Akt、TGF-β1、mTOR在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及意義

孫 琦

(河北省撫寧縣人民醫(yī)院，河北 撫寧 066300)

Akt、TGF-β1、mTOR在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及意義

孫 琦

(河北省撫寧縣人民醫(yī)院，河北 撫寧 066300)

目的 探討Akt、TGF-β1、mTOR在結(jié)直腸癌中的表達(dá)，分析其與結(jié)直腸癌的病理相關(guān)性。方法 選取手術(shù)后診斷為結(jié)直腸癌的標(biāo)本40例為癌變組，另選取20例健康者的非結(jié)直腸癌變組織為健康組?；诿庖呓M化染色法檢測所有入選組織中Akt、TGF-β1、mTOR陽性表達(dá)率，做組間比較；另統(tǒng)計癌變組患者癌變組織的TNM分期、分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移情況，做3種基因表達(dá)的相關(guān)性比較。結(jié)果 Akt、TGF-β1、mTOR三者的表達(dá)陽性率在癌變組與健康組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)，在不同分期、分化程度及是否發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移的病理分型間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)；Akt、TGF-β1、mTOR三者聯(lián)合用于結(jié)直腸癌診斷的準(zhǔn)確度、特異性、準(zhǔn)確性均顯著高于三者單獨診斷(P均<0.05)。結(jié)論 Akt、TGF-β1、mTOR三者的表達(dá)與結(jié)直腸癌發(fā)病具顯著相關(guān)性，且隨著TNM分期、分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移情況不同而表現(xiàn)出顯著性差異，且三者聯(lián)合用于結(jié)直腸癌病情程度的診斷具有較高的敏感性、特異性及準(zhǔn)確度，因此三者聯(lián)合檢測可能對結(jié)直腸癌變病理程度判定及治療有一定的指導(dǎo)意義。

Akt；TGF-β1；mTOR；結(jié)直腸癌

結(jié)直腸癌為常見的惡性腫瘤疾病，目前因較多的物理或化學(xué)致癌因子產(chǎn)生，以及人們飲食結(jié)構(gòu)的改變，使結(jié)直腸癌的患病率呈上升趨勢。據(jù)相關(guān)統(tǒng)計結(jié)果顯示：結(jié)直腸癌的患病率增長速度占據(jù)所有癌癥的首位，且發(fā)病時期直接影響著治療效果[1]。對于常規(guī)切除手術(shù)來說，若于患者癌變組織分化嚴(yán)重或出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移的發(fā)病晚期進(jìn)行手術(shù)，則術(shù)后5年內(nèi)的存活率只有50%左右[2]，而于患者發(fā)病早期，癌變組織分化尚未嚴(yán)重及淋巴未發(fā)生轉(zhuǎn)移時進(jìn)行手術(shù)，則術(shù)后5年內(nèi)的存活率可達(dá)90%左右,因此盡早對該病進(jìn)行確診并及時采取治療措施，是有效防止其惡化的途徑[3]。所以，眾多研究將結(jié)直腸癌的治療關(guān)鍵放于病情判定指標(biāo)上。Akt、TGF-β1、mTOR可能參與細(xì)胞增殖及分化的調(diào)控，本研究分析了Akt、TGF-β1、mTOR在結(jié)直腸癌中的表達(dá)情況，現(xiàn)報道如下。

1 臨床資料

1.1一般資料 選取2013年3月—2014年4月于我院手術(shù)后診斷為結(jié)直腸癌的標(biāo)本40例為癌變組，其中男23例，女17例；年齡26～67(42.1±13.2)歲；AJCC結(jié)直腸癌TNM分期Ⅰ+Ⅱ期14例，Ⅲ+Ⅳ期26例；分化程度高度12例，中度18例，低度10例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例，無轉(zhuǎn)移22例。另選取同期20例健康者的非結(jié)直腸癌變組織為健康組，男11例，女9例；年齡25～67(41.7±12.8)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床資料完整，手術(shù)后經(jīng)經(jīng)驗豐富的醫(yī)師鑒定確診為結(jié)腸癌變；術(shù)后癌變組織標(biāo)本完好保存，患者及家屬自愿參與研究，簽署自愿協(xié)議書。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除結(jié)直腸癌家族史，及使用化療、放療或非甾體抗炎藥物史的患者；排除并發(fā)其他部位惡性腫瘤的患者，排除臨床資料不完整者及未簽署自愿協(xié)議書者。

1.2 所用試劑與儀器 Akt、TGF-β1、mTOR兔抗人多克隆抗體購自美國Epitomics公司；DAB試劑盒、S-P試劑盒、鏈親和素一過氧化物酶購自美國 cell signaling technology公司；切片機(jī)、烘干機(jī)、電子顯微鏡購自美國cell signaling technology公司，37 ℃恒溫孵育箱等為國產(chǎn)。

1.3 方法

1.3.1 免疫組化染色 石蠟包埋、切片、洗液清洗脫蠟；乙醇浸泡、抗原還原、洗液清洗；滴加氧化酶阻斷劑，洗液沖洗；滴加山羊血清工作液；滴加45 μL一抗，低溫放置后洗液沖洗；滴加45 μL二抗，靜置后洗液沖洗；滴加鏈親和素一過氧化物酶，放置，洗液沖洗；滴加現(xiàn)配顯色劑(DAB)；蘇木素染色，水洗；乙醇脫水封片待用；于顯微鏡下觀察Akt、TGF-β1、mTOR三者的表達(dá)陽性率。

1.3.2 陽性判斷 依照文獻(xiàn)[4-6]方法：Akt、TGF-β1、mTOR三者表達(dá)蛋白染色成功的標(biāo)志均為細(xì)胞液被染成顆粒狀棕黃色物質(zhì)。于光鏡下取1 000個細(xì)胞觀察，最終結(jié)果以染色面積與染色程度的乘積得分進(jìn)行綜合評定，其中染色面積得分規(guī)定為若染色成功細(xì)胞率為0則計分為0分，<25%計分為1分，25%～40%計為2分，41%～80%為3分，超過80%為4分。染色程度則按照棕褐色、棕黃色、黃色、無顯色分別為3分、2分、1分、0分。最終染色面積得分與染色程度得分若為0分則為陰性，以“-”表示；1～2分則為弱陽性，以“+”表示；3分為陽性，以“”表示；≥4分為強陽性，以“”表示。(+～)記為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 21.0軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以率表示，組間進(jìn)行卡方檢驗；計量資料以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，組間比較進(jìn)行t檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.12組Akt、TGF-β1、mTOR表達(dá)陽性情況比較 癌變組Akt、TGF-β1、mTOR陽性率較健康組明顯上升。見表1。

表1 2組Akt、TGF-β1、mTOR表達(dá)陽性情況比較 例(%)

2.2 癌變組不同病理分型間Akt、TGF-β1、mTOR表達(dá)陽性率比較 對于結(jié)直腸組織癌變患者，Ⅲ+Ⅳ期患者的癌變組織中Akt、TGF-β1、mTOR表達(dá)陽性率均明顯高于Ⅰ+Ⅱ期(P均<0.05)；而隨著癌變組織分化程度的升高，Akt、TGF-β1、mTOR表達(dá)陽性率均呈現(xiàn)顯著上升趨勢(P均<0.05)；有淋巴轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者的Akt、TGF-β1、mTOR表達(dá)陽性率均明顯高于無淋巴轉(zhuǎn)移的患者(P<0.05)。見表2。

表2 癌變組不同病理分型間Akt、TGF-β1、mTOR表達(dá)陽性率比較

2.3 Akt、TGF-β1、mTOR分別及聯(lián)合用于結(jié)直腸癌診斷的性能比較 Akt、TGF-β1、mTOR三者聯(lián)合診斷結(jié)直腸癌的準(zhǔn)確度為92%，敏感性為90%，特異性為95%，顯著高于三者單獨用于診斷的準(zhǔn)確度、敏感性及特異性(P均<0.05)。見表3。

表3 Akt、TGF-β1、mTOR分別及聯(lián)合用于結(jié)直腸癌診斷的性能比較 %

3 討 論

3.1Akt與結(jié)直腸癌 Akt為絲氨酸與蘇氨酸類的蛋白激酶，也叫B類蛋白類激酶(PKB)[7]，包括480個左右的氨基酸殘基，對機(jī)體細(xì)胞的繁殖及凋亡起著重要的調(diào)控作用。Akt主要通過磷酸活化一些細(xì)胞的關(guān)鍵調(diào)控因子(白介素家族、mTOR等因子)間接對細(xì)胞的生理代謝與凋亡起到調(diào)節(jié)作用。而pAkt則為Akt磷酸活化調(diào)控因子后的產(chǎn)物，當(dāng)前眾多研究將Akt及pAkt共同作為癌變組織診斷的評定指標(biāo)[8]，且診斷的特異性、敏感性及準(zhǔn)確度均較高。本次研究也證實了這一觀點，研究中發(fā)現(xiàn)Akt在結(jié)直腸癌組織癌變組的表達(dá)陽性率明顯高于健康組，且在各分期、分化程度、是否淋巴轉(zhuǎn)移的病理分型中均表現(xiàn)出顯著性差異，由此可以認(rèn)為Akt與結(jié)直腸癌及病情發(fā)展有明顯相關(guān)性。

3.2 TGF-β1與結(jié)直腸癌 TGF-β1為一種對癌細(xì)胞生長增殖分化周期等具有調(diào)控作用的多肽鏈，其主要通過與受體結(jié)合后發(fā)揮作用。TGF-β1與相應(yīng)受體結(jié)合后主要通過介導(dǎo)smads的信號通路以間接對細(xì)胞起到調(diào)控作用[9]，但其作用機(jī)制尚未明確。TGF-β1對癌變細(xì)胞具有雙重調(diào)控作用，其在惡性腫瘤早期會對腫瘤細(xì)胞的分裂、擴(kuò)散、生長等起的抑制作用；而當(dāng)腫瘤細(xì)胞累積到一定的范圍與數(shù)量時，TGF-β1對腫瘤細(xì)胞失去調(diào)控能力，腫瘤細(xì)胞開始無限制生長及分裂，與此同時，TGF-β1能夠刺激腫瘤血管的生長，為腫瘤細(xì)胞的繁殖提供足夠的養(yǎng)料和血液。由此可以推測，TGF-β1可能與癌變組織的病情發(fā)展程度相關(guān)。TGF-β1蛋白的表達(dá)與結(jié)直腸癌變、前列腺癌變、膀胱癌變、乳腺癌變、宮頸癌變等多種惡性腫瘤疾病有關(guān)，癌變組織中TGF-β1的蛋白表達(dá)陽性率明顯高于非癌變組織。本研究中結(jié)直腸癌變組的TGF-β1蛋白表達(dá)陽性率明顯高于對照組，且隨著分期不同、分化程度不同、淋巴轉(zhuǎn)移與否，TGF-β1的表達(dá)陽性率均呈現(xiàn)顯著性差異，由此可見TGF-β1與結(jié)直腸癌及病情發(fā)展有明顯相關(guān)性。

3.3 mTOR與結(jié)直腸癌 mTOR為一類蛋白質(zhì)物質(zhì)，對人體蛋白質(zhì)的合成及細(xì)胞的生長分裂起著重要的調(diào)節(jié)作用。mTOR通過介導(dǎo)細(xì)胞生長分裂時所需的養(yǎng)料及氧氣對其發(fā)揮調(diào)控作用；此外mTOR信號通路通過控制mTOR的表達(dá)量間接調(diào)控細(xì)胞，這與TGF-β1(可通過介導(dǎo)smads的信號通路以間接對細(xì)胞起到調(diào)控作用)調(diào)控癌變細(xì)胞生長分裂作用有了交集；另外mTOR對癌變細(xì)胞的凋亡起著顯著的調(diào)控作用，它能夠明顯降低細(xì)胞抗凋亡因子的活性，并促進(jìn)促凋亡因子的表達(dá)，從而促進(jìn)癌變細(xì)胞的死亡。本研究顯示，結(jié)直腸癌變組的mTOR蛋白表達(dá)陽性率明顯高于對照組，且隨著分期不同、分化程度不同以及是否發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移，mTOR表達(dá)陽性率均呈現(xiàn)顯著性差異，由此可見mTOR與結(jié)直腸癌及病情發(fā)展有明顯相關(guān)性。

本研究還對Akt、TGF-β1、mTOR三者聯(lián)合及單獨用于結(jié)直腸癌診斷的準(zhǔn)確度、敏感性、特異性進(jìn)行了比較，證實三者聯(lián)合診斷的準(zhǔn)確度、敏感性、特異性明顯高于單獨檢測。

總之Akt、TGF-β1、mTOR三者的表達(dá)與結(jié)直腸癌發(fā)病具顯著相關(guān)性，且隨著TNM分期、分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移情況不同而有顯著差異。三者聯(lián)合檢測用于結(jié)直腸癌病情程度的診斷具有較高的敏感性、特異性及準(zhǔn)確度，因此Akt、TGF-β1、mTOR三者表達(dá)的聯(lián)合檢測可能對結(jié)直腸癌變的病理程度及治療有一定的指導(dǎo)意義。

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10.3969/j.issn.1008-8849.2015.21.026

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1008-8849(2015)21-2351-03

2014-12-15