盧海霞 王鈞 邵文

縮泉丸質量標準研究分析

盧海霞 王鈞 邵文

目的修訂完善縮泉丸原標準中鑒別及含量測定方法。方法采用薄層色譜法鑒別益智仁、烏藥及高效液相色譜法測定烏藥中烏藥醚內酯的量。結果益智仁、烏藥薄層斑點清晰；烏藥醚內酯在0.0791~0.6328 μg(r=0.9999)內線性關系良好, 平均回收率分別為101.7%(RSD為2.6%)。結論實驗方法操作簡便、結果準確, 可用于本品的質量控制。

縮泉丸；薄層色譜；高效液相色譜；烏藥醚內酯

縮泉丸處方來源于《婦人良方》［1］, 由山藥、益智仁、烏藥三味中藥組成。益智仁溫腎納氣；烏藥溫散下焦虛冷,固澀小便；山藥健脾補腎。用于腎虛所致小便頻數(shù), 夜臥遺尿。縮泉丸現(xiàn)代臨床被單獨或與其他藥物聯(lián)合使用, 治療小兒遺尿、老年尿失禁、夜尿癥、神經(jīng)性尿頻、慢性腎小球腎炎、腎病綜合征、尿道綜合征等［2-4］?，F(xiàn)代研究表明, 縮泉丸能降低D-半乳糖誘導亞急性衰老模型大鼠與尿液生成相關的水通道蛋白(AQP2)、神經(jīng)內分泌激素醛固酮(ALD)和抗利尿激素(ADH)的含量, 升高衰老膀胱膀胱漏尿點壓(BLPP)、腹壓漏尿點壓(ALPP)、最大膀胱排尿壓(MVP)［5］。提高老年大鼠腎上腺系數(shù)及血清中皮質醇(Cort)、血清三碘甲狀腺原氨酸(T3)、血清甲狀腺素(T4)含量［6］?？s泉丸原標準中收載了顯微鑒別和理化鑒別。為更好控制產品的質量, 以烏藥中烏藥醚內酯為指標成分, 采用反相高效液相色譜含量測定烏藥中烏藥醚內酯的含量。并對烏藥、益智仁進行了薄層色譜鑒別。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200 高效液相色譜儀, 硅膠G薄層板(青島海洋化工有限公司, G板批號：20100219);硅膠GF254薄層板(青島海洋化工有限公司, GF254板批號：20091210)。

1.2 試藥 烏藥醚內酯對照品(中國藥品生物制品檢定所,含量測定用, 批號：1568-200201)；烏藥對照藥材(批號：121096-200803, 供鑒別用)、益智對照藥材(中國藥品生物制品檢定所, 批號：121029-200503, 供鑒別用)；縮泉丸(生產企業(yè)A提供, 批號：20080701、20080702、20080703；生產企業(yè)B提供, 批號：0809101、0809102、0809103)

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 烏藥的鑒別 取本品6 g, 研細, 置具塞錐形瓶中, 加石油醚(30~60℃)30 ml, 密塞, 搖勻, 浸泡過夜, 濾過, 濾液揮發(fā)至約1 ml, 作為供試品溶液。按本品的處方、制法制備缺烏藥的樣品, 同法制備陰性對照溶液。取烏藥對照藥材1 g,同法制成對照藥材溶液［7］。取上述三種溶液各5 μl, 點于同一硅膠G薄層板上, 以甲苯-乙酸乙酯(15：1) 為展開劑, 展開, 取出, 晾干, 置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上, 顯相同顏色的熒光斑點。陰性對照無干擾。

2.1.2 益智仁鑒別 取烏藥鑒別項下的供試品溶液作為供試品溶液。另取益智仁對照藥材1 g, 同法制成對照藥材溶液。取上述兩種溶液各5 μl, 分別點于同一用硅膠GF254薄層板上, 以環(huán)己烷-乙酸乙酯(9：1)為展開劑［8］, 展開, 取出, 晾干,置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品色譜中, 在與對照藥材色譜相應的位置上, 顯相同顏色的斑點。陰性對照無干擾。

2.2 含量測定［9,10］

2.2.1 色譜條件 色譜柱：phenomenex C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；流動相：乙腈-水(44：56)；流速：1.0 ml/min；進樣量：10 μl；檢測波長：235 nm；柱溫30℃。

2.2.2 溶液制備 對照品溶液取烏藥醚內酯對照品適量,加甲醇制成20 μg/ml的溶液, 即得。

供試品溶液精密稱取本品約3 g , 置具塞錐形瓶中, 精密加入甲醇50 ml, 密塞, 稱定重量, 超聲處理1 h, 放冷, 再稱定重量, 用甲醇補足減失的重量, 搖勻, 濾過, 取續(xù)濾液, 即得。

2.2.3 專屬性試驗 按本品的處方工藝制成缺烏藥陰性樣品, 再按供試品溶液制法制備陰性對照溶液。精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液, 依法進行測定, 結果供試品溶液色譜圖中在與對照品相同保留時間處有相應色譜峰出現(xiàn), 而陰性對照液色譜圖在與對照品相同保留時間處無色譜峰。

2.2.4 標準曲線 取烏藥醚內酯對照品適量, 精密稱定, 加甲醇制成20 μg/ml的溶液。分別精密吸取2、4、6、8、10、12、16 μl, 以進樣量(μg)、峰面積為橫、縱坐標, 繪制標準曲線。結果表明烏藥醚內酯在0.0791~0.6328 μg(r=0.9999)內, 線性關系良好。

2.2.5 精密度試驗 取供試品溶液(批號0809101), 按擬定的色譜條件, 連續(xù)測定5次。結果表明5次測定的烏藥醚內酯峰面積平均值為158.97, RSD為0.86%。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品溶液(批號0809101),按擬定的色譜條件, 分別于配制后0、4、8、12、16、20、24 h進樣測定每隔一定時間測定1次, 結果烏藥醚內酯峰面積的RSD為1.91%(n=7)。供試品溶液至少在24 h內穩(wěn)定。

2.2.7 重復性試驗 取樣品(批號：0809101), 按擬定的方法平行測定6份, 計算, 結果6份樣品測得烏藥醚內酯含量的平均值為0.29 mg/g, RSD為1.9%。試驗結果表明, 本法的重現(xiàn)性較好。

2.2.8 加樣回收率試驗 取已知含量樣品(批號：0809101,烏藥醚內酯含量為0.29 mg/g)適量, 共6份, 精密稱定, 具塞錐型瓶中, 每份分別精密加入烏藥醚內酯對照品溶液(0.39522 mg/ml)適量, 依法測定。測得烏藥醚內酯的平均回收率為101.7%, RSD為2.6% 。結果表明本法回收率較好, 符合定量分析的要求。

2.2.9 樣品測定 取5批樣品, 按擬定方法測定烏藥醚內酯含量, 樣品烏藥醚內酯含量分別為0.29、0.24、0.25、0.03、0.09 mg/g。

3 小結

對含量測定供試品溶液提取方法分別考察了乙醚回流提取, 甲醇超聲提取和氯仿超聲提取三種方法, 采用高效液相色譜法測定提取率。

從三種提取方法看乙醚提取雜質少, 但回流時間長, 方法較費時。甲醇超聲提取, 方法簡單, 樣品也能很好的分離,提取率也高于乙醚提取。氯仿提取樣品成分復雜, 不好分離。因此, 確定選擇甲醇超聲提取的方法。

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.21.212

2015-07-03］

130033 吉林省藥品檢驗所