CCNB2在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

【摘要】 目的 統(tǒng)計(jì)結(jié)直腸癌中CCNB2的表達(dá)情況，分析結(jié)直腸癌中CCNB2陽(yáng)性表達(dá)的臨床意義。方法 隨機(jī)選取2010年6月～2013年11月份我院在手術(shù)治療中留取的結(jié)直腸癌病標(biāo)本57例和癌旁正常組織標(biāo)本49例，用免疫組化法檢測(cè)CCNB2蛋白表達(dá)，用實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)CCNB2 mRNA表達(dá)。結(jié)果 CCNB2蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要在細(xì)胞質(zhì)，偶見(jiàn)于細(xì)胞核。結(jié)直腸癌組織中CCNB2 mRNA相對(duì)表達(dá)量（36.52±8.82）和CCNB2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率（86.21％）均顯著高于癌旁正常組織，P<0.05，差異具有顯著性。結(jié)論 CCNB2在結(jié)直腸癌組織呈高表達(dá)，有望作為診斷和預(yù)后的參考指標(biāo)。

doi:10.3969/j.issn.1674-9316.2015.04.005

工作單位：014000包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院普外二科

The Expressions of CCNB2 in Colorectal Cancer Tissue and Its Clinical Significance

WANG Xinghong General Surgery Department Ⅱ，The First Affiliated Hospital of Baotou Medical College in Inner Mongolia，Baotou 014000，China

【Abstract】

Objective To sum up the expressions of CCNB2 in colorectal cancer and to analyze its clinical significance of positive expression. Methods From June 2010 to November 2013，57 specimens of colorectal cancer were taken during the surgery and 49 specimens of adjacent normal tissue were taken. They were randomly selected as the objects in our hospital. CCNB2 protein expression was detected by immunohistochemical method CCNB2mRNA expression was detected by real-time quantitative PCR method. Results The positive expression of CCNB2 protein was mainly in the cytoplasm and occasionally in the nucleus. The relative expression value of CCNB2mRNA in colorectal cancer tissues was （36.52±8.82） and CCNB2 protein positive expression rate was （86.21％）. They were both significantly higher than that of adjacent normal tissues，P<0.05，the difference was significant. Conclusion In colorectal cancer tissues，CCNB2 showed high expressions，it is expected to become the early evaluation index of prognosis.

【Key words】Colorectal cancer，CCNB2，Immunohistochemistry

CCNB2 （Cyclin B2，細(xì)胞周期蛋白B2）作為細(xì)胞周期蛋白家族之一，不僅在惡性腫瘤組織中呈高水平陽(yáng)性表達(dá)，并且與患者的病理特征、預(yù)后具有顯著相關(guān)性 ［1］。為了給結(jié)直腸癌的診斷和預(yù)后評(píng)估提供借鑒，筆者對(duì)檢測(cè)并分析了結(jié)直腸癌組織中CCNB2的陽(yáng)性表達(dá)情況，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 組織來(lái)源

隨機(jī)選擇2010年6月～2013年11月份期間我院經(jīng)手術(shù)切除治療的57例結(jié)直腸癌患者共為研究對(duì)象，其中男性32例，女性25例，年齡27～70歲，平均年齡（57.59±6.41）歲，22例為結(jié)腸癌，35例為直腸癌，組織學(xué)分級(jí)結(jié)果為40例Ⅰ～Ⅱ級(jí)，17例Ⅲ級(jí)。在手術(shù)中共切取57例結(jié)直腸癌組織標(biāo)本以及49例癌旁正常組織標(biāo)本。病例入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）臨床相關(guān)資料完整，無(wú)缺漏；（2）患者知情同意；（3）術(shù)前均未采取放療、化療等其他干預(yù)措施。

1.2 研究方法

1.2.1 CCNB2 mRNA檢測(cè) 組織置于研磨缽中馬上加入液氮，迅速研成粉末狀，應(yīng)用TRIZOL依據(jù)說(shuō)明書(shū)提取組織總RNA，利用酶標(biāo)儀檢測(cè)濃度和OD 值，再按將RNA 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，行PCR反應(yīng)。內(nèi)參為GAPDH 和CCNB2引物。反應(yīng)體系為10 μl，反應(yīng)條件參數(shù)：95℃預(yù)變性30 s后，再95 ℃ 作用5 s，60℃作用30 s，共40個(gè)循環(huán)。檢測(cè)CT 值并行2- ΔΔCT 法計(jì)算。

1.2.2 CCNB2蛋白免檢測(cè) 標(biāo)本在經(jīng)過(guò)固定（中性甲醛溶液）、包埋（石蠟）處理后行常規(guī)切片，室溫下添加3％ H2O2孵育20 min，封閉SOD，微波修復(fù)抗原，添加山羊血清和抗CCNB2抗體，放置在4℃中孵育24 h，滴加生物素標(biāo)記羊抗鼠二抗，37℃下孵育60 min，辣根酶標(biāo)記后37℃下再孵育30 min后進(jìn)行DAB顯色反應(yīng)，再經(jīng)蘇木精復(fù)染、脫水以及透明處理后，用中性樹(shù)膠進(jìn)行封片，用顯微鏡進(jìn)行觀察和拍照。

1.3 結(jié)果判定

參照文獻(xiàn)報(bào)道進(jìn)行陽(yáng)性結(jié)果評(píng)價(jià) ［2］。細(xì)胞內(nèi)見(jiàn)棕黃色顆粒為CCNB2陽(yáng)性表達(dá)，無(wú)陽(yáng)性顆粒表達(dá)為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS.14.0，計(jì)量資料用t檢驗(yàn)分析，計(jì)數(shù)資料用χ 2檢驗(yàn)分析，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

結(jié)直腸癌組織中CCNB2蛋白陽(yáng)性表達(dá)共50例，陽(yáng)性表達(dá)率為86.21％，CCNB2 mRNA相對(duì)表達(dá)量為36.52±8.82，癌旁正常組織中未見(jiàn)CCNB2蛋白陽(yáng)性表達(dá)，CCNB2 mRNA相對(duì)表達(dá)量為11.42±3.21，兩種檢測(cè)結(jié)果比較，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

CCNB2是B型細(xì)胞周期蛋白之一，在結(jié)直腸癌中，可與位于CNNB2啟動(dòng)子的DNA片斷能夠與NF-Y 亞基結(jié)合，調(diào)控激活CCNB2啟動(dòng)子活性。CCNB2表達(dá)水平上調(diào)能夠加快細(xì)胞周期進(jìn)程，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞異常增殖。相關(guān)研究證實(shí) ［2］也CCNB2能夠結(jié)合CDC2激酶，降低CCNB2表達(dá)能夠促使細(xì)胞周期停滯，進(jìn)而抑制腫瘤進(jìn)展。本實(shí)驗(yàn)中，結(jié)直腸組織中可見(jiàn)CCNB2異常高表達(dá)，其CCNB2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率以及mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著高于正常組織。綜上所述，結(jié)直腸癌中CCNB2呈高表達(dá)，其對(duì)診斷和判斷預(yù)后具有重要作用。