乙肝血清學(xué)檢測研究進(jìn)展

陳翔宇

天津市和平區(qū)疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科微生物檢驗(yàn)室　300070

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乙肝血清學(xué)檢測研究進(jìn)展

陳翔宇

天津市和平區(qū)疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科微生物檢驗(yàn)室300070

摘要乙肝外膜大分子表面抗原即乙肝大蛋白，目前，大蛋白的雙重拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)、直接肝細(xì)胞毒害性與致癌性以及反式激活增強(qiáng)病毒復(fù)制等已經(jīng)成為了臨床研究的熱點(diǎn)話題，隨著研究的不斷深入，臨床上對于大蛋白的檢測也不斷受到重視。乙肝(HBV)表面抗原在表達(dá)之后具有多個不同類型的產(chǎn)物，比如產(chǎn)物大蛋白(LHBs)、產(chǎn)物中蛋白(MHBs)以及產(chǎn)物小蛋白(SHBs)等，臨床檢測的表面抗原主要為小蛋白SHBs。此外，一個蛋白具有的拓?fù)鋵W(xué)結(jié)構(gòu)不同，且具有的功能也就不同，比如LHBs可以產(chǎn)生不同的跨膜拓?fù)鋵W(xué)結(jié)構(gòu)，除了在病毒包膜外側(cè)和病毒受體結(jié)合以外，還能夠在包膜內(nèi)側(cè)和病毒核殼結(jié)合。本文主要分析了大蛋白在病毒復(fù)制中的作用及進(jìn)行血清檢測學(xué)的意義。

關(guān)鍵詞乙肝大蛋白血清學(xué)檢測病毒復(fù)制

HBV表面抗原通過啟動子表達(dá)后，會產(chǎn)生產(chǎn)物大蛋白(LHBs)、產(chǎn)物中蛋白(MHBs)以及產(chǎn)物小蛋白(SHBs)等三類產(chǎn)物[1]。其中產(chǎn)物大蛋白和產(chǎn)物小蛋白均為單糖基化，而MHB則具有兩種形式，即單糖基化、雙糖基化；產(chǎn)物中蛋白和產(chǎn)物小蛋白形式主要為小球型病毒顆粒，產(chǎn)物大蛋白的分泌則需要其余兩類產(chǎn)物共表達(dá)。一般情況下，HBV病毒能夠分泌三種病毒顆粒，分別為小球形顆粒、管狀顆粒以及Dane顆粒外膜結(jié)構(gòu)蛋白，其中小球形顆粒主要有產(chǎn)物中蛋白、產(chǎn)物小蛋白組成，其余兩種病毒顆粒則是由三類產(chǎn)物共同組成的[2，3]。由此可見，產(chǎn)物大蛋白在表達(dá)上具有調(diào)節(jié)病毒外膜組裝能力的作用。

1反式激活作用的研究

研究發(fā)現(xiàn)，乙肝病毒感染不僅會誘發(fā)急性肝炎，也有可能引起肝細(xì)胞癌[3~5]。因此，很多學(xué)者將研究重點(diǎn)放在尋找潛在病毒癌基因產(chǎn)物上[6]。目前，有學(xué)者認(rèn)為HBV最少可以編碼2個轉(zhuǎn)錄激活因子，產(chǎn)物大蛋白和HBx都可能誘導(dǎo)MEK激酶級聯(lián)通路的激活，其中產(chǎn)物大蛋白的激活主要是PKC依賴性，Ras不需要參與其中，HBx則不需要Ras或者PKC進(jìn)行介導(dǎo)的。在轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞中，有選擇的對產(chǎn)物大蛋白、HBx的激活進(jìn)行破壞，并不會影響病毒的生成的減少[7，8]。如果使用MEK特異性抑制劑，則會阻斷上述兩種激活因子的信號步驟，并抑制產(chǎn)物大蛋白和HBx的依賴性激活，從而終止HBV基因的表達(dá)。除此之外，病毒生活周期中，激活蛋白因子功能具有十分重要的意義，MEK信號級聯(lián)是否完整，對病毒復(fù)制具有很大影響。

有學(xué)者以鴨乙型肝炎為模型進(jìn)行驗(yàn)證[9]，以明確產(chǎn)物大蛋白LHBs反式激活和病毒復(fù)制是否具有相關(guān)性，研究結(jié)果顯示，亞病毒顆?？梢栽谝欢ǔ潭壬咸岣呒?xì)胞內(nèi)病毒復(fù)制速度。同時，該現(xiàn)象對亞病毒顆粒和病毒粒子之間的比例大小、亞病毒顆粒參與的時間長短等具有很強(qiáng)依賴性，而且含HBV的血清感染性除了依賴感染性病毒粒子數(shù)量，還和核酸粒子數(shù)量多少有密切關(guān)系。此研究便于學(xué)者更好的了解乙型肝炎病毒在整個感染過程中的亞病毒顆粒的生物學(xué)功能。

2大蛋白對肝細(xì)胞直接毒性與致癌性

乙型肝炎的主要特征表現(xiàn)即毛玻璃樣肝細(xì)胞，Lei等學(xué)者[10]通過研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因大鼠體內(nèi)含有過量的LHBs，會進(jìn)一步產(chǎn)生大量的毛玻璃樣肝細(xì)胞，不僅會使細(xì)胞受損，也有可能誘導(dǎo)肝的再生，從而引發(fā)肝癌。因此，可以認(rèn)為肝癌的發(fā)生和體內(nèi)產(chǎn)物大蛋白的連續(xù)過表達(dá)有密切關(guān)系，也是其持續(xù)增加而引發(fā)的。當(dāng)產(chǎn)物大蛋白過量表達(dá)以后，會使部分細(xì)胞增殖激酶活化(PKC)，而激酶的連續(xù)活化和肝癌的產(chǎn)生具有密切關(guān)系。當(dāng)受到感染的肝細(xì)胞難以從細(xì)胞分泌的途徑產(chǎn)生乙肝管狀顆粒時，便會使細(xì)胞產(chǎn)生病變效應(yīng)，而在轉(zhuǎn)基因大鼠模型中能夠看見肝細(xì)胞癌的產(chǎn)生。

研究過程中，還發(fā)現(xiàn)乙肝大蛋白對肝細(xì)胞具有較強(qiáng)的毒性作用。一般情況下，乙肝肝受損主要是由免疫反應(yīng)介導(dǎo)的，并不是病毒自身引起的。新的研究認(rèn)為，造成肝細(xì)胞受損的主要原因是大蛋白對肝細(xì)胞的毒性作用。此研究模型為纖維淤膽性肝炎肝細(xì)胞損傷模型，纖維淤膽性肝炎作為乙肝病毒發(fā)展的過程，在免疫抑制患者中具有較高發(fā)病率，因此類患者免疫抑制功能受損，幾乎不會出現(xiàn)免疫反應(yīng)，當(dāng)其處于纖維淤膽性肝炎情況下時，肝細(xì)胞則會出現(xiàn)細(xì)胞凋亡或者液泡化[11，12]。有研究結(jié)果已經(jīng)證實(shí)，產(chǎn)物大蛋白LHBs是誘發(fā)纖維淤膽性肝炎的最為重要的原因，體外大蛋白可以導(dǎo)致被培養(yǎng)的肝細(xì)胞在短期內(nèi)凋亡，且為細(xì)胞凋亡[13]。最為明顯的特點(diǎn)之一便是培養(yǎng)的肝細(xì)胞在凋亡之前，胞質(zhì)中的液泡化十分明顯，該現(xiàn)象與纖維淤膽性肝炎的肝臟病理損傷特點(diǎn)十分相似。由此可以看出，LHBs也會導(dǎo)致肝胚細(xì)胞或者永生化肝細(xì)胞空泡化，繼而凋亡。總體而言，亞病毒管狀顆?；蛘吒腥拘灶w粒中均存在大量大蛋白，為病毒形成完整外膜的主要標(biāo)志，同時和病毒復(fù)制有很大關(guān)系，對乙肝病毒復(fù)制過程起到反式激活的作用；如果肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上積聚過量的產(chǎn)物大蛋白，則有可能造成肝細(xì)胞毒性，甚至致癌。

3乙肝大蛋白的血清學(xué)檢測

當(dāng)肝細(xì)胞受損后，其釋放出來的大蛋白和亞病毒顆粒中含有的大蛋白，均可以被特異性抗體在血流中捕捉到，因此，對乙肝大蛋白進(jìn)行血清學(xué)檢測具有十分重要的意義。隨著臨床研究的不斷深入，相關(guān)理論的不斷完善，對大蛋白進(jìn)行檢測具有更加重要的作用。傳統(tǒng)檢測方法主要是對大蛋白的獨(dú)有片段——pre-S1進(jìn)行檢測后實(shí)現(xiàn)的，不過受編碼pre-S蛋白中HBV-LP PRE-S區(qū)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)過于復(fù)雜的特點(diǎn)的影響，致使pre-S1抗原檢出率非常低，甚至難以準(zhǔn)確、完整地反映出HBV病毒的具體復(fù)制情況[14]。針對此現(xiàn)象，采用單抗檢測的方式進(jìn)行乙肝大蛋白檢測后，結(jié)果后DNA的符合率更加顯著。除此之外，對pre-S1進(jìn)行單獨(dú)檢測，在很大程度上忽視了檢測大蛋白的意義，由于大蛋白可以對肝細(xì)胞產(chǎn)生毒性，其S區(qū)可以具有反式激活的作用，在此情況下，對大蛋白進(jìn)行整體性檢測，具有更加重要的臨床意義和價值[8]。

通過檢測學(xué)者中的大蛋白，可以更加準(zhǔn)確地判斷出性e抗原陰性中病毒的復(fù)制情況。臨床上對乙肝病毒復(fù)制的具體情況或者傳染性大小進(jìn)行判斷的主要指標(biāo)為HBeAg，如果乙肝病毒發(fā)生在前C區(qū)和C區(qū)變異以后，HBeAg便會呈現(xiàn)為陰性，而病毒繼續(xù)復(fù)制的情況，則使臨床治療中難以準(zhǔn)確判斷停藥時機(jī)，而且治療完成后應(yīng)答時間也相對比較短。魏紅山等學(xué)者認(rèn)為，對大蛋白進(jìn)行檢測，對于e抗原陰性肝炎的檢測具有重要的臨床意義，其研究結(jié)果顯示，產(chǎn)物大蛋白是對HBeAg陰性乙肝患者病毒復(fù)制程度高低進(jìn)行判斷的重要指標(biāo)之一，主要是因?yàn)檠逯械漠a(chǎn)物大蛋白含量和HBV DNA復(fù)制數(shù)量變化情況具有一致性，且兩者具有密切相關(guān)性。

大蛋白不僅和病毒復(fù)制具有顯著關(guān)系，而且還能夠反式激活病毒復(fù)制，由此可見，對乙肝患者進(jìn)行抗病毒治療時，可以將大蛋白水平作為治療效果的評價指標(biāo)之一，并在治療過程中進(jìn)行密切監(jiān)測。根據(jù)最新發(fā)表的文獻(xiàn)資料顯示[15]，采用干擾素類藥物對HBV轉(zhuǎn)基因大鼠模型進(jìn)行治療后裔，大鼠肝細(xì)胞中的大蛋白數(shù)量明顯減少，肝細(xì)胞毛玻璃樣狀況得到了很大程度的改善，因此可以看出，大蛋白數(shù)量的大幅減少和抗病毒感染的治療存在密切關(guān)系。

對慢性乙肝病毒患者進(jìn)行抗病毒治療后，其臨床治療效果的評價可以將血清HBV DNA復(fù)制情況作為判斷標(biāo)準(zhǔn)之一，不過需要注意的是，要盡量避免將血液中DNA復(fù)制數(shù)量減少或者轉(zhuǎn)陰等作為乙肝治療效果判定、是否停藥的指標(biāo)，之所以這樣，主要是因?yàn)楹塑疹惪共《舅幬锟梢栽诤艽蟪潭壬贤ㄟ^抑制HBV DNA的合成，獲得治療效果，但是根據(jù)目前臨床所有的抗病毒治療藥物來看，幾乎沒有十分有效的藥物可以清除cccDNA，僅僅可以抑制病毒的持續(xù)復(fù)制，不會對已形成的病毒表達(dá)蛋白產(chǎn)生抑制作用，從而說明這些抗病毒藥物并會影響以病毒DNA為模板的轉(zhuǎn)錄情況[16]。在此情況下，對乙肝患者進(jìn)行臨床治療時，雖然其DNA植指標(biāo)下降速度相對比較快，但已經(jīng)形成的病毒還會不斷進(jìn)行蛋白表達(dá)，進(jìn)而組成管狀顆?；蛘咔蛐晤w粒。所以血清HBV DNA的下降速度比較快，且高于產(chǎn)物大蛋白，而血清產(chǎn)物大蛋白的消減速度則會低于血清HBV DNA。采用拉米夫定對乙型肝炎患者進(jìn)行臨床治療后通過動態(tài)觀察患者血清產(chǎn)物大蛋白的變化，發(fā)現(xiàn)治療效果不同的組別，血清產(chǎn)物大蛋白的下降速度也有顯著差異，其中完全應(yīng)答組下降最為明顯的時間主要集中在治療6個月時，而且血清產(chǎn)物大蛋白一直處于較低的水平，部分患者已經(jīng)轉(zhuǎn)變?yōu)殛幮?，在部分?yīng)答組、無效組中，HBV DNA是最先開始下降的，大蛋白則一直為高滴度陽性，研究學(xué)者認(rèn)為么，此情況和鴨乙型肝炎的模型特點(diǎn)比較相似，乙肝病毒會產(chǎn)物大蛋白前S區(qū)激活后便開始復(fù)制，從而導(dǎo)致患者病情不斷反復(fù)，延長治療療程[17]。

4結(jié)語

通過上述內(nèi)容可以看出，對乙肝表面抗原大蛋白進(jìn)行血清學(xué)檢測具有十分重要的意義，不僅利于對乙肝病毒復(fù)制的具體情況進(jìn)行判斷，還可以有效預(yù)測疾病預(yù)后情況，便于了解乙肝患者肝細(xì)胞損傷程度，進(jìn)行針對性的治療。

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(編輯羽飛)

收稿日期2015-05-19

中圖分類號：R512.6+2

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1001-7585(2015)18-2450-03