MGMT基因啟動子去甲基化抑制MNU誘導(dǎo)的人胃上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的機(jī)制研究

陳月霞，齊宏妍(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理與病理生理學(xué)教研室，浙江杭州310058)

MGMT基因啟動子去甲基化抑制MNU誘導(dǎo)的人胃上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的機(jī)制研究

陳月霞，齊宏妍△
(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理與病理生理學(xué)教研室，浙江杭州310058)

目的:研究O6-甲基鳥嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)在N-甲基亞硝基脲(MNU)誘導(dǎo)的人胃上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中持續(xù)激活的分子調(diào)控機(jī)制。方法:建立MNU誘導(dǎo)的人正常胃上皮細(xì)胞(GES-1)惡性轉(zhuǎn)化模型，real-time PCR和Western blot檢測建模中1周、4周和8周MGMT的動態(tài)表達(dá)水平。報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測MGMT啟動子區(qū)的轉(zhuǎn)錄激活。MSP和BSP定性定量檢測MGMT基因啟動子區(qū)CpG的甲基化程度。ChIP實(shí)驗(yàn)檢測DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT1)和H3K9met3、H3K4met2在MGMT基因轉(zhuǎn)錄激活中的作用。Soft agar、平板克隆及細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測MGMT基因表達(dá)上調(diào)在GES-1細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中的功能。結(jié)果: MNU誘導(dǎo)的GES-1惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞中，MGMT的表達(dá)持續(xù)激活，但MGMT啟動子區(qū)報(bào)告基因并不被激活。MNU刺激顯著抑制MGMT基因啟動子區(qū)CpG的甲基化水平，同時(shí)抑制DNMT1與MGMT基因的結(jié)合，而且調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄抑制和轉(zhuǎn)錄激活相關(guān)的組蛋白修飾類型H3K9met3與H3K4met2在該區(qū)域的富集分別減少和增加。此外，MGMT基因的高表達(dá)，抑制MNU誘導(dǎo)的GES-1惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞的增殖和克隆形成能力，利用MGMT特異性抑制劑O6-BG處理細(xì)胞，顯著促進(jìn)MNU誘導(dǎo)的細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化進(jìn)程。結(jié)論: MNU通過誘導(dǎo)MGMT基因DNA去甲基化，持續(xù)激活其表達(dá)。MGMT的表達(dá)上調(diào)抑制MNU誘導(dǎo)的人胃正常上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。本研究揭示了MGMT基因在MNU誘導(dǎo)的細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中的表達(dá)調(diào)控機(jī)制，為進(jìn)一步研究化學(xué)致癌物誘發(fā)腫瘤發(fā)生提供了新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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