息進(jìn)行分析，健康人士的平均蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)為（153.27±21.63），冠心病血瘀證患者的平均蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)為（146.28±19.84），通過匹配分析和背景消減，得出冠心病血瘀證患者與健康人士的蛋白質(zhì)點(diǎn)差異為12個。2.2 質(zhì)譜鑒定結(jié)果：對12個蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析，得到每一個蛋白質(zhì)點(diǎn)的肽質(zhì)量指紋譜，使用NCBInr數(shù)據(jù)庫和進(jìn)行搜索，11個蛋白質(zhì)點(diǎn)為陽性，然后通過整合重復(fù)蛋白質(zhì)點(diǎn)后，確認(rèn)6個差異的蛋白質(zhì)點(diǎn)。對兩組的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行比較，表達(dá)上調(diào)的有結(jié)合珠蛋白、血清蛋白和視黃醇結(jié)合蛋白4，表達(dá)下調(diào)的有載脂蛋白AI。還有兩個差異蛋白質(zhì)點(diǎn)，由于沒有充分的證據(jù)，因此在此暫不進(jìn)行說明。

3 討論

相關(guān)研究表明，結(jié)合珠蛋白是一種急性相蛋白，在多種應(yīng)急反應(yīng)過程中，結(jié)合珠蛋白的表達(dá)會明顯的增加，并且其在炎癥、減少細(xì)胞損傷以及抗氧化反應(yīng)中也有非常重要的作用［2］。血清蛋白是在人體的血清中含量最豐富，其濃度對于冠心病的發(fā)現(xiàn)與預(yù)后有非常重要的預(yù)測價值。視黃醇結(jié)合蛋白4與血清水平的升高和脈粥樣硬化有緊密聯(lián)系［3］。冠心病血瘀證患者的相關(guān)蛋白主要集中在脂質(zhì)代謝與炎癥反應(yīng)方面，存在的6個差異的蛋白質(zhì)點(diǎn)中，結(jié)合珠蛋白、血清蛋白以及視黃醇結(jié)合蛋白4為表達(dá)上調(diào)，載脂蛋白AI為表達(dá)下調(diào)，還有兩個差異蛋白質(zhì)點(diǎn)未得到準(zhǔn)確診斷，并且發(fā)現(xiàn)了具有進(jìn)一步研究價值的視黃醇結(jié)合蛋白4，為尋找冠心病血瘀證患者的相關(guān)蛋白提供了依據(jù)。但是本次研究是得出了部分與冠心病血瘀證相關(guān)的蛋白質(zhì)的信息，為了進(jìn)一步的將信息完善，還應(yīng)該進(jìn)行更深層次的探索。

［1］蔣躍絨，李雪峰，高鑄燁，等.冠心病血瘀證患者血小板骨架蛋白差異表達(dá)分析［J］.中國循環(huán)雜志，2014，（z1）：193－194.

［2］薛梅，陳可冀，馬曉娟，等.血府逐瘀口服液對冠心病血瘀證患者血液流變學(xué)的影響及其與人類血小板抗原3基因多態(tài)性的相關(guān)性 ［J］.中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報，2008，6（11）：1129－1135.

［3］戴澤龍，陳慧，吳小盈，等.冠心病血瘀證患者細(xì)胞色素P4502C19*17基因型分布與氯吡格雷治療后血小板聚集率及出血風(fēng)險的關(guān)系 ［J］.中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報，2012，10（6）：647－654.

Coronary heart disease（CHD）patients and healthy peop le of blood stasis syndrome of serum protein expression differences

LIU Ye
The first people＇s Hospital of Jining City，Shandong Province，Jining Shandong 272000

Objective：to study the blood stasis syndrome in patientswith coronary heart disease and healthy people in terms of serum protein expression differences.M ethods：8 patientswith coronary heart disease，blood stasis and eight healthy people as the research object of this experiment，the analysis of two groups of patients with serum protein differences.Results：the coronary heart disease（CHD）patients and healthy people of blood stasis syndrome differ 12 point of protein.Conclusion：blood stasis syndrome in patients with coronary heart disease related proteins aremainly concentrated on lipid metabolism and inflammatory reaction，and found that the yellow alcohol has further research value binding protein 4.

coronary heart disease；blood stasis；Healthy people；serum protein；expression differences

R541

A

1002－2376（2015）09－0005－02

2015－07－04