• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    寄生蟲烯醇化酶的研究進(jìn)展

    2015-01-25 14:22:25李俊鵬張延忠王曉煒
    關(guān)鍵詞:化酶烯醇基因

    陳 寧,程 田,王 平,李俊鵬,張延忠,魯 藝,王曉煒

    (1.深圳市藥品檢驗(yàn)所,深圳 518057;2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院,廣州 510642;3.深圳市瑞鵬寵物醫(yī)院,深圳 518000)

    寄生蟲烯醇化酶的研究進(jìn)展

    陳 寧1,程 田2,王 平1,李俊鵬1,張延忠3,魯 藝1,王曉煒1

    (1.深圳市藥品檢驗(yàn)所,深圳 518057;2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院,廣州 510642;3.深圳市瑞鵬寵物醫(yī)院,深圳 518000)

    烯醇化酶是糖酵解過程中促進(jìn)磷酸甘油酸和磷酸烯醇式丙酮酸相互轉(zhuǎn)換的重要催化酶,同時(shí)也是存在于真核和原核細(xì)胞表面的多功能酶。最近研究發(fā)現(xiàn),它能夠激活纖溶酶原,參與病原的感染過程,而且也是主要的免疫刺激性蛋白和藥物作用靶點(diǎn)。本文綜述當(dāng)前寄生蟲烯醇化酶的研究成果,旨在探討其作為寄生蟲病的診斷、潛在候選疫苗及藥物靶點(diǎn)的可能性。

    寄生蟲;烯醇化酶;糖酵解

    烯醇化酶(enolase)又稱磷酸丙酮酸水合酶(phosphopyruvate hydratase),是一種廣泛存在于包括細(xì)菌和高等生物體內(nèi)的高度保守的酶[1],在糖酵解的第九個(gè)步驟中,能促進(jìn)2-磷酸-D-甘油酸(2-PGA)與磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)的相互轉(zhuǎn)化[2],磷酸烯醇丙酮酸將會(huì)經(jīng)由丙酮酸激酶的催化,使原本接在氧原子上的磷酸根轉(zhuǎn)移到ADP上,進(jìn)而生成ATP以及丙酮酸,這個(gè)反應(yīng)會(huì)放出大量的能量,因此,烯醇化酶在細(xì)胞能量代謝中起重要作用。

    大多數(shù)生物體內(nèi)的烯醇化酶只有一種形式,但在哺乳動(dòng)物中它以3種不同形式的組織特異性同工酶存在,分別為α、β、γ型[3]。哺乳動(dòng)物體內(nèi)的烯醇化酶通常以二聚體形式存在,而原核生物中則多以八聚體形式存在,如豬鏈球菌[4]。作為重要的細(xì)胞質(zhì)酶,它存在于很多真核和原核細(xì)胞表面,盡管它不具備經(jīng)典表面蛋白所擁有的信號(hào)肽、跨膜區(qū)等特點(diǎn),但還是能夠在細(xì)胞表面表達(dá)[5],而且能在豬蛔蟲的排泄/分泌物(ES)中檢測(cè)出來[6]。在真核細(xì)胞中,它存在于T細(xì)胞、B細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞的表面。定位于不同位點(diǎn)的烯醇化酶發(fā)揮著不同的功能,除了催化糖酵解過程之外,烯醇化酶還參與了多種病原微生物對(duì)寄主的組織入侵和轉(zhuǎn)移過程,可以作為疫苗候選因子和藥物靶標(biāo)。近年來,寄生蟲烯醇化酶的研究多圍繞基因特性、蛋白特性、生物學(xué)分析、免疫原性等方面,本文就目前國內(nèi)外寄生蟲的烯醇化酶的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

    1 原蟲烯醇化酶

    1.1 瘧原蟲烯醇化酶 烯醇化酶存在于瘧原蟲生命周期的每一個(gè)階段。除了細(xì)胞質(zhì)之外,烯醇酶還與細(xì)胞核、食物泡、細(xì)胞骨架和等離子體膜形成有關(guān)。烯醇酶的多樣化定位表明,除了在糖酵解的催化作用之外,烯醇化酶可能參與許多其他生物功能。例如,惡性瘧原蟲裂殖子表面烯醇化酶可能參與紅細(xì)胞入侵,囊泡中的烯醇化酶可能參與食物泡形成,細(xì)胞核烯醇化酶可能在轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮作用[7]。動(dòng)合子表面烯醇化酶主要具有兩個(gè)功能:結(jié)合到蚊蟲中腸上皮來對(duì)寄主進(jìn)行入侵;通過烯醇化酶內(nèi)部的賴氨酸肽段(DKSLVK)結(jié)合動(dòng)合子表面的纖溶酶原,激活寄主溶纖系統(tǒng)來侵染寄主[8]。Das研究小組2011年構(gòu)建了惡性瘧原蟲釀酒酵母的烯醇化酶缺失株Tetr-Eno2,該重組蛋白將Enolase1基因敲除,Enolase2基因的表達(dá)受四環(huán)素阻遏操縱子的調(diào)控。當(dāng)由于四環(huán)素阻遏操縱子的調(diào)節(jié)造成Enolase2低表達(dá)時(shí),Tetr-Eno2缺失株生長緩慢;當(dāng)加入高濃度的強(qiáng)力霉素(10 μg/mL)時(shí),Tetr-Eno2缺失株停止生長,并且出現(xiàn)空泡碎片和蛋白表達(dá)水平的變化。當(dāng)恢復(fù)缺失株的惡性瘧原蟲烯醇化酶表達(dá)水平時(shí),Tetr-Eno2缺失株恢復(fù)所有表型變化。這些研究說明惡性瘧原蟲烯醇化酶對(duì)滋養(yǎng)體期的食物納蟲泡的生長發(fā)育有重要作用[9]。在惡性瘧原蟲感染過程中,烯醇化酶可以延緩小鼠的瘧原蟲的入侵,并且降低小鼠的死亡率[10]。

    1.2 弓形蟲烯醇化酶 剛地弓形蟲編碼兩個(gè)期特異性表達(dá)的烯醇化酶(ENO1、ENO2),二者核酸序列及氨基酸序列相似性很高,但是由于各自表達(dá)階段不同的代謝及適應(yīng)能力使得它們?cè)诿笇W(xué)動(dòng)力學(xué)上有一定的差異。Ruan等[11]發(fā)現(xiàn)弓形蟲烯醇化酶enolase 1 (TgENO1)存在于緩殖子階段,enolase 2(TgENO2)存在于速殖子階段,他獲得弓形蟲烯醇化酶的enolase 1的晶體結(jié)構(gòu)并對(duì)其進(jìn)行分析,其二級(jí)結(jié)構(gòu)為緩殖子期所特有,發(fā)現(xiàn)重組烯醇化酶(TgENO1)可以特異性結(jié)合TTTTCT片段,結(jié)果表明,弓形蟲烯醇化酶可以調(diào)節(jié)基因表達(dá),enolase1可作為潛在藥物靶標(biāo)用于腦弓形蟲的治療。Holmes等[12]用RNA干涉的方法將烯醇化酶eno2 dsRNA導(dǎo)入弓形蟲,并成功將eno2基因沉默,在ENO1基因定位上呈現(xiàn)輕微表型變化。

    張華景等[13]根據(jù)弓形蟲已知序列擴(kuò)增eno2基因,獲得eno2基因全長1353bp,編碼444個(gè)氨基酸,分子量約為55 kDa。Western blot顯示,重組蛋白能被感染弓形蟲的犬陽性血清識(shí)別,說明ENO2具有較好的反應(yīng)原性,可以作為血清學(xué)診斷抗原。隨后將獲得的重組ENO2作為抗原,免疫BALB/c小鼠獲取高免血清后制備特異性強(qiáng)的單克隆抗體,成功篩選出2株特異性單抗。利用獲得的單克隆抗體,應(yīng)用FITC標(biāo)記的二抗進(jìn)行間接免疫熒光(indirect immunofluorescence,IFA)實(shí)驗(yàn)對(duì)ENO2進(jìn)行組織定位。熒光顯微鏡觀察結(jié)果發(fā)現(xiàn),ENO2在速殖子階段的細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核都有分布,其中細(xì)胞核可見較強(qiáng)的熒光信號(hào)。通過CFDA-SE標(biāo)記弓形蟲速殖子,流式細(xì)胞儀分析ENO2單抗對(duì)速殖子入侵Vero細(xì)胞的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)ENO2單抗抑制了速殖子的入侵,ENO2與弓形蟲入侵Vero細(xì)胞相關(guān)。

    1.3 錐蟲與利氏曼原蟲烯醇化酶 在錐蟲和利氏曼原蟲體內(nèi)不同發(fā)育期蟲體內(nèi)烯醇化酶的表達(dá)水平可能不太相同。Paba等[14]通過指紋圖譜檢測(cè)分析發(fā)現(xiàn),克氏錐蟲體內(nèi)烯醇化酶在錐鞭毛體和無鞭毛體中的表達(dá)高于上鞭毛體。Rosenzweig等[15]發(fā)現(xiàn)墨西哥利士曼原蟲從前鞭毛體到無鞭毛體的分化過程中,糖酵解酶上調(diào)表達(dá)1.4倍,包括烯醇化酶在內(nèi)的胞漿糖酵解酶上調(diào)表達(dá)2倍。

    Avilán等[16]認(rèn)為,盡管布氏錐蟲、克氏錐蟲和利士曼原蟲的烯醇化酶高度保守,并在機(jī)體代謝過程中扮演重要角色,但錐蟲和宿主烯醇化酶之間仍存在差異,在錐蟲烯醇化酶接近活性中心的位置有3個(gè)獨(dú)特的活性殘基,可以作為抗錐蟲藥物研發(fā)的靶點(diǎn)。烯醇化酶存在于利士曼原蟲的表面分泌蛋白中,因此,可能是潛在的毒力因子作為纖溶酶原的受體參與蟲體入侵,它的定位和功能研究將為抗錐蟲藥物研發(fā)和疫苗研制提供新的切入點(diǎn)。

    目前發(fā)現(xiàn),烯醇化酶通過兩種途徑與血纖溶酶原結(jié)合:一種方式是烯醇化酶通過其氨基酸序列C端的兩個(gè)賴氨酸結(jié)合纖溶酶原;另一種方式使烯醇化酶以其肽鏈中部小段結(jié)構(gòu)域與纖溶酶原結(jié)合。Vanegas等[17]通過研究墨西哥利士曼原蟲烯醇化酶與纖溶酶原的相互作用,發(fā)現(xiàn)其序列中的一段肽段(AYDAERKMY)是這兩個(gè)蛋白結(jié)合的關(guān)鍵位點(diǎn)。Swenerton等[18]研究發(fā)現(xiàn),寡肽酶B(OPB)可以調(diào)節(jié)利士曼原蟲體內(nèi)烯醇化酶的表達(dá),當(dāng)寄生蟲體內(nèi)的OPB基因被敲除時(shí),烯醇化酶的表達(dá)明顯升高。另外,Albert等[19]發(fā)現(xiàn),在血液中的布氏錐蟲的烯醇化酶可以作為RNA干涉(RNAi)的作用靶標(biāo),由于RNAi干涉作用,在最初的24h,烯醇化酶的酶活力減少到16%,并且出現(xiàn)錐蟲發(fā)育延緩現(xiàn)象,2d后出現(xiàn)死亡。

    1.4 球蟲和隱孢子蟲烯醇化酶 劉立恒[20]發(fā)現(xiàn)柔嫩艾美耳球蟲烯醇化酶在未孢子化卵囊階段豐度小于孢子化卵囊階段,且在兩個(gè)時(shí)期均能恒定表達(dá)。他采用免疫蛋白組學(xué)方法,對(duì)雞柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊可溶性蛋白的免疫原性進(jìn)行了系統(tǒng)分析,發(fā)現(xiàn)烯醇化酶可被抗血清識(shí)別,具有免疫原性。

    楊曉嬌[21]成功獲得微小隱孢子蟲的烯醇化酶序列,運(yùn)用親和層析分離純化目的蛋白,以純化的重組蛋白免疫新西蘭白兔,制備抗重組蛋白的多克隆抗體,通過SDS-PAGE分析表明重組Enolase能被高效地表達(dá)。Western blot分析結(jié)果顯示純化的融合蛋白能被兔陽性血清和His-Tag mouse mAb識(shí)別,表明融合蛋白具有良好的反應(yīng)原性。ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示,經(jīng)重組蛋白3次免疫后,兔血清多克隆抗體的效價(jià)達(dá)1:51200,與兔肌烯醇酶沒有交叉反應(yīng)性,提示該多克隆抗體具有很好的特異性。

    1.5 泰勒蟲烯醇化酶 Cayir等[22]認(rèn)為烯醇化酶可作為治療泰勒蟲的大分子靶標(biāo),他將環(huán)形泰勒蟲烯醇化酶的內(nèi)含子序列去掉后進(jìn)行克隆表達(dá),獲得同源二聚體形式的烯醇化酶純化蛋白,并對(duì)其結(jié)構(gòu)和動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行分析,所獲得的烯醇化酶的動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)和結(jié)構(gòu)特征為今后研究設(shè)計(jì)針對(duì)抗泰勒蟲藥物奠定了基礎(chǔ)。

    2 線蟲烯醇化酶

    2.1 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲烯醇化酶 Han等[23]獲得捻轉(zhuǎn)血矛線蟲烯醇化酶(enolase)基因的1583bp全長序列,含有最大開放閱讀框(open reading frame,ORF),為1305 bp,5-非翻譯區(qū)(5'-UTR)長62 bp,3-非翻譯區(qū)(3'-UTR)長216 bp,SDS-PAGE結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)融合蛋白在上清和包涵體中均有表達(dá),分子量約49 kDa。以自然感染的山羊血清作為一抗,Western blot結(jié)果顯示在49 kDa處出現(xiàn)特異性條帶,與推測(cè)ORF的蛋白大小近似。酶活性測(cè)定結(jié)果表明該重組蛋白具有一定的烯醇化酶催化活性。

    Kalyanasundaram等[24]比較捻轉(zhuǎn)血矛線蟲體內(nèi)烯醇化酶重組蛋白(rHcENO)和ConA純化自身糖蛋白的免疫預(yù)防作用,發(fā)現(xiàn)二者均能刺激機(jī)體IgG水平升高,且ConA純化自身糖蛋白的免疫保護(hù)性比重組烯醇化酶(rHcENO)稍高。

    2.2 豬蛔蟲烯醇化酶 Chen等[25]獲得了豬蛔蟲烯醇化酶的全長序列,通過RNAi研究發(fā)現(xiàn),豬蛔蟲幼蟲烯醇化酶由于RNAi的作用被沉默,并出現(xiàn)幼蟲生長被抑制。通過構(gòu)建烯醇化酶pVAX-Enol真核表達(dá)質(zhì)粒,肌肉注射免疫昆明小鼠。研究結(jié)果顯示,pVAX-Enol cDNA疫苗免疫昆明小鼠可有效地誘導(dǎo)產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng),結(jié)果顯示疫苗具有一定的免疫保護(hù)作用,能夠有效地提高昆明小鼠抗豬蛔蟲感染能力[26]。

    2.3 廣州管圓線蟲和旋毛蟲烯醇化酶 Zhang等[27]通過對(duì)烯醇化酶定位研究,發(fā)現(xiàn)廣州管圓線蟲烯醇化酶大多存在于蟲體細(xì)胞質(zhì)中,如壁肌肉、生殖道、神經(jīng)環(huán)和消化道中等能量消耗比較大的部位,并不像預(yù)期的表皮和真皮層。這表明廣州管圓線蟲烯醇化酶可能參與其他的生物功能,而不是作為纖溶酶原的受體或者分泌性抗原組分。烯醇化酶也在細(xì)胞核中表達(dá),表明它可能參與機(jī)體生長和發(fā)育過程的調(diào)節(jié)。盡管廣州管圓線蟲曾寄生于宿主血管中,但由于烯醇化酶不存在于L3幼蟲和成蟲的表面,表明它可能有其他的入侵和免疫逃避機(jī)制。

    Bien等[28]篩選肌肉旋毛蟲和成蟲旋毛蟲體內(nèi)可能存在的免疫反應(yīng)性蛋白,通過液相質(zhì)譜鑒定得到的18個(gè)蛋白中,有3個(gè)蛋白在成蟲和幼蟲體內(nèi)較為常見:烯醇化酶、熱休克蛋白及5'端核苷酸酶,它們?cè)谛x感染時(shí)可能扮演重要角色,刺激機(jī)體產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答,因此對(duì)于旋毛蟲的早期診斷及疫苗研究有重要意義。

    3 吸蟲烯醇化酶

    Wang等[29]發(fā)現(xiàn)華枝睪吸蟲烯醇化酶(Csenolase)存在于華枝睪吸蟲的成蟲、后囊蚴、尾蚴和蟲卵四個(gè)生命階段中,在成蟲中高表達(dá)。免疫組化顯示,它存在于成蟲的皮膚和后囊蚴的囊壁上,當(dāng)抗華枝睪烯醇化酶血清抑制酶活性時(shí),華枝睪烯醇化酶表現(xiàn)出活躍的酶活性催化反應(yīng)。體外培養(yǎng)試驗(yàn)顯示,Csenolase可能在寄生蟲的生長中起著關(guān)鍵作用,作為一種潛在的候選疫苗和藥物靶標(biāo)。Wang等[30]進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),通過RNA干涉使華枝睪吸蟲烯醇化酶沉默表達(dá),沉默效果對(duì)華枝睪吸蟲成蟲產(chǎn)生致死作用。Wang等[31]利用大腸桿菌和枯草芽孢桿菌構(gòu)建華枝睪吸蟲烯醇化酶(Csenolase)的基因工程疫苗,發(fā)現(xiàn)二者均能誘導(dǎo)機(jī)體體液免疫,有一定程度的減蟲率和減卵率,烯醇化酶可作為候選口服疫苗而進(jìn)一步研究。

    Manneck等[32]為尋找甲氟喹在血吸蟲體內(nèi)的結(jié)合蛋白,研究其藥物靶標(biāo),分析甲氟喹通過抑制烯醇化酶而干擾糖酵解的過程,對(duì)血吸蟲童蟲在葡萄糖存在或不存在情況下,研究甲氟喹和3種已知糖酵解抑制劑(即氟化鈉、3-溴丙酮酸和甲萘醌)的代謝抑制作用。發(fā)現(xiàn)由于葡萄糖的存在,血吸蟲童蟲受甲氟喹、氟化鈉和3-溴丙酮酸影響較小,當(dāng)童蟲接觸到甲萘醌時(shí)葡萄糖失去保護(hù)作用。這些結(jié)果表明甲氟喹可以作為潛在的糖酵解抑制劑,烯醇化酶可能作為潛在的抗吸蟲藥物靶標(biāo)。

    邱春輝等[33]對(duì)日本血吸蟲的烯醇化酶做了相關(guān)研究,指出該酶能在蟲體的表膜進(jìn)行表達(dá),他們對(duì)血吸蟲烯醇化酶進(jìn)行表達(dá),并將重組蛋白免疫小鼠,獲得24.28%的肝組織減卵率和21.45%的糞便減卵率,具有部分免疫保護(hù)效果。

    4 絳蟲烯醇化酶

    Gan等[34]獲得細(xì)粒棘球絳蟲1449 bp的全長序列,包含分別位于78 bp和69 bp的兩個(gè)內(nèi)含子序列,該基因編碼433個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)其氨基酸序列中含有一段跨膜區(qū)(aa104~aa124)。

    對(duì)絳蟲烯醇化酶的免疫學(xué)特性分析發(fā)現(xiàn)該酶含有大量線性B細(xì)胞表位和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)表位。在這些表位中有2個(gè)重要肽段,即aa49和aa228~aa236。這兩個(gè)肽段均同時(shí)含有B細(xì)胞和CTL表位,分別位于跨膜區(qū)的兩側(cè),能刺激體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答。無論這種蛋白質(zhì)的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)如何變化,它均可介導(dǎo)絳蟲對(duì)宿主的免疫刺激作用。說明烯醇化酶具有較好的免疫診斷和疫苗應(yīng)用前景。

    趙國雄等[35]利用在線分析工具設(shè)計(jì)引物并擴(kuò)增得到細(xì)粒棘球蚴序列,通過Swiss-Model建模分析烯醇化酶的3D結(jié)構(gòu),推測(cè)其可能是一個(gè)位于蟲體表層表膜具有較好免疫診斷和疫苗應(yīng)用前景的膜蛋白,同時(shí)還能進(jìn)入細(xì)胞核調(diào)節(jié)基因表達(dá)。王瑩等[36]從細(xì)粒棘球絳蟲cDNA中擴(kuò)增目的基因并進(jìn)行表達(dá),利用細(xì)粒棘球蚴病及其他幾種寄生蟲病患者的血清和健康人血清,通過ELISA法評(píng)價(jià)重組EgEno抗原的免疫診斷效果。重組EgEno可被細(xì)粒棘球蚴病患者血清識(shí)別,表明重組EgEno對(duì)細(xì)粒棘球蚴病有較好的免疫診斷價(jià)值。

    王利曉等[37]采用Real time PCR技術(shù),對(duì)擴(kuò)展莫尼茨絳蟲在蟲體的不同發(fā)育階段烯醇化酶基因表達(dá)的差異進(jìn)行了檢測(cè),發(fā)現(xiàn)基因的表達(dá)量與蟲體生命活動(dòng)的旺盛程度明顯呈正相關(guān),該酶在頭節(jié)、孕節(jié)、幼節(jié)和成節(jié)不同發(fā)育階段上表達(dá)水平有顯著差異,并推測(cè)該烯醇化酶基因在蟲體寄生過程中對(duì)細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的代謝與能量的產(chǎn)生起關(guān)鍵作用。夏黨榮等[38]對(duì)擴(kuò)展莫尼茨絳蟲烯醇化酶進(jìn)行原核表達(dá)分析,Westernblot結(jié)果表明,天然蛋白能夠被重組表達(dá)產(chǎn)物免疫小鼠的血清識(shí)別,出現(xiàn)兩條免疫印記條帶,天然蛋白能夠被重組表達(dá)產(chǎn)物免疫小鼠的血清識(shí)別,出現(xiàn)兩條免疫印記條帶,即天然蛋白以兩種形式(約47 kDa和40 kDa)存在,并具有抗原性,為該蛋白功能研究奠定了基礎(chǔ)。

    黃艷等[39]應(yīng)用生物信息方法從亞洲帶絳蟲成蟲cDNA文庫中篩選出了亞洲帶絳蟲烯醇酶cDNA全長序列,并預(yù)測(cè)得到其結(jié)構(gòu)與功能方面信息。杜武英等[40]對(duì)亞洲牛帶絳蟲成蟲烯醇化酶基因進(jìn)行原核表達(dá),發(fā)現(xiàn)重組蛋白具有較強(qiáng)的免疫原性,并定位在蟲卵的卵殼和胚膜上。戴佳琳等[41]和劉玉江等[42]分別對(duì)牛帶絳蟲和豬帶絳蟲烯醇化酶基因結(jié)構(gòu)和編碼區(qū)序列進(jìn)行分析,對(duì)其蛋白特性、二級(jí)結(jié)構(gòu)、三維空間構(gòu)像等進(jìn)行生物信息學(xué)分析。尤亞南等[43]獲得豬帶絳蟲的烯醇化酶全長序列,并進(jìn)行原核表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物可被豬囊尾蚴病陽性血清識(shí)別,并發(fā)現(xiàn)該重組蛋白具有纖溶酶原結(jié)合特性及酶活力,推測(cè)豬帶絳蟲烯醇化酶可能在寄生蟲入侵宿主過程中發(fā)揮作用,有作為藥物靶標(biāo)或疫苗候選分子的潛力。

    綜上所述,烯醇化酶是大多數(shù)體內(nèi)寄生蟲糖酵解中的關(guān)鍵酶之一,與寄生蟲的生存密切相關(guān)。烯醇化酶作為纖維蛋白溶酶原受體蛋白,被認(rèn)為是寄生蟲重要的致病因子之一,同時(shí)它具有較好的免疫原性,并可能作為候選疫苗或治療藥物靶標(biāo)。對(duì)該酶的深入研究,將有助于人們進(jìn)一步認(rèn)識(shí)其在寄生蟲的感染與免疫調(diào)節(jié)、能量代謝中的作用,為發(fā)展?jié)撛诘囊呙绾蜻x分子和有效的治療診斷方法奠定基礎(chǔ)。

    [1]Rodriguez E, Romarís F, Lorenzo S, et al. A recombinant enolase from Anisakis simplex is differentially recognized in natural human and mouse experimenta linfections[J]. Med Microbiol Immunol, 2006, 195(1): 1-10.

    [2]Peshavaria M, Day I N. Molecular structure of the human muscle-specific enolase gene (ENO3) [J]. Biochem J, 1991,275 (Pt 2): 427-433.

    [3]Segil N, Shrutkowski A, Dworkin M B, et al. Enolase isoenzymes in adult and developing Xenopus laevis and characterization of a cloned enolase sequence[J]. Biochem J, 1988, 251(1): 31-39.

    [4]Lu Q, Lu H, Qi J, et al. An octamer of enolase from Streptococcus suis[J]. Protein Cell, 2012, 3(10): 769-780.

    [5]Agarwal S, Kulshreshtha P, Bambah Mukku D, et al. alpha-Enolase binds to human plasminogen on the surface of Bacillus anthracis[J]. Biochim Biophys Acta,2008, 1784(7-8): 986-994.

    [6]Andrade M A, Siles-Lucas M, López-Abán J, et al. Antigens from Ascaris suum trigger in vitro macrophage NO production[J]. Parasite Immunol, 2005, 27(6): 235-242.

    [7]Bhowmick I P, Kumar N, Sharma S, et al. Plasmodium falciparum enolase: stage-specific expression and sub-cellular localization[J]. Malar J, 2009, 8:179.

    [8]Ghosh A K, Marcelo J L. Surface-expressed enolases of Plasmodium and other pathogens[J]. Mem Inst Oswaldo Cruz, 2011, 106 Suppl 1: 85-90.

    [9]Das S, Shevade S, LaCount D J, et al. Plasmodium falciparum enolase complements yeast enolase functions and associates with the parasite food vacuole[J]. Mol Biochem Parasitol, 2011,179(1): 8-17.

    [10]Pal-Bhowmick I, Mehta M, Coppens I, et al. Protective properties and surface localization of Plasmodium falciparum enolase[J]. Infect Immun, 2007,75(11): 5500-5508.

    [11]Ruan J, Mouveaux T, Light S H, et al. The structure of bradyzoite-specific enolase from Toxoplasma gondii reveals insights into its dual cytoplasmic and nuclear functions[J]. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 2015,71(Pt 3): 417-426.

    [12]Holmes M, Liwak U, Pricop I, et al. Silencing of tachyzoite enolase 2 alters nuclear targeting of bradyzoite enolase 1 in Toxoplasma gondii[J]. Microbes Infect, 2010, 12(1): 19-27.

    [13]張花景.弓形蟲ENO2基因的克隆表達(dá)、單克隆抗體制備及功能分析[D]. 北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院, 2014.

    [14]Paba J, Santana J M, Teixeira A R, et al. Proteomic analysis of the human pathogen Trypanosoma cruzi[J]. Proteomics,2004, 4(4): 1052-1059.

    [15]Rosenzweig D, Smith D, Opperdoes F, et al. Retooling Leishmania metabolism: from sand fly gut to human macrophage[J]. FASEB J, 2008, 22(2): 590-602.

    [16]Avilán L, Gualdrón-López M, Qui?ones W, et al. Enolase: a key player in the metabolism and a probable virulencefactor of trypanosomatid parasites-perspectives for its use as a therapeutic target[J]. Enzyme Res, 2011, 2011: 932549.

    [17]Vanegas G, Qui~nones W, Carrasco-L′opez C, et al,Enolase as a plasminogen binding protein in Leishmania mexicana[J]. Parasitol Res, 2007, 101(6): 1511-1516.

    [18]Swenerton R K, Zhang S, Sajid M, et al. The Oligopeptidase B of Leishmania Regulates Parasite Enolase and Immune Evasion[J]. J Biol Chem, 2011, 286(1): 429-440.

    [19]Albert M A, Haanstra J R, Hannaert V, et al. Experimental and in silico analyses of glycolytic flux control in bloodstream form Trypanosoma brucei [J]. J Biol Chem,2005, 280(31): 28306-28315.

    [20]劉立恒.柔嫩艾美耳球蟲比較蛋白組及免疫蛋白組研究[D].南京: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué), 2011.

    [21]楊曉嬌.微小隱孢子蟲烯醇酶特性的初步研究及類鈣調(diào)蛋白基因的真核和原核表達(dá)[D]. 北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2014.

    [22]Cayir E, Erdemir A, Ozkan E, et al. Cloning of intronremoved enolase gene and expression, purification, kinetic characterization of the enzyme from Theileria annulata[J]. Mol Biotechnol, 2014, 56(8): 689-696.

    [23]Han K, Xu L, Yan R, et al. Molecular cloning, expression and characterization of enolase from adult Haemonchus contortus[J]. Res Vet Sci, 2012,92(2): 259-265.

    [24]Kalyanasundaram A, Jawahar S, Ilangopathy M, et al. Comparative immunoprophylactic efficacy of Haemonchus contortus recombinant enolase (rHcENO) and Con A purified native glycoproteins in sheep [J]. Exp Parasitol,2015, 23(154): 98-107.

    [25]Chen N, Xu M J, Nisbet A J, et al. Ascaris suum: RNAi mediated silencing of enolase gene expression in infective larvae[J]. Exp Parasitol, 2011,127(1): 142-146.

    [26]Chen N, Yuan Z G, Xu M J, et al. Ascaris suum Enolase is a potential vaccine candidate against Ascarisis in mice[J]. Vaccine, 2012, 30(23): 3478-3482.

    [27]Zhang J, Yu C, Wang Y, et al. Enolase of Angiostrongylus cantonensis: more likely a structural component? [J]. Parasitol Res, 2014,113(11): 3927-3934.

    [28]Bien J, Cabaj W, Moskwa B, et al. Proteomic analysis of potential immunoreactive proteins from muscle larvae and adult worms of Trichinella spiralis in experimentally infected pigs[J]. Folia Parasitol (Praha), 2015,1: 62.

    [29]Wang X, Chen W, Hu F, et al. Clonorchis sinensis enolase: identification and biochemical characterization of a glycolytic enzyme from excretory/secretory products[J]. Mol Biochem Parasitol, 2011, 177(2): 135-142.

    [30]Wang X, Chen W, Tian Y, et al. RNAi-mediated silencing of enolase confirms its biological importance in Clonorchis sinensis[J]. Parasitol Res, 2014, 113(4): 1451-1458.

    [31]Wang X, Chen W, Tian Y, et al. Surface display of Clonorchis sinensis enolase on Bacillus subtilis spores potentializes an oral vaccine candidate[J]. Vaccine, 2014,32(12):1338-1345.

    [32]Manneck T, Keiser J, Müller J. Mefloquine interferes with glycolysis in schistosomula of Schistosoma mansoni via inhibition of enolase [J]. Parasitology, 2012,139(4): 497-505.

    [33]邱春輝.日本血吸蟲重組烯醇化酶研究[D].福州:福建農(nóng)林大學(xué), 2009.

    [34]Gan W, Zhao G, Xu H, et al. Reverse vaccinology approach identify an Echinococcus granulosus tegumental membrane protein enolase as vaccine candidate[J]. Parasitol Res, 2010,106(4): 873-882.

    [35]趙國雄,甘文佳,武偉華,等.細(xì)粒棘球絳蟲烯醇酶(EgEnolase)基因的克隆和序列分析[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志,2009, 9(11): 1221-1226.

    [36]王瑩,張璟,袁忠英,等.細(xì)粒棘球絳蟲烯醇酶基因克隆表達(dá)及免疫診斷研究[J].中國血吸蟲病防治雜志,2012,24(5): 549-554.

    [37]王利曉,薄新文,張銀亮,等.擴(kuò)展莫尼茨絳蟲烯醇化酶基因的克隆及其組織表達(dá)差異分析[J].中國獸醫(yī)科學(xué),2010, 40(6): 572-578.

    [38]夏黨榮,陳南穎,馬勛,等.擴(kuò)展莫尼茨絳蟲烯醇化酶基因的原核表達(dá)及抗原性鑒定[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2012, 34(3): 241-143.

    [39]黃艷,黃江,胡旭初,等.亞洲帶絳蟲烯醇酶基因及其蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能[J].中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版), 2008,29(5): 575-580.

    [40]杜武英,戴佳琳,黃江,等.亞洲帶絳蟲烯醇化酶基因的原核表達(dá)、鑒定與組織定位[J].中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志, 2009, 27(6): 458-462.

    [41]戴佳琳,黃江,廖興江.生物信息學(xué)分析牛帶絳蟲烯醇酶基因及其蛋白的結(jié)構(gòu)和特性[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志, 2010,10(10):1169-1172.

    [42]劉玉江,王宇,黃江.豬帶絳蟲成蟲烯醇酶基因的生物信息學(xué)分析[J].貴州醫(yī)藥, 2011, 35(5): 387-391.

    [43]尤亞南,李繼東,駱學(xué)農(nóng),等.豬帶絳蟲烯醇化酶基因的原核表達(dá)及鑒定[J].中國獸醫(yī)科學(xué), 2014, 44(3): 221-226.

    RESEARCH PROGRESS ON ENOLASE OF PARASITES

    CHEN Ning1, CHENG Tian2, WANG Ping1, LI Jun-peng1, ZHANG Yan-zhong,LU Yi1, WANG Xiao-wei1
    (1. Shenzhen Institute for Drug Control, Shenzhen 518057, China; 2. College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University,Guangzhou 510642, China; 3. Shenzhen Ruipeng Pet Hospital,Shenzhen 518000, China)

    Enolase, an important glycolytic enzyme that catalyses the conversion of phosphoglycerate to phosphoenolpyruvate, was identified as a multifunctional protein on the surface of most eukaryotic and prokaryotic cells. Recent studies have revealed that this enzyme could activate the plasminogen,involving in the processes of parasite infection. It is also considered to be a major immunostimulatory protein and drug target. This paper reviews the current research results in parasite enolase, and explores its potential for diagnosis, vaccine candidate and drug targets of parasitic diseases.

    Parasite; enolase; glycolytic

    S 852.7

    A

    1674-6422(2015)04-0081-06

    2015-05-07

    深圳市科技研發(fā)資金知識(shí)創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目(JCYJ20130402144215888)

    陳寧,女,博士,主要從事動(dòng)物寄生蟲病的防控

    陳寧,E-mail:cn82cn@163.com

    猜你喜歡
    化酶烯醇基因
    Frog whisperer
    高效液相色譜法測(cè)定小麥中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇
    烯醇化酶在微生物中的研究進(jìn)展
    修改基因吉兇未卜
    奧秘(2019年8期)2019-08-28 01:47:05
    兩種氯前列烯醇誘導(dǎo)母豬同期分娩的研究
    創(chuàng)新基因讓招行贏在未來
    商周刊(2017年7期)2017-08-22 03:36:21
    基因
    脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的制備與鑒定
    胡黃連苷Ⅱ?qū)δX缺血損傷后神經(jīng)元特異性烯醇化酶表達(dá)的影響
    β-烯醇化酶及其mRNA在COPD下肢骨骼肌表達(dá)水平的研究
    很黄的视频免费| 一级毛片女人18水好多| 禁无遮挡网站| 99精品久久久久人妻精品| 性欧美人与动物交配| 99久国产av精品| 国产成人欧美在线观看| 日韩欧美在线二视频| 精品久久久久久久久久久久久| 精品午夜福利视频在线观看一区| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久伊人香网站| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲最大成人中文| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 久久久精品大字幕| 国产人伦9x9x在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区| www.熟女人妻精品国产| 精品久久久久久久久久免费视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产精品av久久久久免费| 精品免费久久久久久久清纯| 99riav亚洲国产免费| 99久久国产精品久久久| 亚洲欧美精品综合久久99| 午夜精品一区二区三区免费看| 免费看光身美女| 1000部很黄的大片| 99re在线观看精品视频| 波多野结衣高清作品| 久久久精品欧美日韩精品| 久久久久久国产a免费观看| 久久精品91无色码中文字幕| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| av黄色大香蕉| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲国产精品合色在线| 日本熟妇午夜| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 在线国产一区二区在线| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产人伦9x9x在线观看| 久久热在线av| 欧美极品一区二区三区四区| 精品一区二区三区av网在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产熟女xx| 在线观看舔阴道视频| 国产1区2区3区精品| 天堂动漫精品| 亚洲国产看品久久| 婷婷六月久久综合丁香| 一区福利在线观看| 无遮挡黄片免费观看| 天堂影院成人在线观看| 欧美中文综合在线视频| 欧美日韩一级在线毛片| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 国模一区二区三区四区视频 | 国产亚洲精品一区二区www| 又紧又爽又黄一区二区| 欧美不卡视频在线免费观看| 欧美日本视频| 国产97色在线日韩免费| 久久久久久久精品吃奶| 久久午夜综合久久蜜桃| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 精品久久久久久成人av| 黄片大片在线免费观看| 18美女黄网站色大片免费观看| 免费高清视频大片| 99热这里只有是精品50| 久久久久久大精品| 性色av乱码一区二区三区2| a级毛片在线看网站| 在线观看日韩欧美| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产成+人综合+亚洲专区| 不卡av一区二区三区| 久久久久久人人人人人| 国产精品,欧美在线| 搡老妇女老女人老熟妇| 亚洲人与动物交配视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 成人国产一区最新在线观看| 黄色女人牲交| 色吧在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲精品粉嫩美女一区| a级毛片a级免费在线| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲五月婷婷丁香| 高清在线国产一区| 日本熟妇午夜| av中文乱码字幕在线| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲色图av天堂| 精品一区二区三区av网在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 在线a可以看的网站| 日本黄大片高清| 欧美乱码精品一区二区三区| 欧美中文综合在线视频| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 91久久精品国产一区二区成人 | 国产综合懂色| 色视频www国产| e午夜精品久久久久久久| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲avbb在线观看| 在线观看午夜福利视频| 亚洲av美国av| 2021天堂中文幕一二区在线观| 嫩草影视91久久| 国产精品久久久av美女十八| 免费av毛片视频| 99re在线观看精品视频| 男女下面进入的视频免费午夜| 丁香欧美五月| 男人舔奶头视频| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产私拍福利视频在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲国产色片| 高清在线国产一区| 99国产精品99久久久久| 国产亚洲av高清不卡| 国内揄拍国产精品人妻在线| 精品免费久久久久久久清纯| 在线观看免费午夜福利视频| 99热精品在线国产| 免费av不卡在线播放| 18禁观看日本| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产男靠女视频免费网站| 男人舔奶头视频| 免费看a级黄色片| 国产三级在线视频| 啦啦啦免费观看视频1| 九九热线精品视视频播放| 国产精品久久视频播放| 黄片大片在线免费观看| 亚洲av免费在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 男女视频在线观看网站免费| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产免费男女视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 免费观看的影片在线观看| 观看免费一级毛片| 国产精品99久久99久久久不卡| 色综合亚洲欧美另类图片| 免费看十八禁软件| 中文在线观看免费www的网站| 成年版毛片免费区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 久久香蕉国产精品| 俺也久久电影网| 18禁国产床啪视频网站| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 熟女人妻精品中文字幕| 久久久久精品国产欧美久久久| 757午夜福利合集在线观看| 国产高潮美女av| 久久中文看片网| 麻豆av在线久日| 成熟少妇高潮喷水视频| 一区二区三区国产精品乱码| 超碰成人久久| 97碰自拍视频| 久久这里只有精品中国| 91av网站免费观看| 99热6这里只有精品| 国产激情偷乱视频一区二区| 熟女电影av网| 午夜免费观看网址| 性色avwww在线观看| 日本黄色片子视频| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产高清视频在线播放一区| 欧美黄色片欧美黄色片| 久久久久国内视频| 中文在线观看免费www的网站| 国产毛片a区久久久久| 成人av一区二区三区在线看| 国产精品一及| 亚洲欧美日韩卡通动漫| e午夜精品久久久久久久| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产熟女xx| 亚洲乱码一区二区免费版| 床上黄色一级片| 成年人黄色毛片网站| 欧美中文综合在线视频| 搞女人的毛片| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 久久中文字幕一级| 黄频高清免费视频| 很黄的视频免费| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产精品一及| 国产高清激情床上av| 我要搜黄色片| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 免费在线观看日本一区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 成年人黄色毛片网站| 亚洲在线自拍视频| 在线a可以看的网站| av欧美777| 黄频高清免费视频| 欧美丝袜亚洲另类 | 免费在线观看影片大全网站| 亚洲最大成人中文| 精华霜和精华液先用哪个| а√天堂www在线а√下载| 国产激情久久老熟女| 国产精品99久久99久久久不卡| 午夜福利18| 亚洲精品色激情综合| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 丰满的人妻完整版| 一边摸一边抽搐一进一小说| 欧美3d第一页| 99久久成人亚洲精品观看| 无人区码免费观看不卡| 国产精品一区二区免费欧美| 国产午夜福利久久久久久| 精品国产美女av久久久久小说| 欧美黑人巨大hd| 俺也久久电影网| 黄色丝袜av网址大全| 在线a可以看的网站| 少妇人妻一区二区三区视频| 香蕉丝袜av| 亚洲精品456在线播放app | 精品国产乱子伦一区二区三区| 国内精品一区二区在线观看| 午夜a级毛片| 免费人成视频x8x8入口观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 欧美日韩精品网址| 婷婷六月久久综合丁香| 国产精品 国内视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 久久国产精品影院| 国产一区二区在线观看日韩 | 精华霜和精华液先用哪个| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产亚洲av嫩草精品影院| 欧美最黄视频在线播放免费| 日本免费一区二区三区高清不卡| 久久久久久大精品| 国产视频内射| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 久久久国产欧美日韩av| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 老熟妇仑乱视频hdxx| 久久中文看片网| 国产成人影院久久av| 怎么达到女性高潮| 一区二区三区激情视频| 一个人看视频在线观看www免费 | 中文字幕人成人乱码亚洲影| 国产精品免费一区二区三区在线| 露出奶头的视频| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 午夜福利免费观看在线| 久久精品91无色码中文字幕| 欧美中文日本在线观看视频| 99热精品在线国产| 久久国产精品影院| 国产99白浆流出| 亚洲 国产 在线| 国产精品久久久久久精品电影| 噜噜噜噜噜久久久久久91| www.www免费av| 中国美女看黄片| 无人区码免费观看不卡| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产毛片a区久久久久| 免费看光身美女| 国产亚洲精品av在线| 桃红色精品国产亚洲av| 婷婷丁香在线五月| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产精品国产高清国产av| 成人三级黄色视频| 91av网站免费观看| 女人被狂操c到高潮| 人人妻人人看人人澡| 又紧又爽又黄一区二区| 真实男女啪啪啪动态图| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 99re在线观看精品视频| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 一本综合久久免费| 亚洲精品在线美女| 国产精品久久久av美女十八| 九色成人免费人妻av| а√天堂www在线а√下载| 熟女人妻精品中文字幕| 级片在线观看| 亚洲最大成人中文| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产91精品成人一区二区三区| 91av网站免费观看| 在线观看免费午夜福利视频| 伦理电影免费视频| 国产精品99久久久久久久久| 国产一级毛片七仙女欲春2| 一区福利在线观看| or卡值多少钱| 欧美色视频一区免费| 日韩欧美在线二视频| 一本综合久久免费| 精品电影一区二区在线| 草草在线视频免费看| 黄频高清免费视频| 在线免费观看不下载黄p国产 | www.精华液| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲成人久久性| 色综合亚洲欧美另类图片| а√天堂www在线а√下载| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产高清三级在线| 不卡av一区二区三区| 老熟妇仑乱视频hdxx| 在线免费观看的www视频| 嫩草影院入口| 欧美3d第一页| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产免费av片在线观看野外av| 国产精品女同一区二区软件 | 91久久精品国产一区二区成人 | 欧美性猛交黑人性爽| 最近在线观看免费完整版| 亚洲在线观看片| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲国产看品久久| 一本一本综合久久| 欧美日本视频| 亚洲激情在线av| 国产亚洲精品久久久com| 99精品在免费线老司机午夜| 好男人电影高清在线观看| 免费看美女性在线毛片视频| 高清在线国产一区| 999久久久国产精品视频| а√天堂www在线а√下载| 一级毛片女人18水好多| 少妇人妻一区二区三区视频| 午夜精品在线福利| 韩国av一区二区三区四区| 香蕉av资源在线| 午夜激情欧美在线| 色老头精品视频在线观看| 88av欧美| 女人被狂操c到高潮| 一区二区三区激情视频| 一夜夜www| 国产精品一区二区免费欧美| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 一本久久中文字幕| 搡老熟女国产l中国老女人| 一个人看的www免费观看视频| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 九九在线视频观看精品| 国产成年人精品一区二区| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 成年女人永久免费观看视频| 两性夫妻黄色片| 免费观看精品视频网站| 国产男靠女视频免费网站| 偷拍熟女少妇极品色| 最新在线观看一区二区三区| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 99国产精品99久久久久| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 又爽又黄无遮挡网站| 国产精品国产高清国产av| 午夜免费观看网址| 久久精品91无色码中文字幕| 国产成年人精品一区二区| 嫩草影院入口| 欧美大码av| 国产成人av教育| 国产av麻豆久久久久久久| 久久欧美精品欧美久久欧美| 老汉色av国产亚洲站长工具| 少妇人妻一区二区三区视频| 岛国在线免费视频观看| 免费在线观看日本一区| 国产高清视频在线播放一区| 51午夜福利影视在线观看| 精品欧美国产一区二区三| 日韩高清综合在线| 黄频高清免费视频| 亚洲在线自拍视频| 99久久精品热视频| 亚洲精品456在线播放app | 亚洲精品一区av在线观看| 国产欧美日韩一区二区精品| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产黄色小视频在线观看| 麻豆一二三区av精品| 18禁国产床啪视频网站| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 日韩欧美国产一区二区入口| 日韩高清综合在线| 成人国产综合亚洲| 香蕉丝袜av| 成人欧美大片| 1024香蕉在线观看| 女人被狂操c到高潮| 男人舔奶头视频| 亚洲欧美日韩高清专用| 一个人看视频在线观看www免费 | 亚洲av电影在线进入| 91老司机精品| 香蕉av资源在线| 亚洲男人的天堂狠狠| 在线视频色国产色| 亚洲人与动物交配视频| 欧美三级亚洲精品| 久久中文字幕人妻熟女| 观看免费一级毛片| 美女免费视频网站| av片东京热男人的天堂| 国产爱豆传媒在线观看| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲电影在线观看av| 亚洲五月天丁香| 级片在线观看| 久久国产乱子伦精品免费另类| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产午夜福利久久久久久| 久久精品91无色码中文字幕| 婷婷亚洲欧美| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产精品99久久久久久久久| 久久性视频一级片| 韩国av一区二区三区四区| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲成av人片免费观看| 国产午夜福利久久久久久| 桃红色精品国产亚洲av| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 亚洲黑人精品在线| netflix在线观看网站| 亚洲国产欧美人成| 精品国内亚洲2022精品成人| 精品乱码久久久久久99久播| 免费看日本二区| 午夜视频精品福利| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 九九热线精品视视频播放| 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲激情在线av| 99久久综合精品五月天人人| 国产男靠女视频免费网站| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 99视频精品全部免费 在线 | 亚洲一区二区三区不卡视频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 男女床上黄色一级片免费看| 黄色丝袜av网址大全| 男女午夜视频在线观看| av视频在线观看入口| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产主播在线观看一区二区| 91麻豆av在线| 搡老岳熟女国产| 国产成人aa在线观看| 身体一侧抽搐| 嫁个100分男人电影在线观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲中文日韩欧美视频| 久久精品影院6| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产不卡一卡二| 欧美另类亚洲清纯唯美| 99国产极品粉嫩在线观看| 日本免费a在线| 中文在线观看免费www的网站| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产精品乱码一区二三区的特点| 99国产极品粉嫩在线观看| 一夜夜www| 真实男女啪啪啪动态图| 精品人妻1区二区| 久久久久国内视频| 欧美高清成人免费视频www| 在线观看一区二区三区| 国产真实乱freesex| 亚洲色图av天堂| 欧美一区二区国产精品久久精品| 成人三级做爰电影| 小说图片视频综合网站| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 久久久国产成人免费| 国产午夜精品论理片| 色综合亚洲欧美另类图片| 女警被强在线播放| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产一区二区在线av高清观看| 看免费av毛片| 99在线人妻在线中文字幕| 久久久精品大字幕| 88av欧美| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 欧美黑人欧美精品刺激| 天堂影院成人在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆 | 天天一区二区日本电影三级| 听说在线观看完整版免费高清| 成人欧美大片| 亚洲国产欧美人成| 中文字幕高清在线视频| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产亚洲精品一区二区www| 免费看美女性在线毛片视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产高清有码在线观看视频| 国内精品美女久久久久久| 亚洲成a人片在线一区二区| 久久久成人免费电影| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 99国产精品一区二区蜜桃av| av在线蜜桃| 99久国产av精品| 99热只有精品国产| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 日韩欧美在线二视频| 国产亚洲欧美在线一区二区| 白带黄色成豆腐渣| 亚洲人与动物交配视频| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 亚洲av片天天在线观看| 男女视频在线观看网站免费| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲avbb在线观看| 国产成人福利小说| 欧美日韩精品网址| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 午夜a级毛片| 真人做人爱边吃奶动态| 精品久久久久久久末码| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 淫秽高清视频在线观看| 国产亚洲av高清不卡| 最新在线观看一区二区三区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 神马国产精品三级电影在线观看| svipshipincom国产片| 久久久久久国产a免费观看| h日本视频在线播放| 99热6这里只有精品| 久久精品国产清高在天天线| 久久久久免费精品人妻一区二区| 桃红色精品国产亚洲av| 搡老岳熟女国产| 窝窝影院91人妻| 最近最新免费中文字幕在线| 人妻夜夜爽99麻豆av| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 国产亚洲精品综合一区在线观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 人人妻人人澡欧美一区二区| 久久国产精品人妻蜜桃| 欧美日韩乱码在线| 一区二区三区高清视频在线| 亚洲avbb在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 日本黄色视频三级网站网址| 91麻豆av在线| 欧美一区二区国产精品久久精品| 小说图片视频综合网站| 国产精品亚洲av一区麻豆| 老汉色av国产亚洲站长工具| h日本视频在线播放| 99久久精品国产亚洲精品| 在线免费观看的www视频| 国产精品乱码一区二三区的特点| 欧美日韩福利视频一区二区| 他把我摸到了高潮在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 精品欧美国产一区二区三| avwww免费| 欧美乱码精品一区二区三区|