免疫組化染色的操作技巧和注意事項

鞠學(xué)萍

免疫組化染色的操作技巧和注意事項

鞠學(xué)萍

【摘要】目的 對免疫組化染色的操作以及注意事項進行探討，分析存在的問題，提供解決對策。 方法 2010~2011年我院共有200例患者接受免疫組化染色，共有60例問題標(biāo)本，我們對這些問題標(biāo)本進行了研究分析，采取科學(xué)的處理方式應(yīng)對。結(jié)果 通過對這些問題樣本進行了研究分析，針對操作過程中的組織準(zhǔn)備、蠟塊選擇與切片質(zhì)量、抗原修復(fù)以及染色等提出了應(yīng)對措施和科學(xué)建議。結(jié)論 免疫組化染色的每一個步驟和細節(jié)都會對染色的結(jié)果產(chǎn)生影響，所以應(yīng)該要對染色的問題引起重視，提升染色的質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】免疫組化；技術(shù)方法；質(zhì)量控制；抗原修復(fù)

作者單位：163316 黑龍江省大慶市第四醫(yī)院

Operating Skills and Precautions of Immunohistochemical Staining

JU Xueping, Fourth Hospital of Daqing City, Daqing 163316, China

[Abstract]Objective To investigate the operations and precautions of immunohistochemical staining. Analysis of existing problems and provide Solutions. Methods 200 patients underwent immunohistochemical staining from 2010 to 2011 in our hospital, a total of 60 cases of the problem specimens,We have studied these issues specimens, taking a scientific approach to deal with. Results The analysis of these issues in our hospital samples. During the operation of the organization for the preparation, selection and slice quality wax block, antigen retrieval and staining proposed countermeasures and scientific advice. Conclusion Every step and detail of Immunohistochemical staining will have an impact on the results of staining, So the stained problem should be attention, improve the quality of staining.

[Key words]Immunohistochemistry, Technical methods, Quality control, Antigen retrieval

免疫組化（IHC）技術(shù)是上世紀(jì)80年代開始在我國使用，目前也有幾十年的發(fā)展歷史，是病理科室非常重要的一項應(yīng)用技術(shù)。綜合性操作會讓反應(yīng)步驟增加，受到的影響因素也會增加，同時要求技術(shù)員能夠有比較扎實的操作技術(shù)，在臨床個體化治療應(yīng)用中非常重要。免疫組化技術(shù)的問題也是比較突出，本文就200例免疫組化染色標(biāo)本進行了探討，對其中的60例問題標(biāo)本進行了分析，給出了應(yīng)對策略。

1　免疫組化染色不理想的原因分析及改進措施

1.1 大分子化學(xué)結(jié)構(gòu)非常穩(wěn)定，水腫以膠狀存在，不容易被破壞，所以體內(nèi)可以存在很長的時間，對淋巴細胞可以產(chǎn)生持續(xù)的刺激。抗體是人體重要防御機制，在受到抗原的刺激就會由漿細胞分泌一種蛋白質(zhì)，通過稀釋抗體可以實現(xiàn)該蛋白質(zhì)疏水性的變化，如果PH和抗體等電點接近，疏水性會非常大[1]。

1.2 抗原和抗體的反應(yīng)會引起免疫系統(tǒng)的免疫應(yīng)答反應(yīng)，產(chǎn)生特異性物質(zhì)，抗體是在刺激源的影響下，漿細胞產(chǎn)生的特異性蛋白質(zhì)，如果組織內(nèi)有其他的相同抗原就會和抗體產(chǎn)生反應(yīng)，多克隆抗體具有很強適應(yīng)性，在使用的時候應(yīng)該比較注意，避免其發(fā)生交叉反應(yīng)。

1.3 抗原決定簇被封閉后會引起抗原間的相交，需要有效的進行抗原修復(fù)。酶消化以及熱修復(fù)是使用比較多的方式，除此外，微波和高壓高溫也是經(jīng)常用到的方式。

1.4 實驗結(jié)果會因為組織固定不恰當(dāng)而受到影響，結(jié)果的好壞和抗原保持之間的聯(lián)系非常緊密[2]；固定不當(dāng)?shù)脑?，組織會出現(xiàn)自溶、變干硬、形變，如果自溶，抗原必然會丟失，干硬則是變性的表現(xiàn)，都會造成抗原功能的改變，導(dǎo)致染色后脫色以及顏色不正確，因此體積要求非常嚴格。

2　IHC過程及注意事項

2.1 組織準(zhǔn)備免疫組化要求

先將組織處理妥當(dāng)，組織保存良好，組織和細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，抗原免疫活性值都能夠確保正常，那么組織和固定進行處理的時候就要求比較嚴格，能夠即時、必要處理。

2.2 蠟塊選擇與切片質(zhì)量

對于脫水和包埋質(zhì)量好的蠟塊在選擇上，能夠充分的保證蠟?zāi)さ耐暾?、均勻程度。通常切片的厚度要確保在3 μm之內(nèi)，對于出現(xiàn)過厚的切片會導(dǎo)致與載玻片的粘附性不牢固，對于乳腺組織是人體中脂肪含量最多的部位之一，在高溫和高壓的修復(fù)處理作用時，容易產(chǎn)生脫片現(xiàn)象[3]。

2.3 進行抗原修復(fù)的時候，因為多聚賴氨酸分子以及組織切片的結(jié)合力存在，會給修復(fù)帶來障礙，所以需要對其結(jié)合力進行減弱，才能夠避免脫片。對修復(fù)液的選擇也是非常重要的，溫和的藥物可以作為首選，常用的有枸櫞酸修復(fù)液等。

2.4 染色中應(yīng)注意的一些細節(jié)，把孵育盒放置在一個比較平穩(wěn)的地方，不要使抗體液流到組織的另一側(cè)，這會使結(jié)果呈現(xiàn)假陰性反應(yīng)；另外抗體孵育盒里面要留有適量的蒸餾水，但水不宜過多，防止因水蒸汽在盒蓋聚成水滴，掉落在切片上，造成抗體稀釋；再有就是保持切片在整個染色過程中，一定要保持濕潤，不要出現(xiàn)干片的現(xiàn)象。最后在加入抗體的時候，要把組織上的水弄干，避免抗體稀釋影響檢測結(jié)果。對于免

疫組化染色過程, 提出了主要的應(yīng)對措施以及科學(xué)合理的建議。

3　討論

免疫組化技術(shù)目前已成為病理科工作的重要組成部分，免疫組化對于疑難病例的診斷起到了決定性作用，尤其是對腫瘤的治療方法以及藥物的選擇具有指導(dǎo)意義。大型醫(yī)院均已采用自動化免疫組化染色儀，而大部分中小型醫(yī)院仍然依靠人工操作。

人體抗體和抗原的結(jié)合存在非常高的特異性，免疫組織化學(xué)也是使用這樣的原理，將組織以及細胞的化學(xué)物質(zhì)提取后，當(dāng)成抗原來進行動物抗體刺激，用刺激后組織和細胞產(chǎn)生的抗體來進行檢測組織以及細胞同類抗原。免疫組化技術(shù)的過程和環(huán)節(jié)比較多，內(nèi)容也比較復(fù)雜，在關(guān)鍵的地方符合標(biāo)準(zhǔn)后獲得的檢驗結(jié)果才能夠有效可靠，因此看似單一的技術(shù)，其實不是非常容易掌握的?，F(xiàn)在的科學(xué)技術(shù)發(fā)展快速，臨床中對于醫(yī)護人員的能力要求也是越來越高，對各項標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范認真的執(zhí)行，才可以促進免疫組化的發(fā)展，讓患者的臨床治療獲得可靠的幫助。本文對免疫組化染色的操作技巧和注意事項進行了簡單的探討分析，根據(jù)筆者的經(jīng)驗進行了一些闡述，給出了一些建議，希望能夠給免疫組化的應(yīng)用提供一些參考信息。

參考文獻

[1]李德本，王濤，姜駿. 免疫組化染色的操作技巧和注意事項[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2011，27(11)：1260-1261.

[2]周會芹，楊江輝，余搖琦，等. 不同組織固定液對免疫組化結(jié)果的影響[J]. 診斷病理學(xué)雜志，2009，16（6）：478.

[3]許搖力，吳搖珊，楊清海，等. 免疫組化技術(shù)（七）[J]. 診斷病理學(xué)雜志，2010，17（2）：160.

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2015.18.030

【文章編號】1674-9308（2015）18-0048-02

【文獻標(biāo)識碼】B

【中圖分類號】R446.6