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    反相液相色譜法對飼料中添加金霉素的檢測分析

    2015-01-24 18:10:45高慶田
    中國畜牧獸醫(yī)文摘 2015年8期
    關(guān)鍵詞:金霉素提取液鹽酸

    高慶田

    (遼寧省丹東市獸藥飼料監(jiān)察所,遼寧省丹東 118002)

    反相液相色譜法對飼料中添加金霉素的檢測分析

    高慶田

    (遼寧省丹東市獸藥飼料監(jiān)察所,遼寧省丹東 118002)

    金霉素是四環(huán)素族中抗菌能力最強(qiáng)的廣譜抗生素,作為抗生素優(yōu)點(diǎn)很多,但長期使用甚至濫用的弊端也越來越嚴(yán)重。為摸清本地生產(chǎn)、經(jīng)營環(huán)節(jié)飼料中實(shí)際添加金霉素的狀況,我所采用反相液相色譜法分4次跟蹤監(jiān)測2013、2014年本地區(qū)豬飼料34批次、雞飼料47批次共計(jì)81批次樣品,從檢測結(jié)果分析目前飼料中添加金霉素實(shí)際情況。

    反相液相色譜法 金霉素 檢測 分析

    1 材料

    1.1 藥品和試劑

    所用試劑,除特別注明外均為分析純。水為蒸餾水,色譜用水為超純水。氫氧化鈉,乙二酸溶液(0.01mol/L),鹽酸溶液(4mol/L),乙腈(色譜純),甲醇(色譜純),提取液(丙酮+4mol/L鹽酸溶液+水=13+1+6),金霉素對照品,中國藥品生物制品檢定所(批號30489-200202,純度94.5%)。

    1.2 儀器和設(shè)備

    高速冷凍離心機(jī)(湘儀TGL-18G-C),雷磁PH計(jì),恒溫振蕩器(YH-4),0.45um微孔濾膜,waters色譜柱,分析天平(島津AUB120D),2695型高效液相色譜儀(配有2998二極管矩陣檢測器,美國waters公司)。

    1.3 樣品

    分別于2013年上、下半年、2014年上、下半年在4個(gè)縣區(qū)生產(chǎn)環(huán)節(jié)、經(jīng)營環(huán)節(jié)抽取豬配合、濃縮飼料34批次,雞配合、濃縮飼料47批次。

    2 流動(dòng)相和標(biāo)準(zhǔn)品制備

    2.1 流動(dòng)相

    乙二酸溶液(0.01mol/L)+乙腈(色譜純)+甲醇(色譜純)=10+3+2

    2.2 金霉素標(biāo)準(zhǔn)液

    使用感量0.00001g的電子天平準(zhǔn)確稱取金霉素標(biāo)準(zhǔn)品0.01323g,置于50ml容量瓶中,用提取液溶解并定容至刻度,制成濃度為250mg/L金霉素標(biāo)準(zhǔn)儲備液,貯于4-6℃,有效期1周。用移液器準(zhǔn)確移取4ml金霉素標(biāo)準(zhǔn)儲備液于10ml容量瓶中,用提取液稀釋至刻度,搖勻,制成濃度為100mg/L金霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液,現(xiàn)用現(xiàn)配。

    3 樣品制備

    3.1 樣品粉碎

    將采集的樣品300g左右,用四分法縮至100g左右,粉碎通過0.45mm孔徑篩,充分混勻,備用。

    3.2 樣品提取

    使用感量0.1g分析天平秤取已粉碎試樣1g,置于具塞錐形瓶中,加入100ml提取液,手搖2min,再用4mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至1.0~1.2,記錄鹽酸用量,作為稀釋倍數(shù),蓋緊塞子,置恒溫振蕩器(110r/min)振蕩30min。將離心后的上層液體倒入100ml離心管,3000r/min離心15min,用5ml一次性注射器取上層離心液,用0.45um濾膜過濾,濾液上機(jī)。

    3.3 色譜條件

    以乙二酸溶液(0.01mol/L)+乙腈(色譜純)+甲醇(色譜純)(10+3+2)為流動(dòng)相,流動(dòng)相流速1.0ml/min,色譜柱C18:柱長150mm、內(nèi)徑4.6mm、粒度5um,柱溫室溫(25℃),檢測器為紫外檢測器,檢測波長375nm,進(jìn)樣量10ul。

    4 結(jié)果分析

    4.1 專屬性考察

    金霉素出峰保留時(shí)間在4.595min;空白添加金霉素出峰保留時(shí)間在4.596min;空白溶液在4.012min以后無檢出峰。標(biāo)準(zhǔn)品金霉素吸收峰與雜質(zhì)峰分離度大于1.5,符合要求。

    4.2 回收率

    81批次供試品分4次上機(jī)檢測,每次上機(jī)附加1批次空白樣品和1批次空白添加,空白添加量均為100mg/kg,加標(biāo)回收率分別為85.2%、86.7%、84.9%、85.1%。

    4.3 結(jié)果的計(jì)算

    用計(jì)算公式X=C×P1×n×V/P/m/V計(jì)算金霉素含量(g/ L)。式中:X-試樣中所含金霉素的質(zhì)量(mg/kg);P1-樣品峰面積;n-樣品稀釋倍數(shù)(100+1.3.2消耗鹽酸體積);V-進(jìn)樣體積ul;p-標(biāo)準(zhǔn)品峰面積;m-樣品稱樣量g;

    4.4 結(jié)果統(tǒng)計(jì)

    共檢測81批次樣品,其中80批次合格,1批次超標(biāo),合格率98.8%。

    5 小結(jié)

    本實(shí)驗(yàn)是按照GB/T19684-2005標(biāo)準(zhǔn)法進(jìn)行操作,最低檢出濃度為4mg/kg。按照標(biāo)準(zhǔn)實(shí)際操作,標(biāo)準(zhǔn)品出峰保留時(shí)間在4.595min,標(biāo)準(zhǔn)品峰型完整,分離完全,無分叉拖尾現(xiàn)象,標(biāo)準(zhǔn)品金霉素吸收峰與雜質(zhì)峰分離度大于1.5,方法回收率在85%-87%之間,說明此標(biāo)準(zhǔn)適合配合飼料、濃縮飼料中金霉素檢測。但經(jīng)過幾次檢測,發(fā)現(xiàn)GB/T19684-2005標(biāo)準(zhǔn)有三處錯(cuò)誤,一是金霉素標(biāo)準(zhǔn)儲備液配置完成后,其濃度標(biāo)準(zhǔn)上寫的是250g/L,實(shí)際應(yīng)該為250mg/L;二是金霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液不應(yīng)該用超純水稀釋至刻度并定容,應(yīng)該用提取液稀釋至刻度并定容;三是金霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液定容后,其濃度標(biāo)準(zhǔn)上寫的是100g/L,實(shí)際應(yīng)該為100mg/L。

    6 討論

    本次抽檢共檢測81批次樣品,僅1批次超標(biāo),合格率98.8%,高的合格率并不代表飼料質(zhì)量絕對安全。對檢測結(jié)果進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),在被檢的34批次豬飼料和47批次雞飼料中,金霉素檢出情況分別為9批次和4批次,檢出率為26.5%和8.5%。如此高的檢出率說明豬、雞飼養(yǎng)環(huán)節(jié)添加使用金霉素非常普遍。從這一檢測結(jié)果同時(shí)折射出,我國飼料行業(yè)抗生素使用頻次非常高,甚至可以說達(dá)到濫用的程度。希望決策部門在藥物添加劑批準(zhǔn)時(shí)應(yīng)該更加謹(jǐn)慎,對飼料企業(yè)的審查應(yīng)該更加嚴(yán)格;飼料企業(yè)取得藥物添加劑批準(zhǔn)文號后應(yīng)該增強(qiáng)社會(huì)責(zé)任意識,加強(qiáng)自律,嚴(yán)格按實(shí)際要求生產(chǎn),盡可能地不添加抗生素;監(jiān)管部門應(yīng)該加大監(jiān)管力度,嚴(yán)厲打擊違法添加事件,防止抗生素濫用。

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