尿肌酐測(cè)定方法的改良

□ 蒯 霞

肌酐是肌酸和磷酸肌酸代謝的終產(chǎn)物，它主要由肌肉中磷酸肌酸的非酶促反應(yīng)生成。對(duì)正常成人來(lái)說(shuō)，每日產(chǎn)生肌酸酐的量是恒定的，而且肌酸酐的產(chǎn)生量與肌肉量成正比，因此一般男性的數(shù)值比女性高一點(diǎn)。經(jīng)常鍛煉肌肉者和非素食者的數(shù)值也較高。肌酸酐的產(chǎn)生量一定，而且不會(huì)在過(guò)濾后被腎小管重吸收。它的排泄量反映血液中的肌酸酐含量和腎小球的過(guò)濾速率，也就是腎臟的機(jī)能。當(dāng)腎發(fā)生嚴(yán)重病變時(shí)，肌酸酐排泄受阻，血液中肌酸酐含量升高。血液中肌酸酐的測(cè)定，可以知道腎功能是否有嚴(yán)重障礙，肌酸酐的值越高，腎臟的障礙越大;但是血液肌酸酐只有在腎臟有嚴(yán)重障礙時(shí)才會(huì)大幅提高，不能作為早期腎臟病的指標(biāo)。同時(shí)肌酐值也是作為其他檢測(cè)項(xiàng)目的校正值。

一、實(shí)驗(yàn)原理

肌酐與過(guò)量苦味酸在堿性條件下反應(yīng)生成橙紅色苦味酸肌酐。在波長(zhǎng)492nm處比色定量。

二、實(shí)驗(yàn)器材及耗材

10ml的采尿管;10ml的具塞比色管;96孔板、酶標(biāo)儀MULTISKAN MK3;加樣槍 5ml、1ml、100ul，槍頭;振蕩器。

三、試劑

(一)飽和苦味酸。稱取苦味酸(A.R)15克，置于大燒杯中，加蒸餾水1，000ml，冷卻后有結(jié)晶析出，表示已達(dá)飽和，傾出上清夜備用。此液標(biāo)準(zhǔn)飽和度的測(cè)定—準(zhǔn)確取清夜10ml，用0.1%酚酞作指示劑，以0.1N的氫氧化鈉(NaOH)滴定需5.2～5.4ml應(yīng)能中和為準(zhǔn)。

(二)2.5N的氫氧化鈉溶液。稱取氫氧化鈉(NaOH)100克，加蒸餾水使溶解，冷卻后用蒸餾水稀釋至1升。

(三)堿性苦味酸。準(zhǔn)確量稱取飽和苦味酸5份，加2.5N的氫氧化鈉1份，應(yīng)用時(shí)即配即用為宜。

(四)肌酐標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1mg/ml)。準(zhǔn)確量稱取純肌酐500mg，用0.1mol/L鹽酸溶解，然后移至500ml的容量瓶中，加0.1mol/L鹽酸至刻度。加甲苯數(shù)滴防腐，存于冰箱，此溶液穩(wěn)定，可長(zhǎng)期保存。

(五)肌酐標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(0.01mg/ml)。準(zhǔn)確量取3ml標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于500ml的容量瓶中，加水稀釋至刻度(此溶液可保存一周以上)。

四、操作步驟

(一)樣品處理。取0.1ml尿樣置于10ml比色管中，加水至3ml。

(二)試劑空白。取3ml水置于10ml比色管中。

(三)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取8支比色管，按表1配制。

表1

向各管加入2.0ml堿性苦味酸，混勻，于室溫下反應(yīng)20～30min，加 5ml水，混勻，備用。

將96孔板每孔先加入0.1ml水，再?gòu)谋壬苤腥?.1ml溶液加入。放入酶標(biāo)儀度數(shù)。根據(jù)吸光度計(jì)算。

相比WS/T97-1996尿中肌酐分光光度測(cè)定方法，線性范圍擴(kuò)大為0～3g/L，可以同時(shí)檢測(cè)大量樣品。

五、檢測(cè)數(shù)據(jù)

圖1 改良后的標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 改良前的標(biāo)準(zhǔn)曲線

六、檢測(cè)結(jié)果

改良過(guò)后的方法與之前的方法所測(cè)的肌酐值在0～1g/L，區(qū)間內(nèi)差不多一樣。高于1的用722分光光度計(jì)做不出來(lái)，已經(jīng)不成線性。

七、結(jié)果分析

改良后的方法可以對(duì)大量的樣品進(jìn)行同時(shí)度數(shù)，且檢測(cè)范圍也擴(kuò)大了，有助于高值的檢測(cè)。正常人尿液當(dāng)中的肌酐范圍在0.35～2.25g/L。但是有時(shí)候檢測(cè)的尿樣中肌酐含量超過(guò)3g/L，所以該良好的方法有助于更好地檢測(cè)尿液中的肌酐。此外，改良過(guò)后的方法可以同時(shí)檢測(cè)大批樣品，節(jié)約時(shí)間，解放勞動(dòng)力。總之改良好的方法既節(jié)約了時(shí)間和人力也提高了準(zhǔn)確度和檢測(cè)范圍。

八、干預(yù)措施

尿液中肌酐升高或降低都說(shuō)明機(jī)體可能發(fā)生病變，例如升高以后會(huì)出現(xiàn)夜尿增多、乏力、口渴、身上出現(xiàn)浮腫、血壓升高、心力衰竭、肺水腫等癥狀，這是水代謝失衡的表現(xiàn)。降低可能是因?yàn)榛颊吣I臟內(nèi)發(fā)生了纖維化，而纖維化導(dǎo)致腎臟固有細(xì)胞損壞，破壞了腎臟固有細(xì)胞的組織結(jié)構(gòu)，損傷了腎功能。