丹皮酚對(duì)人舌癌Tca8113細(xì)胞增殖的影響

劉柏林

丹皮酚對(duì)人舌癌Tca8113細(xì)胞增殖的影響

劉柏林

【摘要】目的 探討丹皮酚（paeonol）對(duì)人舌癌TCA8113細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法 用MTT法檢測(cè)不同濃度的丹皮酚對(duì)TCA8113細(xì)胞增殖的抑制的作用；用ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果 MTT實(shí)驗(yàn)表明丹皮酚對(duì)TCA8113 細(xì)胞的增殖有抑制作用，并隨濃度增加抑制作用增強(qiáng)；ELISA實(shí)驗(yàn)提示丹皮酚抑制TCA8113 細(xì)胞分泌VEGF蛋白。結(jié)論 丹皮酚可以抑制TCA8113 細(xì)胞增殖，抑制VEGF蛋白的分泌。

【關(guān)鍵詞】舌癌；TCA8113；丹皮酚

舌癌是最常見的口腔惡性腫瘤，占所有惡性腫瘤的1%～3%[1]。雖然發(fā)病率相對(duì)低于其他惡性腫瘤，但它影響人的頰，舌，腭，下嘴唇，口腔，牙齒等，患者由于外貌被破壞，其心理影響巨大。舌癌的常規(guī)治療是手術(shù)切除，輔助化療，放射治療，但預(yù)后不良，迫切需要尋找新的能有效治療舌鱗癌的化療藥物。近期我們用丹皮酚作用于人舌癌TCA8113 細(xì)胞系，研究其在舌癌中的治療作用。

1　材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

人舌癌TCA8113 細(xì)胞系購自美國ATCC公司。TCA8113 細(xì)胞生長于含有10%胎牛血清（FBS）的DMEM（100 IU/ml青霉素，100 mg/L鏈霉素）培養(yǎng)液中，并置于飽和濕度，37℃、5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中。

1.2藥品與試劑

丹皮酚購自上海第一制藥廠（10 mg：2 ml）。 MTT購于Serva公司，DMEM培養(yǎng)基購自美國Gibico公司。VEGF ELISA試劑盒為德國IBL公司產(chǎn)品。MODE1680酶聯(lián)免疫分析儀購自Bio-RAD公司。

1.3方法

1.3.1MTT法測(cè)定去丹皮酚對(duì)TCA8113 細(xì)胞增殖的影響 TCA8113細(xì)胞接種于96孔板，其密度為2～4×104細(xì)胞/孔，常規(guī)設(shè)3個(gè)復(fù)孔，每孔細(xì)胞總量100 μL，然后常規(guī)培養(yǎng)24 h，后開始添加入不同濃度的丹皮酚，添加等量的DMEM培養(yǎng)液到空白對(duì)照組中，等量的1% DMSO添加到溶劑對(duì)照組中。溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)48 h后，每孔加入MTT（10 mg/Ml）20 μl，再培養(yǎng)4 h后，吸棄上清液，每孔加入DMSO，震蕩器混勻，上酶標(biāo)儀檢測(cè)490 nm波長處的光密度（OD）值。腫瘤細(xì)胞生長抑制率=[1-（實(shí)驗(yàn)組OD值組/空白對(duì)照組OD值）]×100%。

1.3.2ELISA法測(cè)定丹皮酚對(duì)TCA8113細(xì)胞分泌VEGF的影響 將細(xì)胞接種在6孔板內(nèi)，置入37℃、5% CO2、飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，然后添加32 mg/L，128 mg/L丹皮酚到相應(yīng)孔中，空白對(duì)照添加同體積培養(yǎng)液體。繼續(xù)常規(guī)培養(yǎng)48 h，收集細(xì)胞上清，離心5 min（400 g），然后吸取上清，保存于-80℃，待上機(jī)檢測(cè)取出用。上機(jī)檢測(cè)時(shí)嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行操作。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPAS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，各組測(cè)量所得數(shù)據(jù)用（±s）表示，組間數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1MTT法測(cè)定丹皮酚作用48 h后對(duì)TCA8113 細(xì)胞增殖的影響

分別用4、8、16、32、64、128、256 mg/L濃度的丹皮酚作用于TCA8113細(xì)胞，48 h后，MTT法測(cè)得丹皮酚對(duì)TCA8113細(xì)胞的抑制率為（3.17±0.4）%，（7.28±1.23）%，（15.36±1.59）%，（25.16±2.68）%，（39.34±3.12）%，（51.35±2.18）%，（89.24±2.53）%，其分別與空白對(duì)照組（0%）相比，P＜0.05。

2.2ELISA法測(cè)定丹皮酚對(duì)VEGF的影響

根據(jù)MTT結(jié)果，選取空白對(duì)照組，32 mg/L和128 mg/L丹皮酚組（實(shí)驗(yàn)組）進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，ELISA實(shí)驗(yàn)測(cè)到VEGF表達(dá)量分別為（13.76±1.52）μg/L，（3.52±1.34）μg/L，（2.44 ±1.2）μg/L。32 mg/L和128 mg/L丹皮酚組低于空白組細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3　討論

丹皮酚是從中藥材牡丹根皮及徐長卿全草中提取的一種活性成分，分子式為C9H10O3，分子量為166.18。近年來，多名學(xué)者研究表明丹皮酚具有良好的抗癌活性，其對(duì)軟骨肉瘤，纖維肉瘤，卵巢癌等多種腫瘤有治療作用[2-5]。 研究發(fā)現(xiàn)，丹皮酚可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞生長[4]。

血管內(nèi)皮生長因子是公認(rèn)的促進(jìn)血管生長的因子，其參與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移，其高表達(dá)的患者示預(yù)后不良[5]。Lee等[3]研究表明丹皮酚可以抑制纖維肉瘤細(xì)胞VEGF的分泌，從而抑制腫瘤新生血管的生長，來抑制腫瘤生長，遷移。筆者的研究中，ELISA實(shí)驗(yàn)提示空白組細(xì)胞VEGF表達(dá)量，明顯高于32 mg/L和128 mg/L丹皮酚組細(xì)胞，表明丹皮酚能夠抑制TCA8113細(xì)胞分泌VEGF。VEGF促進(jìn)腫瘤新生血管形成，當(dāng)VEGF分泌下降時(shí)，腫瘤新生血管形成減少，TCA8113細(xì)胞遷移，侵襲力必然降低。MTT結(jié)果提示丹皮酚對(duì)TCA8113 細(xì)胞有明顯增殖抑制作用，而且隨丹皮酚濃度升高，抑制率也相應(yīng)增加，呈明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系。

綜上所述，丹皮酚能明顯抑制TCA8113細(xì)胞的增殖和腫瘤新生血管的能力，對(duì)其進(jìn)一步研究，可為舌癌治療提供新的方法。

參考文獻(xiàn)

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[2] Horng CT，Shieh PC，Tan TW，et al. Paeonol suppresses chondrosarcoma metastasis through up-regulation of miR-141 by modulating PKCδ and c-Src signaling pathway[J]. Int J Mol Sci.，2014，15（7）：11760-11772.

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[4] Yin J，Wu N，Zeng F，et al. Paeonol induces apoptosis in human ovarian cancer cells[J]. Acta Histochem，2013，115（8）：835-839.

[5] 王阿曼，蔡欣，周濤，等. MMP-2、VEGF、CD105和Ki-67在小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及預(yù)后相關(guān)性研究[J]. 臨床腫瘤學(xué)雜志，2012，17（11）：988-993.

作者單位：223300淮安，江蘇護(hù)理職業(yè)學(xué)院檢驗(yàn)藥學(xué)系

Effect of Paeonol on Proliferation of Human Tongue Carcinoma in Tca8113 Cell

LIU Bolin, Department of Laboratory and Pharmacy, Jiangshu Vocational College of Nursing, Huai’an 223300, China

[Abstract]Objective It is to research the effect of paeonol on the biological behavior of human tongue carcinoma in TCA8113 cells. Methods MTT was used to detect the inhibition of paeonol on the proliferation of TCA8113 cells, with different concentration. Expression level of VEGF was detected by ELISA assay. Results MTT results showed that paeonol has inhibition effects on the proliferation of TCA8113 cell. The inhibition effects are enhanced with the increase of its concentration. ELISA assay indicates that paeonol has inhibited TCA8113 cells secrete VEGF. Conclusion The proliferation of TCA8113 cells can be inhibited by paeonol, and paeonol can inhibi TCA8113 cells secrete VEGF.

[Key words]Tongue carcinoma, TCA8113, Paeonol

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2015.20.147

【文章編號(hào)】1674-9308（2015）20-0200-02

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B

【中圖分類號(hào)】R285