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    HPLC測定人血漿中塞克硝唑的濃度

    2015-02-01 09:48:58黃露胡長明許明旺王秀萍陳丹
    中國合理用藥探索 2015年6期
    關(guān)鍵詞:塞克硝唑甲硝唑

    黃露胡長明許明旺王秀萍陳丹

    (1華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬梨園醫(yī)院,湖北 武漢 430074;2武漢大學(xué)藥學(xué)院,430072)

    HPLC測定人血漿中塞克硝唑的濃度

    黃露1胡長明1許明旺1王秀萍1陳丹2

    (1華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬梨園醫(yī)院,湖北 武漢 430074;2武漢大學(xué)藥學(xué)院,430072)

    目的:建立高效液相色譜法測定人血漿中塞克硝唑的藥物濃度。方法:色譜柱:Thermo ODS-2柱(250 mm ×4.6 mm,5μm),流動相為乙腈-水(20∶80),流速為1.0 m L/min。紫外檢測器檢測波長為310 nm。結(jié)果:人血漿中塞克硝唑線性范圍為0.25~ 100 mg/L,r=0.999 6;平均回收率大于90%,低、中、高濃度樣品的日內(nèi)和日間RSD均小于9.00%,各種條件下血漿樣品的穩(wěn)定性良好。結(jié)論:本法操作簡便快速,靈敏度高,專屬性強,適用于塞克硝唑血藥濃度測定。

    塞克硝唑;高效液相色譜法;血藥濃度檢測

    塞克硝唑是硝基咪唑類化合物,與甲硝唑、替硝唑具有相似的化學(xué)結(jié)構(gòu),藥理活性也頗為相似,臨床上可用于治療原蟲(阿米巴、賈第蟲和陰道毛滴蟲)和厭氧菌引起的感染。已有較多文獻報道采用高效液相色譜法(HPLC)測定血中塞克硝唑的濃度[1-2],該法簡便、靈敏、準確,更適用于大樣本的血漿樣本的測定?,F(xiàn)對HPLC測定人血漿中塞克硝唑濃度報道如下。

    1 儀器與試藥

    日本島津 Shimadzu高效液相色譜儀(含LC-20AT泵,SPD-M 20A型紫外檢測器,SIL-20A自動進樣器,LCsolution工作站);AUW 220D島津分析天平(日本島津公司產(chǎn)品);XH-C渦旋振蕩器(南京東邁光電儀器有限公司);高速冷凍離心機(北京白洋醫(yī)用離心機有限責(zé)任公司)。

    塞克硝唑?qū)φ掌罚兌取?9.0%,批號:130142-200703,中國食品藥品檢定研究院)。內(nèi)標(biāo):甲硝唑?qū)φ掌罚兌取?9.0%,批號:100152-200902,中國食品藥品檢定研究院);甲醇、乙腈為色譜純,水為雙蒸水(自制)。

    2 方法和結(jié)果

    2.1色譜條件

    固定相為Thermo ODS-2色譜柱(250 mm× 4.6 mm,5μm),流動相為乙腈-水(20∶80),流速為1.0m L/min,柱溫為25℃,檢測波長:310 nm[3-5]。

    2.2 標(biāo)準儲備液和內(nèi)標(biāo)液的配制

    精密稱取塞克硝唑?qū)φ掌愤m量,用甲醇溶解并定容,配得1 000 mg/L標(biāo)準貯備液,臨用前以甲醇稀釋,得到不同濃度的系列標(biāo)準溶液。精密稱取甲硝唑?qū)φ掌罚▋?nèi)標(biāo))適量,用甲醇溶解并定容,配得 600 mg/L標(biāo)準貯備液,臨用前用甲醇稀釋至60 mg/L的標(biāo)準溶液。

    2.3 樣品處理

    精密吸取血漿樣本200μL于2 m L的離心管內(nèi),精密加入20μL內(nèi)標(biāo)標(biāo)準溶液 (濃度為60 mg/L),渦旋混勻后加入甲醇 0.3 m L,渦旋混勻5 m in,15 000 rpm離心10 m in,取上清液20μL進樣,測定塞克硝唑和內(nèi)標(biāo)甲硝唑的峰面積。

    2.4 方法專屬性

    按上述色譜條件和血漿處理方法,檢測所得色譜圖如圖1。塞克硝唑和內(nèi)標(biāo)甲硝唑的保留時間分別為 5.7 m in,8.5 m in,峰形較好,血漿中雜質(zhì)不干擾測定。

    2.5 標(biāo)準曲線和最低定量限

    吸取空白血漿180μL,加塞克硝唑系列標(biāo)準溶液20μL,配制成相當(dāng)于塞克硝唑血藥濃度為0.25,0.5,1,5,10,25,50,80,100 mg/L的血漿樣品,按“樣品處理”項下操作,以待測物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值(Y)對待測物濃度(C)進行回歸運算,得標(biāo)準曲線方程為:

    圖1 塞克硝唑?qū)傩訦PLC圖

    Y=0.141C-0.003。

    r=0.999 6,線性范圍為0.25~ 100 mg/L,定量下限可達0.25 mg/L。

    2.6 精密度考察和回收率考察

    配制終濃度為 1,10,80 mg/L的低、中、高濃度血漿樣本,于同一天內(nèi)測定5次和每天5次連續(xù)測定3天,計算日內(nèi)、日間精密度及相對回收率。絕對回收率為低、中、高3個濃度的峰面積與對應(yīng)濃度的標(biāo)準品進樣所得峰面積之比,結(jié)果見表1。同時得到在中濃度時內(nèi)標(biāo)甲硝唑絕對回收率為(97.41± 2.01)%。

    2.7 穩(wěn)定性

    表1 血漿中塞克硝唑的精密度及回收率

    配制終濃度為 1,10,80 mg/L的低、中、高濃度血漿樣本,分別對室溫放置穩(wěn)定性(室溫放置6 h后考察)、凍融穩(wěn)定性(反復(fù)凍融 3次)、長期冷凍穩(wěn)定性(-70℃冰箱保存4周)以及血漿樣品處理后穩(wěn)定性(室溫放置12 h)進行考察。結(jié)果見表2,各濃度穩(wěn)定性考察的 RSD均小于8.0%,表明血漿樣品在上述條件下放置穩(wěn)定。

    表2 塞克硝唑穩(wěn)定性

    3 討論

    對于分離塞克硝唑和內(nèi)標(biāo)甲硝唑時流動相的選擇比較容易[6-7],在保證分離完全的前提下提高分析效率,因此選擇乙腈-水的比例為20∶80,樣品在10 min左右完成進樣。在沉淀劑的選擇上,考察過乙腈和甲醇的沉淀效果。乙腈容易包裹藥物導(dǎo)致藥物峰面積不穩(wěn)定,最終選擇甲醇作為蛋白沉淀劑。本方法藥物峰形良好,基線平穩(wěn),定量下限可達到0.25 mg/L,并且出峰時間較短,大大提高了分析效率,適合大樣本的分析。

    [1] 張錦琳,袁耀佐,錢文,等.HPLC法測定塞克硝唑的含量及有關(guān)物質(zhì)[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報,2009,40(6):527-530.

    [2] 孟婷,趙敏,呂韶敏,等.高效液相色譜法測定塞克硝唑中有關(guān)物質(zhì)[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2007,28(3):282-283.

    [3] 汪鳳梅,蔣程,鄧淑麗,等.高效液相色譜法測定血液和唾液中的塞克硝唑濃度[J].中國藥學(xué)雜志,2009,44(22):1735-1737.

    [4] 尚彬如,陳義強,張麗英,等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定飼料中7種硝基咪唑類藥物[J].中國畜牧雜志,2011,47(13):66-70.

    [5] 孫亞欣,肇麗梅,朱旭,等.高效液相色譜法測定注射用頭孢西酮在健康人血漿和尿中的濃度[J].中國臨床藥理學(xué)雜志,2010,26(5):372-375.

    [6] 陳張好,黃文靜,劉小娟,等.高效液相色譜法測定化妝品中4種硝基咪唑類藥物[J].理化檢驗 -化學(xué)分冊,2014,50(2):184-186.

    [7] 張金安,郭均平,沈惠,等.HPLC法測定塞克硝唑片的有關(guān)物質(zhì)[J].中國藥師,2011,14(6):834-835.

    Determ ination of Secnidazole Concentration in Plasma by HPLC

    Huang Lu1,Hu Changming1,Xu M ingwang1,Wang Xiuping1,Chen Dan2(1 Liyuan Hospital of Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology,Hubei Wuhan 430074,China;2 School of Pharmaceutical Sciences of Wuhan University,430072)

    Objective:To establish a HPLC method for the determination of secnidazole concentration in human plasma.Methods:Liquid chromatography was performed on Thermo ODS-2 column(250 mm×4.6 mm,5μm). The mobile phase of a mixture of acetonitrile water(20∶80)was used at a flow rate of 1.0 m L/min.The detection wavelength was at 310 nm.Results:A linearity was obtained w ithin the range of secnidazole concentrations from 0.25 to 100 mg/L(r=0.999 6).The average recovery was more than 90%and the intra-day and inter-day RSDs were less than 9.00%.The stability of plasma samples under different conditions was good.Conclusion:It was proved that the method is easy for operation,it is sensitive and specific for the determ ination of the secnidazole concentrations in plasma.

    Secnidazole;HPLC;Plasma Concentration Determ ination

    10.3969/j.issn.1672-5433.2015.06.006

    2015-02-14)

    黃露,女,藥師。研究方向:臨床藥學(xué)。E-mail:282668237@qq.com

    王秀萍,女,副主任藥師。研究方向:臨床藥學(xué)、醫(yī)院藥學(xué)。通訊作者E-mail:meiwang916665@126.com

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