獸藥殘留免疫學(xué)快速檢測技術(shù)研究進(jìn)展

張華成

（浙江富陽科興生物化工有限公司,浙江富陽 311400）

獸藥殘留免疫學(xué)快速檢測技術(shù)研究進(jìn)展

張華成

（浙江富陽科興生物化工有限公司,浙江富陽 311400）

獸藥在降低畜禽發(fā)病率與死亡率，提高畜禽養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益方面發(fā)揮了巨大作用，但隨著獸藥品種和數(shù)量不斷增加，以及獸藥甚至違禁藥品在臨床中的大量濫用，獸藥蓄積在動(dòng)物機(jī)體及其動(dòng)物產(chǎn)品中造成獸藥殘留，由獸藥殘留導(dǎo)致的微生物耐藥性、生態(tài)環(huán)境毒性、食品安全等問題日益受到重視。故加強(qiáng)獸藥殘留檢測技術(shù)的研究與應(yīng)用對保障食品安全和人類健康均具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。隨著現(xiàn)代免疫學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，獸藥殘留免疫學(xué)檢測技術(shù)日臻完善，本文就近年來針對獸藥殘留的酶聯(lián)免疫法、放射免疫分析法、電化學(xué)免疫方法、膠體金免疫層析法等免疫學(xué)檢測技術(shù)做一簡要綜述，以期為我國獸藥殘留的快速檢測提供參考。

1 酶聯(lián)免疫法（ELISA）

ELISA是將抗原或抗體結(jié)合在固相載體表面，并使其保留免疫活性，再加入抗體或抗原與酶結(jié)合成的偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物既有酶的活性特異性又具有與固相載體表面抗原或抗體特異性結(jié)合的活性，再加入酶的底物即可呈現(xiàn)出顏色反應(yīng)。王鶴佳等[1]利用尼卡巴嗪殘留標(biāo)志物作為抗原免疫動(dòng)物獲得特異性抗體，建立了雞肉中尼卡巴嗪殘留的ELISA檢測方法，該方法對雞肉中檢測限為9.2 μg/kg，在靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度方面均能滿足獸藥殘留快速篩選的檢測要求。ELISA方法檢測快速、操作簡單，敏感性高、特異性強(qiáng)，已廣泛應(yīng)用于常見獸藥殘留的快速檢測。

2 放射免疫分析法

放射免疫分析法將微生物學(xué)與免疫學(xué)有效結(jié)合，具有分析成本低、操作簡單、檢測速度快，整個(gè)檢測過程大約20 min左右，特別適用于現(xiàn)場大量樣品的篩選。但該方法的放射性對人體和環(huán)境造成一定的危害，容易造成污染。周浩等[2]應(yīng)用放射免疫法檢測蜂蜜中四環(huán)素類抗生素的殘留，該方法特異性強(qiáng)，與氯霉素、紅霉素、鏈霉素、青霉素G、磺胺嘧啶等其他族抗生素?zé)o交叉反應(yīng)，該方法與液相色譜質(zhì)譜法符合率達(dá)100 %，能達(dá)到檢測蜂蜜中四環(huán)素類抗生素殘留的要求，為四環(huán)素類抗生素殘留的快速檢測提供了一種很好的快速篩選方法。

3 電化學(xué)免疫方法

電化學(xué)免疫檢測方法測定快速、靈敏、經(jīng)濟(jì)、適合大規(guī)模生產(chǎn)，比較適合現(xiàn)代化畜產(chǎn)品檢測的需要。李孝君等[3]將玻碳電極表面氧化處理后，用戊二醛作交聯(lián)劑，將新亞甲藍(lán)及辣根過氧化酶標(biāo)記的青霉素多克隆抗體修飾到電極表面，制成了電流型青霉素免疫傳感器，并對雞肉中青霉素的殘留進(jìn)行了定量的檢測。結(jié)果表明，傳感器對雞肉中含有的青霉素最低檢出限為1.90ng/g，受交叉干擾和雞肉中其他成分干擾均較小。該方法具有操作簡易、反應(yīng)快、靈敏度高、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，可用于實(shí)際肉樣中青霉素殘留量的測定。

4 化學(xué)發(fā)光免疫法

化學(xué)發(fā)光免疫法將免疫反應(yīng)的特異性與化學(xué)發(fā)光分析的靈敏性相結(jié)合，具有特異性好、靈敏度高、簡便快速、標(biāo)記物有效期長、無輻射、可實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)化檢測等優(yōu)點(diǎn)。馬玲等[4]利用制備的抗磺胺二甲嘧啶單克隆抗體建立了磺胺二甲嘧啶間接競爭化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法，該方法批內(nèi)和批間變異系數(shù)分別為3.07 %和8.22 %，與磺胺脒等藥物無交叉反應(yīng)，與ELISA試劑盒的符合率為100 %。化學(xué)發(fā)光免疫分析法是免疫分析的重要發(fā)展方向，有逐步取代放射免疫和ELISA的趨勢。

5 時(shí)間分辨熒光免疫法

時(shí)間分辨熒光免疫分析方法采用稀土離子螯合物作為標(biāo)記物，通過時(shí)間分辨和波長分辨，能夠有效降低背景熒光的干擾，具有操作簡便、靈敏度高、無放射性污染等優(yōu)點(diǎn)。李麗華等[5]將環(huán)丙沙星-卵清白蛋白包被于固相微孔板，利用銪標(biāo)羊抗兔IgG示蹤，建立環(huán)丙沙星時(shí)間分辨熒光免疫分析方法，該方法的檢測限為0.5 μg/L，批內(nèi)和批間變異系數(shù)分別為7.42 %和10.92 %，具有靈敏度高、特異性好、性能穩(wěn)定的優(yōu)點(diǎn)，適于高通量篩查。時(shí)間分辨熒光免疫分析方法樣品處理簡單、線性范圍相對較寬、可滿足實(shí)際樣品的檢測要求，可實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)大批量樣品的篩查，具有一定的推廣應(yīng)用前景。

6 量子點(diǎn)熒光免疫法

量子點(diǎn)通過鏈霉親和素和生物素親和作用的抗體標(biāo)記技術(shù)在藥物檢測方面逐步得到應(yīng)用，楊杰等[6]將量子點(diǎn)同抗氧氟沙星抗體通過生物素-親和素系統(tǒng)進(jìn)行連接，建立了基于量子點(diǎn)的氧氟沙星間接熒光免疫檢測方法，該方法針對實(shí)際牛奶樣品中氧氟沙星抗生素殘留回收率測定結(jié)果為88.2 %～105.3 %，變異系數(shù)達(dá)7.3 %～10.9 %，可以替代傳統(tǒng)的ELISA方法應(yīng)用于牛奶中氧氟沙星抗生素殘留的實(shí)際測定中，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡單、便于推廣等優(yōu)點(diǎn)，是一種可用于不同藥物殘留的多重測定技術(shù)。

7 膠體金免疫層析法

膠體金免疫層析法以毛細(xì)作用使樣品溶液在纖維膜上泳動(dòng)，層析時(shí)膠體金標(biāo)記物與待測物的絡(luò)合物被相應(yīng)的配體捕獲而濃集顯色，以顯色條帶的有無即可進(jìn)行快速檢測。趙正苗等[7]應(yīng)用膠體金免疫層析法檢測動(dòng)物組織中殘留的呋喃西林代謝物，表明試紙條檢測限為1.0 μg/kg，假陽性率小于5 %，假陰性率為0 %，對其他藥物無交叉反應(yīng)，特異性較好，對實(shí)際樣品檢測結(jié)果與LCMS/MS法檢測結(jié)果一致。膠體金免疫層析方法具有操作簡便、快速、直觀的特點(diǎn)，可作為篩選法對樣品進(jìn)行現(xiàn)場快速篩查。

8 結(jié)語

獸藥殘留與食品安全和人類健康密切相關(guān)，故加強(qiáng)其檢測技術(shù)的研究與推廣應(yīng)用至關(guān)重要。免疫學(xué)技術(shù)檢測快速、操作簡單、通量高，特別適合于基層現(xiàn)場的快速篩查。進(jìn)一步提高檢測的特異性和靈敏度，實(shí)現(xiàn)多種成分的同時(shí)檢測將是免疫學(xué)快速檢測技術(shù)的發(fā)展趨勢。相信隨著免疫學(xué)技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展以及在藥物殘留檢測方面的不斷應(yīng)用，獸藥殘留免疫學(xué)檢測技術(shù)將具有更加廣闊的開發(fā)與應(yīng)用前景，為食品安全和人類健康保駕護(hù)航。

[1] 王鶴佳，劉智宏，汪霞，等. 酶聯(lián)免疫法測定雞肉中尼卡巴嗪殘留[J].2014，48（3）：59-61.

[2] 周浩，李俊霞，楊紅，等. 蜂蜜中四環(huán)素類抗生素的放射免疫法檢測[J]. 食品研究與開發(fā)，2012，33（11）：160-162.

[3] 李孝君，李蘭，馬潔，等. 電化學(xué)免疫法測定雞肉組織中青霉素[J].應(yīng)用化學(xué)，2009，26（6）：716-720.

[4] 馬玲，韋建興，陸忠礎(chǔ)，等. 磺胺二甲嘧啶間接競爭化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法的建立及應(yīng)用[J]. 中國食品衛(wèi)生雜志，2014，26（5）：455-460.

[5] 李麗華，白瑞櫻，孫遠(yuǎn)明，等. 環(huán)丙沙星時(shí)間分辨熒光免疫分析方法的建立與應(yīng)用[J]. 食品科學(xué)，2012，33（8）：216-220.

[6] 楊杰，劉娜，劉琪，等. 量子點(diǎn)熒光免疫法快速測定氧氟沙星[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，28（6）：541-545.

[7] 趙正苗，羅曉琴，汪善良，等. 應(yīng)用膠體金免疫層析法檢測動(dòng)物組織中呋喃西林代謝物的殘留[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2012（5）：4-5.

張華成（1976-），男，浙江浦江人，漢族，本科，研究方向:獸醫(yī)獸藥。