H P L C定量法基礎(chǔ)知識

中屋慎 小谷口美也子等

本文深入淺出地講解分析實驗中的各種問題，如對分析值誤差的理解、檢量線的意義、高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）定量法、高效陰離子變換色譜（high performance anion exchange chromatography-pulsed amperometric detector，HPAEC-PAD）分析法、高效液相色譜-電噴霧檢測器（highperformanceliquid chromatography-charged aerosol detector，HPLC-CAD）分析法、采用HPLC-CAD法進(jìn)行食品中葡萄糖的定量等。分析方法大致分為兩種，第一種是直接定量對象物；第二種是依托與對象物有穩(wěn)定量化關(guān)系的物質(zhì)，間接求得對象物的量值。分析中有可能出現(xiàn)由各種因素導(dǎo)致的誤差，如取樣、稱量、換算小數(shù)點、操作個人之間的習(xí)慣等等，總之所得結(jié)果往往不是絕對準(zhǔn)確的。誤差是統(tǒng)計學(xué)上的一個重要概念，因此，1993年國際標(biāo)準(zhǔn)化組織等7個機(jī)構(gòu)聯(lián)名出版了《如何表現(xiàn)檢測中誤差值之規(guī)范》的冊子，將誤差值定義為“檢測結(jié)果中出現(xiàn)的附著在檢測值上的合理性數(shù)值偏差”。由于將檢測過程中各操作的誤差全部數(shù)據(jù)化了，因此就能把整個檢測過程的誤差值統(tǒng)一計算出來，因而可以得到相當(dāng)準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。

HPLC（高效液相色譜）法是檢測時間短重復(fù)性佳，且所用試樣量少的分析法，該設(shè)備是由分離試樣中的成分和感知溶出成分這兩種部分組成，因此該設(shè)備必須是能高效檢測對象物成分的結(jié)構(gòu)，這樣就必須選用很適合的檢出器。高效陰離子交換色譜層析（HPAEC-PAD）法可高效檢測糖類和氨基酸類化合物，隨著試樣濃度的變化其出峰面積也會改變，因此每次都應(yīng)使用標(biāo)樣并制作檢量線圖。