毛和平 鄒干朋 劉光斌
甘肅省嘉峪關(guān)市酒鋼醫(yī)院藥學(xué)部,甘肅 嘉峪關(guān) 735100
疏肝和胃顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
毛和平 鄒干朋 劉光斌*
甘肅省嘉峪關(guān)市酒鋼醫(yī)院藥學(xué)部,甘肅 嘉峪關(guān) 735100
目的:建立疏肝和胃顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法:采用薄層色譜對元胡、大黃、香附進(jìn)行定性鑒別;采用高效液相色譜測定制劑中高良姜素的含量,色譜柱為inertsil C18(150mm×4.6mm,5μm);流動相為甲醇-0.2%磷酸溶液(60∶40);檢測波長為266nm;柱溫31℃,理論塔板數(shù)按高良姜素計算應(yīng)不低于6000。結(jié)果:薄層色譜斑點清晰,分離度良好,陰性無干擾,專屬性強,重復(fù)性良好;高良姜素在0.081~1.62μg/ml(r=0.9999)區(qū)間內(nèi)線性關(guān)系良好,平均回收率為97.93%,RSD為1.18%。結(jié)論:本方法方便、可靠、準(zhǔn)確,可用于疏肝和胃顆粒的質(zhì)量控制。
疏肝和胃顆粒;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);高良姜素;薄層色譜;高效液相色譜
疏肝和胃顆粒是酒鋼醫(yī)院的醫(yī)院制劑,由高良姜、香附、白芍等7味藥物組成,具有疏肝理氣、溫中和胃、控酸止痛之功效,臨床常用于治療肝胃失和所致的胃脘痛。研究采用薄層色譜法對元胡、大黃、香附進(jìn)行鑒別,采用高效液相法(HPLC)測定高良姜素的含量,為全面有效控制疏肝和胃顆粒的質(zhì)量提供實驗依據(jù)。
1.1 儀器 島津LC-15C高效液相色譜儀(SPD-15C紫外檢測器,LC solution15C色譜工作站);分析天平(Sartorious)。
1.2 材料 高良姜素對照品(批號:111699-200501)、延胡索乙素對照品(批號:0726-200107)、大黃酸對照品(批號:110757-200206)、香附對照藥材(批號121059-200706)均購于中國食品藥品檢定研究院;硅膠GF254薄層板、硅膠G薄層板、硅膠H薄層板均購于青島海洋化工有限公司;自制疏肝和胃顆粒(批號:20120201、20120202、20120203、20120204、20120205、20120206)和陰性樣品(酒鋼醫(yī)院制);甲醇、磷酸為色譜純,其余試劑均為分析純。
2.1 TLC鑒別
2.1.1 元胡TLC鑒別[1]22取疏肝和胃顆粒30g,加甲醇50ml,超聲處理30min,0.45μm濾膜濾過,蒸干濾液;殘渣加水10ml溶解,加濃氨試液調(diào)至堿性;用乙醚振搖提取3次,每次10ml,合并乙醚液,蒸干,殘渣加甲醇1ml使溶解,做為供試品。取陰性供試品(缺元胡)30g,同法制備陰性溶液。取延胡索乙素對照品5.1mg置于10ml容量瓶中,用甲醇定容,做為對照品溶液。按照薄層色譜法,取硅膠G薄層板用3%NaOH溶液浸泡3秒,105℃活化30min,置干燥器備用。吸取上述三種溶液各4~6μl,分別點于處理好的同一薄層板上,以甲苯-丙酮(9∶2)為展開劑展開,取出,晾干;然后置碘缸中約3min后取出,揮盡板上吸附的碘后,置紫外光燈365nm下檢視。結(jié)果供試品在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點,陰性樣品在此位置無干擾。見圖1。
2.1.2 大黃TLC鑒別[1]130,[2-3]取疏肝和胃顆粒3g,加甲醇20ml,超聲處理30min,靜置1h,0.45μm濾膜濾過,取濾液5ml蒸干;殘渣加水10ml使溶解,加鹽酸1ml,加熱回流30min,立即冷卻;用乙醚振搖提取2次,每次20ml,合并乙醚液,蒸干;殘渣加三氯甲烷1ml使溶解,做為供試品。取陰性供試品(缺大黃)3g,同法制備陰性溶液。取大黃酸對照品5mg于5ml容量瓶中,用甲醇定容,做為對照品。按照薄層色譜法,吸取上述三種溶液各4μl,分別點于同一硅膠H薄層板上,以石油醚(30~60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶6∶1)為展開劑展開,取出,晾干,置紫外光燈365nm下檢視。結(jié)果供試品在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點,陰性樣品在此位置無干擾。見圖2。
2.1.3 香附的TLC鑒別[1]241取疏肝和胃顆粒12g,加乙醚5ml,超聲處理60min,濾紙濾過,濾液蒸干;殘渣用乙酸乙酯5ml溶解,做為供試品。取陰性供試品(缺香附)12g,同法制備陰性溶液。取香附對照藥材0.2568g,加乙醚20ml,超聲處理60min,濾紙濾過,濾液揮干,加乙酸乙酯0.125ml溶解,做為對照藥材溶液。按照薄層色譜法,取經(jīng)105℃活化30min的硅膠GF254薄層板,吸取上述三種溶液各2μl,分別點于同一薄層板上,展開時薄層板與展開缸底部接近90°,以二氯甲烷為展開劑展開,取出,晾干,置紫外光燈254nm下檢視。結(jié)果供試品在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同的深藍(lán)色斑點,陰性樣品在此位置無干擾。見圖3。
2.2 高良姜素的含量測定[1]附錄34,[4]
2.2.1 色譜條件 色譜柱:Theromo BDS Hypersil C18柱(250mm×4.6 mm,5μm);流動相:甲醇-0.2%磷酸溶液(60∶40,V/V);檢測波長:266nm;柱溫:31℃,理論塔板數(shù)按高良姜素計算應(yīng)不低于6000。
2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取高良姜素對照品4.05mg,置于10ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,得到0.405mg/ml對照品儲備液。精密吸取對照品儲備液1ml,置10ml容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,得40.5μg/ml對照品溶液。
2.2.3 供試品溶液的制備 取疏肝和胃顆粒研細(xì)(過80目篩),精密稱取粉末6.0g,置于250ml錐形瓶中,加甲醇溶液100ml,稱定重量,回流提取60min,放至室溫,用甲醇補足減失的甲醇,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,取續(xù)濾液即得。
2.2.4 陰性對照品溶液的制備 取缺高良姜素的陰性對照樣品6.0g,同供試品溶液制備方法制備陰性對照樣品溶液。
2.2.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 取上述對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液在上述色譜條件下各進(jìn)樣20μl,測HPLC圖譜。結(jié)果表明陰性樣品在與對照品色譜相同位置處無干擾。見圖4。
2.2.6 線性關(guān)系考察 分別吸取上述對照品溶液0.081、0.202、0.405、0.810、1.215、1.620μg注入高效液相色譜儀,記錄峰面積,以峰面積(Y)對濃度(X)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程為Y=4254346X-9001(r=0.9999),表明高良姜素在0.081~1.62μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好?;貧w曲線見圖5。
2.2.7 精密度試驗 取同一對照品溶液依法重復(fù)進(jìn)樣5次,每次進(jìn)樣20μl,測定峰面積。峰面積的RSD為1.12%,表明儀器的精密度良好。
2.2.8 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液,分別于0.5、2、4、8、12、24h進(jìn)樣20μl,測定峰面積并計算延胡索乙素的RSD。結(jié)果RSD為1.93%,表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。
2.2.9 重復(fù)性試驗 取同一批樣品共5份,按供試品溶液的制備方法制備溶液,按上述色譜條件測定,結(jié)果延胡索乙素平均含量為0.2727 mg/g,RSD為0.45%,表明重復(fù)性良好。
2.2.10 最低檢測限 精密吸取上述對照品溶液適量,加流動相逐步稀釋至色譜圖中高良姜素的峰高為噪音的3倍(信噪比S/N≥3)。高良姜素的最低檢測限為0.23 μg/ml。
2.2.11 回收率試驗 精密稱取已知含量(0.2694 mg/g)的疏肝和胃顆粒樣品各6g,分別精密加入高良姜素對照品溶液(0.405mg/ml)4ml,照供試品溶液制備方法制備并依法測定,計算回收率。結(jié)果見表1。
2.2.12 樣品測定 精密稱取5批不同批號的疏肝和胃顆粒樣品,按供試品溶液的制備方法制備溶液,測定含量,結(jié)果見表2。
元胡的薄層色譜鑒別時,采用3%NaOH浸泡3秒,普通硅膠G薄層板,使元胡中的元胡索乙素以游離態(tài)展開,有效防止了斑點拖尾,提高了分離效果[5]。
元胡和大黃TCL鑒別,分別從溫度(15、25、35℃)及薄板型號等方面考察了方法耐用性。結(jié)果斑點清晰,分離度良好,分離無明顯差異,表明方法耐用性良好。
取高良姜素對照品溶液用紫外可見分光光度計于200~400nm處進(jìn)行掃描,從紫外圖譜中可見在266nm處有比較強的最大吸收,與有關(guān)參考文獻(xiàn)[6]報道一致,故選擇266nm為檢測波長。
2010版《中華人民共和國藥典》中高良姜素測定流動相比例為甲醇-0.2%磷酸溶液(55∶45)[1]270,但結(jié)果不理想,研究將流動相比例調(diào)至甲醇-0.2%磷酸溶液(60∶40),高良姜素達(dá)到基線分離。
經(jīng)過5批樣品高良姜素含量測定,高良姜素含量最低為0.2678mg/g,考慮到原料藥材的含量差異及工藝穩(wěn)定性,將高良姜素含量低限以樣品最低值的65%作為含量低限,則疏肝和胃顆粒中高良姜素含量不得低于0.17mg/g。
[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:22,130,241,270,附錄34.
[2]劉光斌,李懷彪.大黃通氣口服液的穩(wěn)定性研究[J].西部中醫(yī)藥,2013,26(11):25-29.
[3]劉光斌,李懷彪,謝六生,等.大黃通氣口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2011,18(7):47-49.
[4]司馬義江·阿布都熱西提,阿依努爾·阿木提. HPLC法測定維藥羅補甫克比日丸中高良姜素的含量[J].中國民族民間醫(yī)藥,2014,23(23):8-9.
[5]肖環(huán)賢,陳映良.和胃止痛膠囊中延胡索、吳茱萸的鑒別方法研究[J].中國民族民間醫(yī)藥,2010,19(5):20-21.
[6]李智勇,孫冬梅.HPLC法測定高良姜中高良姜素和山奈素的含量[J].中華中醫(yī)藥雜志,2010,25(9):1368-1370.
Research on the Quality Standard of Shugan Hewei Granules
MAO Heping ZOU Ganpeng LIU Guangbin*
Department of Pharmacy,jiugang Hospital,Jiayuguan 735100,China
ObjectiveTo formulate the quality standard for Shugan Hewei granules.MethodsThe qualities of Yuanhu(RhizomaCorydalisyanhusuoW.T.Wang),Dahuang(Radix et RhizomaRhei)and Xiangfu(RhizomaCyperusrotundusI)in the granules were identified by microscopic examination;Thenatures of Yuanhu, Dahuang and xiangfu were detected by layer chromatography(TLC)and the contents of it measured by HPLC were inertsil C18column,(15mm×4.6mm,5μm)、methanol-0.2% H3PO4=60/40,v/v, as mobile phase,0.8ml/min as flow speed and wavelength 266nm. Results The result objectived by microscopy were obvious;The TLC spots developed were clear with efficient separating ability,which were negative noninterferencs with the characterstics of high specificity and satisfactory reproducibility;The linear relation between psoralen among 0.081μg/ml-1.62μg/ml(r=0.9999)was excellent;The average recoveries of psoralen and isopsoralen were 97.93% (RSD=1.18%,n=6)respectively。ConclusionTLC and HPLC are handy,safe and accurate for Shugan Hewei granules todetermine the quality。
Shugan Hewei Granules;Quality Standard;Galangin;TLC;HPLC
毛和平(1965-),男,甘肅通渭人,副主任中藥師,主要從事醫(yī)院制劑工作,E-mail:maoheping1965@163.com
劉光斌(1970-),男,主任藥師。主要從事醫(yī)院制劑、臨床藥學(xué),E-mail:jgyylgb@sina.com
R286.0
A
1007-8517(2015)18-0014-03
2015.06.18)