二甲雙胍通過(guò)激活A(yù)MPK和抑制HNF4α而抑制血管緊張素II引起的TGF-β1產(chǎn)生

陳瑞飛，肖　晗，張幼怡(北京大學(xué)第三醫(yī)院血管醫(yī)學(xué)研究所，北京100191)

二甲雙胍通過(guò)激活A(yù)MPK和抑制HNF4α而抑制血管緊張素II引起的TGF-β1產(chǎn)生

陳瑞飛，肖晗，張幼怡△
(北京大學(xué)第三醫(yī)院血管醫(yī)學(xué)研究所，北京100191)

目的:近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)一線降糖藥二甲雙胍(metformin)可通過(guò)激活A(yù)MPK發(fā)揮心血管保護(hù)作用。本研究旨在探討metformin能否通過(guò)激活A(yù)MPK抑制Ang II引起的心臟成纖維細(xì)胞TGF-β1產(chǎn)生及其相關(guān)機(jī)制。方法:10周齡野生型C57BL/6和AMPKα2－/－小鼠，皮下植入微滲泵給予Ang II (3 mg· kg－1·d－1) 7 d，同時(shí)皮下注射metformin(200 mg·kg－1·d－1)。原代分離培養(yǎng)成年小鼠心臟成纖維細(xì)胞(AMCF)。采用real-time PCR、Western blot、雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)、染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(ChIP)等方法進(jìn)行研究。結(jié)果:在野生型C57BL/6小鼠，metformin可抑制Ang II引起的心臟纖維化及TGF-β1的產(chǎn)生，而在AMPKα2－/－小鼠中，metformin則不能抑制Ang II引起的纖維化和TGF-β1產(chǎn)生。在野生型AMCF，metformin抑制Ang II引起的TGF-β1的產(chǎn)生，Compound C(AMPK抑制劑)能夠逆轉(zhuǎn)metformin的抑制作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，Ang II上調(diào)肝細(xì)胞核因子4α(HNF4α)蛋白表達(dá)，增加HNF4α與TGF-β1基因啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合，雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)HNF4α作用于TGF-β1基因啟動(dòng)子區(qū)，并介導(dǎo)其轉(zhuǎn)錄。HNF4α腺病毒過(guò)表達(dá)可增加AMCF中TGF-β1的產(chǎn)生;相反，通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染HNF4α siRNA后，Ang II引起的TGF-β1生成增加被抑制。這些結(jié)果提示HNF4α介導(dǎo)Ang II引起的TGF-β1轉(zhuǎn)錄表達(dá)。Metformin可抑制Ang II引起的HNF4α蛋白上調(diào)，Compound C可以逆轉(zhuǎn)此作用，同時(shí)ChIP結(jié)果也表明metformin能夠抑制Ang II引起的HNF4α 與TGF-β1的結(jié)合。結(jié)論: Metformin通過(guò)激活A(yù)MPK抑制HNF4α蛋白表達(dá)及其與TGF-β1轉(zhuǎn)錄區(qū)的結(jié)合，進(jìn)而抑制Ang II引起的TGF-β1轉(zhuǎn)錄表達(dá)增加。

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