奶牛乳房炎綜合防控關(guān)鍵技術(shù)研究進展

劉龍海，李新圃，楊 峰，羅金印，王旭榮，張 哲，2，李宏勝（.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所，農(nóng)業(yè)部獸用藥物創(chuàng)制重點實驗室，甘肅省新獸藥工程重點實驗室，蘭州 730050；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院）

專論與綜述

奶牛乳房炎綜合防控關(guān)鍵技術(shù)研究進展

劉龍海1，李新圃1，楊 峰1，羅金印1，王旭榮1，張 哲1，2，李宏勝1
（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所，農(nóng)業(yè)部獸用藥物創(chuàng)制重點實驗室，甘肅省新獸藥工程重點實驗室，蘭州 730050；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院）

奶牛乳房炎是一種給奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成極大經(jīng)濟損失的常見多發(fā)病。目前的研究表明，采取綜合防控技術(shù)是控制本病最有效的方法。文章綜述了奶牛乳房炎發(fā)病情況、病因、發(fā)生規(guī)律及造成的危害、引起奶牛乳房炎的主要病原菌及其區(qū)系分布狀況、乳房炎診斷方法、治療藥物及疫苗研制等最新研究進展，同時還對奶牛乳房炎綜合防控技術(shù)的前景進行了展望，以期為更好地防治奶牛乳房炎提供借鑒和參考。

奶牛乳房炎；綜合防控；病原菌；診斷治療；疫苗

奶牛乳房炎是一種由多因素引起的能給奶牛業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟損失的疾病。目前，乳房炎的預(yù)防與治療難度很大，原因主要在于其致病菌的多樣性和易感牛、病原、環(huán)境之間的相互作用。多年來，國內(nèi)外學(xué)者對奶牛乳房炎的防治進行了大量研究，在防治方法和防治藥物的研究中取得了一定進展，但要徹底控制本病還任重而道遠。

1 奶牛乳房炎發(fā)病現(xiàn)狀及危害

奶牛乳房炎是影響奶牛業(yè)發(fā)展的主要疾病之一。據(jù)世界奶牛協(xié)會統(tǒng)計，全世界約有1/3的奶牛患有各種類型的乳房炎，每年因乳房炎造成的經(jīng)濟損失達350億美元。在美國，每年因乳房炎造成的經(jīng)濟損失達20億美元［1］；在新西蘭，每年因乳房炎造成的經(jīng)濟損失超過3億新西蘭元［2］。近期的研究發(fā)現(xiàn)，國外奶牛乳房炎的發(fā)病率平均25％～60％，不同國家每年每頭奶牛因奶牛乳房炎而造成的經(jīng)濟損失達61～93英鎊［3］。據(jù)報道，日本奶牛乳房炎平均患病率45.1％。西歐部分經(jīng)濟發(fā)達國家奶牛隱性乳房炎發(fā)病率也高達25％。在我國，奶牛臨床型乳房炎的平均發(fā)病率33.41％，隱性乳房炎的陽性率46.40％～85.70％，發(fā)病率均高于國外報道，每年造成的直接經(jīng)濟損失達30億元人民幣［4］。

2 引起奶牛乳房炎的原因

引起奶牛乳腺炎的病原微生物有球菌、桿菌、支原體、真菌、酵母和病毒等，多達150種，但較常見的有20多種。根據(jù)其來源和傳播方式可分為傳染性病原體和環(huán)境性病原體兩類。傳染性病原體主要包括無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌和支原體等，它們可在乳區(qū)和牛群中傳播流行。環(huán)境性病原體主要包括大腸桿菌、乳房鏈球菌、克雷伯氏菌、綠膿桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、變形桿菌、凝固酶陰性葡萄球菌、環(huán)境鏈球菌、化膿性放線菌、牛棒狀桿菌、真菌或酵母菌、原囊藻等。

奶牛的生存環(huán)境與乳房炎的流行關(guān)系十分密切。據(jù)統(tǒng)計，約有20％的乳房炎歸咎于遺傳因素，25％為環(huán)境因素，50％為畜群管理因素。對我國奶牛乳房炎的大量流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，我國南部地區(qū)乳房炎發(fā)病率要比北方高，而且夏季比冬季要多發(fā)。造成這種情況的原因是高溫、高濕的氣候更有利于病原菌的滋生和傳播。奶牛乳房炎傳播的主要途徑是通過接觸感染，因此，牛場管理不到位，消毒不徹底，飼養(yǎng)人員缺乏責(zé)任心，不注意保護奶牛乳頭等都會增加感染的機會。

奶牛自身因素也是影響奶牛乳房炎發(fā)生率的重要因素。不同品種、體型、年齡、泌乳期的奶牛抵御外來病原入侵的能力不同。此外，在奶牛發(fā)生乳頭及乳房外傷、其他繼發(fā)性疾病也會使奶牛乳房炎發(fā)生。

3 奶牛乳房炎的診斷

奶牛乳房炎根據(jù)有無臨床癥狀分為臨床型乳房炎和隱性乳房炎。奶牛發(fā)生臨床型乳房炎時會出現(xiàn)明顯的臨床癥狀，可以通過對患畜全身和局部的望、聞、問、切以及對乳汁顏色、凝塊、絮狀物等性狀的觀察來確診。而隱性乳房炎沒有明顯的臨床癥狀，只有采用實驗方法才能被檢查出來，主要方法如下。

3.1 乳汁體細胞檢查

體細胞計數(shù)（somatic cell count，SCC）是廣泛應(yīng)用于評價奶牛各乳區(qū)和奶牛健康狀況的一種重要指標(biāo)，目前，臨床上常用的乳汁體細胞檢查方法有加州乳房炎試驗（CMT）、日本的PL法、蘭州乳房炎診斷法（LMT）、杭州乳房炎診斷法（HMT）和北京乳房炎診斷法（BMT）等。其原理是在CMT試液的作用下，乳汁細胞中的脂類物質(zhì)發(fā)生乳化，乳汁細胞被破壞，釋放出的DNA發(fā)生沉淀或凝塊，根據(jù)其量的多少來間接判定乳中細胞數(shù)的多少。

3.2 乳汁pH值檢驗法

奶牛發(fā)生乳房炎時，乳汁中的pH值會上升，因此通過測量pH值可以達到判定乳房炎的目的。目前有麝香草酚蘭檢驗法（BTB法）和試紙法等。

3.3 乳汁導(dǎo)電性檢查法

奶牛乳腺發(fā)炎時，乳汁中的Na+、Cl-顯著升高導(dǎo)致乳汁的導(dǎo)電率出現(xiàn)變化。日本首先利用乳汁導(dǎo)電性研制出了便攜式的袖珍電子診斷儀。在我國，山西農(nóng)業(yè)大學(xué)郝慶銘教授研發(fā)了同類產(chǎn)品SX-1型乳牛乳房炎診斷儀，這種儀器不但能區(qū)分健康乳、可疑乳、隱性乳房炎輕度感染乳、中度乳、重度乳等5類乳汁，還可初步測定出乳汁的營養(yǎng)成分。隨后，他又研制出具有國際領(lǐng)先水平的ZRD（以前稱CN）型乳牛乳腺炎電子檢測儀。西北農(nóng)林科技大學(xué)也研制出一種導(dǎo)電極為傳感器的便攜式奶檢儀——XND-A型奶檢儀，它體積小，能快速、綜合地檢出摻假奶、酸敗乳和乳房炎乳。

3.4 PCR檢測方法

Phuektes等［5］建立了一種以16S-23S rDNA間隔區(qū)為擴增靶序列的多重PCR檢測方法，是一種嶄新的分子水平細菌分類和鑒定方法。國內(nèi)也有以16S-23S rDNA間隔區(qū)為擴增靶序列建立了多重PCR同時檢測金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、乳房鏈球菌及PCR-ELISA檢測大腸桿菌的報道［6-8］。PCR法能快速對乳房炎病原菌進行鑒定，且對種特異性16S-23S rDNA間隔區(qū)序列進行擴增具有高敏感性和特異性，即使奶牛乳汁中僅含有少量病原菌也能被檢測出來，因而已在醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)臨床診斷中得到了比較廣泛的應(yīng)用。

3.5 其他診斷方法

西南農(nóng)業(yè)大學(xué)宋宣明、北京農(nóng)業(yè)大學(xué)艾曉杰等在1990年設(shè)計出用牛乳清電泳的變化來診斷隱性乳房炎的方法。這種方法較為直觀，準(zhǔn)確。賀婷［9］利用環(huán)介導(dǎo)等溫擴增（LAMP）作為新型的體外核酸擴增技術(shù)，建立的奶牛鏈球菌性乳房炎可視化LAMP檢測方法，可應(yīng)用于奶牛乳房炎鏈球菌的檢測和診斷。王娟［10］在大腸桿菌選擇培養(yǎng)基MQQ基礎(chǔ)上，以刃天青鈉作為指示劑，建立了致奶牛乳房炎大腸桿菌快速鑒別診斷及藥敏試驗方法。此外，還可通過對乳房炎奶樣的微生物進行培養(yǎng)、分離及鑒定，最后確定致病病原菌。

4 奶牛乳房炎的治療

目前奶牛乳房炎的治療方法主要有以下幾種。

4.1 抗生素類藥物治療

使用抗生素是治療乳房炎的一種有效手段，特別是在急性、多發(fā)性和亞急性乳房炎治療、控制奶產(chǎn)品質(zhì)量上或作為綜合防治中的一個重要組成部分，具有重要應(yīng)用價值。目前，治療乳房炎的藥物主要有青霉素、氯霉素、紅霉素、四環(huán)素、鏈霉素、卡那霉素和磺胺類藥物等［11］。楊雪峰等［12］研究了復(fù)方阿莫西林納米乳對泌乳期奶牛臨床型乳房炎的治療效果，實驗結(jié)果表明，高、中劑量組對奶牛臨床型乳房炎的治愈率約在90％以上，總有效率均在93％以上。馮言言等［13-14］評估了硫酸頭孢喹肟乳房注入劑和鹽酸頭孢噻呋乳房注入劑分別對泌乳期和干奶期奶牛乳房炎的臨床療效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，硫酸頭孢喹肟乳房注入劑和鹽酸頭孢噻呋乳房注入劑對奶牛乳房炎有良好的治療效果，能夠改善奶牛乳房炎的臨床癥狀，對乳房炎病原菌如金黃色葡萄球菌、鏈球菌以及大腸桿菌等有很好的清除作用，能夠提高牛奶質(zhì)量及安全性。然而，隨著抗菌藥物的大量廣泛使用，耐藥菌株也越來越多，使得療效下降。調(diào)查研究表明，我國奶牛乳房炎常見病原菌已對青霉素、鏈霉素、復(fù)方新諾明等藥物產(chǎn)生了嚴(yán)重的耐藥性，給后續(xù)的治療帶來了嚴(yán)重的困擾。

4.2 純中藥治療

中獸醫(yī)認為，乳腺炎即乳癰，是痰、濕、氣、血郁結(jié)不散，化而為炎。因此中草藥方劑的組方應(yīng)以清熱解毒、抗菌消炎、通經(jīng)活血、消腫止痛、活絡(luò)通乳為原則。常用清熱解毒藥、活血祛癌藥、解表藥和利濕藥，同時輔以補益、理氣等藥物，以補氣升陽、扶正祛邪，從而達到治療奶牛乳腺炎的目的。

4.2.1 全身用藥的方劑 王尚榮［15］用鐵母散合劑對西雜奶牛乳房炎進行治療，結(jié)果表明：鐵母散合劑對西雜奶牛臨床型乳房炎的治愈率為80％，有效率為100％；對隱性乳房炎的治愈率和有效率均為100％，其治愈率優(yōu)于青鏈霉素組。李秀麗［16］在生產(chǎn)實踐中用公英車前薄荷蘆根湯治療奶牛乳房炎50例，治愈41例，效果較好。

4.2.2 局部用藥方劑 當(dāng)奶牛發(fā)生乳房炎時，可采用向乳房內(nèi)藥物注射中藥方劑的方法來治療奶牛乳房炎。唐靜靜等［17］對自制的金英黃歸注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及臨床療效進行評價，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隱性乳房炎的奶牛通過3d中藥乳區(qū)注射用藥治療后治愈率達53.8％，有效率達92.3％，臨床型乳房炎的奶牛通過3d中藥乳區(qū)注射用藥治療后臨床診斷其治愈率達88.9％，有效率達88.9％。

也可通過患部藥敷治療乳房炎。敷貼性制劑具有使用方便、透皮吸收迅速、藥殘較低等優(yōu)點。榮幸祖等用中藥紫草膏（赤芍、連翹、白正、生地、乳香、沒藥、紫草、植物油、紅花、冰片、蜂蠟等組成）涂抹奶牛患部，重者配合乳內(nèi)及全身抗菌素治療，取得了較好效果。俄國研制了一種治療奶牛乳腺炎新型敷貼劑——烏別爾桑，由抗菌劑、藥用植物浸膏、免疫調(diào)節(jié)劑、麻醉劑和復(fù)合基質(zhì)組成，對臨床型乳腺炎的治愈率為84.6％。

4.3 中西獸醫(yī)結(jié)合法治療

馬樹東等［18］用乳房消腫散（金銀花、蒲公英、當(dāng)歸等）250g，灌服，早晚各服1次，3d為一個療程；西藥用特效米先50mL在奶牛頸部分4點深部肌肉注射，每3～4日為一個療程，用此法治療153例，有效140例，有效率91.5％，治愈13l例，治愈率為85.6％。李文輝等［19］利用乳源康（純中藥制劑）和鹽酸左旋咪唑的聯(lián)合治療奶牛乳房炎，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對臨床型乳房炎的治愈率達100％，對隱性乳房炎治愈率86.11％（31/36）。

4.3 生物療法

新生寶寶的身體各器官并沒有發(fā)育完全，其中也包括胃腸道，所以下面所講到的黃疸、濕疹等非腸道疾病都會使用到雙歧桿菌益生菌制劑。人是一個整體，因為在母體中是無菌環(huán)境，益生菌制劑能幫助寶寶更快的建立一個雙歧桿菌占優(yōu)的人體正常胃腸道有益菌群，促進胃腸道發(fā)育成熟，從而促進消化排除黃疸減少過敏。

目前，生物療法是治療奶牛乳房炎的新思路。楊為榮等用“乳炎?！保ㄒ环N具有酶生物活性和溶菌素作用機制雙重特性的高科技生化制品）對奶牛隱性乳房炎進行治療，有效率達85.60％～95.83％，平均有效率達87.72％，顯著高于常規(guī)藥物。白文順等［20］采用愛乳寶lgY抗體對奶牛乳房炎進行治療，結(jié)果顯示，愛乳寶lgY抗體能有效提高輕度臨床型乳房炎的治愈率和有效率，對重度乳房炎效果略差，這一結(jié)果與重度乳房炎患牛發(fā)病時間長或因復(fù)發(fā)造成腺體組織炎性損傷嚴(yán)重有直接的關(guān)系。王方正等［21］綜述了國內(nèi)外利用噬菌體內(nèi)溶素對奶牛乳房炎致病菌的溶解作用的研究進展，指出噬菌體及其內(nèi)溶素在奶牛乳房炎治療方面具有良好的應(yīng)用前景，但還需進一步研究來闡明其有效性、安全性。吳壘等評估了復(fù)合蛋白酶注入劑對臨床型奶牛乳房炎的療效，雖然療效不及有些種類的抗生素，但作為一種全新概念的復(fù)合蛋白酶制劑用做奶牛乳房炎的治療藥物，不僅避免了細菌耐藥性和藥物殘留等問題，而且為復(fù)合酶制劑的開發(fā)和應(yīng)用于治療奶牛乳房炎提供了全新的思路。

病原菌感染機體后，機體釋放和產(chǎn)生大量的細胞因子，如腫瘤壞死因子（TNF）、集落刺激因子（CSF）、干擾素（IFN）和白細胞介素（IL）等，參與機體的免疫反應(yīng)，調(diào)節(jié)局部的炎癥反應(yīng)［22］，國外學(xué)者用細胞因子在治療乳房炎方面進行了許多探索性研究，取得了很好的效果。

4.4 其他療法

為了及時從患病乳葉排出炎性滲出物，降低乳房內(nèi)的緊張性，白天應(yīng)2～3h擠乳1次，夜間5～6h擠乳1次，每次擠乳時，按摩乳房15～20min，對治療乳房炎有一定的效果。為了防止炎性滲出，在炎癥初期需冷敷，2～3d后可熱敷或紅外線照射等，以促進吸收。同時涂擦樟腦醑、樟腦軟膏或常醋調(diào)制的復(fù)方醋酸銅散等藥物，以促進吸收，消散炎癥。

對于嚴(yán)重的乳房炎病例，若乳房膿腫淺在時，可縱切口切開排膿，然后按化膿創(chuàng)進行外科處置。對深在的膿腫，可先抽出膿汁，然后注入青霉素或防腐藥物，防腐藥液一定要抽出。當(dāng)伴有發(fā)生急性漿液性、纖維素性、出血性乳房炎或乳房蜂窩織炎，患牛有全身癥狀時，需配合靜脈注射10％氯化鈣注射液或10％葡萄糖酸鈣注射液100～150mL，同時配用25％葡萄糖注射液500mL及其他滋補強壯藥物。此外，采用超聲波和激光對乳房炎進行治療也是奶牛乳房炎防治的有效手段。

5 奶牛乳房炎疫苗的研究

國內(nèi)外學(xué)者的調(diào)查結(jié)果表明，引起奶牛乳房炎的最主要病原菌主要有20多種，其中以鏈球菌、葡萄球菌和大腸桿菌最為常見，這幾種病原菌約占整個乳房炎病原菌的95％以上，因此，針對這幾種病原菌的奶牛乳房炎疫苗理論上可預(yù)防大部分乳房炎。

5.1 金黃色葡萄球菌疫苗

有研究人員利用金黃色葡萄球菌的表面蛋白（SpA、ClfA、ClfB、FnBPA、FnBPA IsdA，IsdB和IsdH等）、莢膜多糖（1，2，5和8型）、菌膜多糖粘附素以及毒素等作為疫苗抗原制作疫苗。在NABI公司注冊的針對金黃色葡萄球菌的StaphVAX○R疫苗，是將純化的CP5T和CP8偶聯(lián)到銅綠假單胞菌的無毒的外毒素A上而制成的。研究發(fā)現(xiàn)，此疫苗具有良好的安全性和免疫原性，但Ⅲ期的臨床實驗并沒有取得理想效果。Pfizer公司在2010年，將純化的金黃色葡萄球菌的CP5和CP8與ClfA偶聯(lián)制成疫苗。臨床實驗顯示，此疫苗能有效阻止病原對細胞的粘附。在鏈球菌疫苗方面的研究也顯示，多糖特異性抗體具有免疫保護作用。給小鼠注射莢膜多糖的單克隆抗體后，小鼠能夠抵抗無乳鏈球菌的感染。史冬艷［25］在國內(nèi)使用3種clfA、FnBPA-D、FnBPB-D基因構(gòu)建亞單位疫苗，結(jié)果顯示該疫苗能產(chǎn)生較高的抗體，能抑制葡萄球菌與纖維蛋白原在纖維結(jié)合素上結(jié)合，聯(lián)合誘導(dǎo)的免疫效果要高于其他單獨誘導(dǎo)組。

此外，Leitner等［26］利用葡萄球菌的高度保守蛋白TRAP研制的重組TRAP疫苗，研究發(fā)現(xiàn)接種該疫苗2次，160d后對奶牛仍有很高的免疫保護；免疫該苗組和對照組相比，免疫組出現(xiàn)葡萄球菌性乳房炎的幾率為13.5％（5/37），而對照組為42.9％（18/42）；同時，研究顯示該疫苗能提高牛奶產(chǎn)量和降低牛奶中體細胞的數(shù)量。Shkreta等［27］對金黃色葡萄球菌DNA疫苗進行了研究，該DNA疫苗是由FnBP的Dl2l-34、D320-33和C1fA的aa221-550基因片段為模板擴增的菌體質(zhì)粒（pCI-D1D3-IRES-C1fA）構(gòu)成。另外，疫苗中還含有誘導(dǎo)編碼顆粒細胞巨噬細胞集落刺激因子基因（pCI-bGM-CSF）的質(zhì)粒，使機體的重組細胞D1D3和C1fA蛋白含量增加，誘導(dǎo)機體淋巴細胞的生成，產(chǎn)生抵抗D1D3和ClfA的功能性抗體。經(jīng)臨床證實，此DNA疫苗對奶牛金黃色葡萄球菌有很好的保護性，安全性高。

5.2 大腸桿菌疫苗

大腸桿菌是引起奶牛急性和亞急性乳房炎的主要環(huán)境病原菌。由于許多屬、種的腸桿菌均可導(dǎo)致奶牛乳房炎，因此在早期的疫苗研究中很難找到通用的免疫原性抗原。直到20世紀(jì)80年代，人們發(fā)現(xiàn)了R-突變大腸桿菌株，它缺乏一種合成完整脂多糖的酶，因此其能暴露脂多糖核心。研究發(fā)現(xiàn)，J5菌株裸露的核心抗原能刺激抗G-菌核心抗原的Ig產(chǎn)生，同時R-突變大腸桿菌株的特異性單克隆抗體與其他革蘭氏陰性菌有交叉反應(yīng)。Wilson等［28］對利用R突變的大腸桿菌J5株和沙門氏菌Re-17株制成的疫苗與大腸桿菌核心抗原疫苗（J5）做了比較性研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)前者可使大腸桿菌臨床乳腺炎發(fā)病率減少65％～80％。

5.3 鏈球菌疫苗

鏈球菌屬種類很多，廣泛分布在自然環(huán)境中。其中，能引起奶牛乳房炎的致病菌主要是無乳鏈球菌、停乳鏈球菌和乳房鏈球菌。

多年來，研究人員對鏈球菌乳房炎疫苗進行了大量的研究。20世紀(jì)90年代研制出了乳房鏈球菌的活疫苗和滅活苗。有研究發(fā)現(xiàn)，它們雖然可以保護同源鏈球菌的侵襲，但都不能對異源的乳房鏈球菌引起的乳房炎產(chǎn)生免疫保護。Fontaine等［29］利用重組的乳房鏈球菌GapC和重組的停乳鏈球菌GapC抗原分別接種牛，然后利用異源乳房鏈球菌對奶牛乳房進行攻毒，結(jié)果顯示GapC抗原對同種異源乳房鏈球菌引起的乳房炎有免疫效果，但乳房鏈球菌GapC和重組的停乳鏈球菌GapC抗原之間不存在交叉免疫保護作用。

有研究通過比較B族鏈球菌基因組的研究發(fā)現(xiàn)，B族鏈球菌主要存在3種菌毛基因組島：菌毛島1（PI-1）、菌毛島2a（PI-2a）、菌毛島2b（PI-2b）。Margarit等［30］對289株B群鏈球菌的分離株的研究發(fā)現(xiàn)，每個檢測的菌株中至少存在3種菌毛的一種，很多菌株發(fā)現(xiàn)有2種菌毛存在，研究同時發(fā)現(xiàn)46％的菌株存在PI-2a和PI-2b的組合。因此，預(yù)測菌毛蛋白疫苗可能會100％對抗B群鏈球菌的流行菌株的感染。

5.4 乳房炎多聯(lián)疫苗

由于奶牛乳房炎是由多種病原菌感染引起的，因此，研制多聯(lián)疫苗是當(dāng)前國內(nèi)外學(xué)者研究的焦點。多聯(lián)疫苗比單苗有更多的優(yōu)越性，因此有更大的發(fā)展前途。目前研究最多的是葡萄球菌和鏈球菌的滅活苗。Startvac疫苗（英國，海博萊公司）是一種歐盟批準(zhǔn)使用的多聯(lián)苗。Bradley等［31］對Startvac疫苗進行了臨床效果測試，它們對3 130頭奶牛分成3組進行測試（未免疫組，一次免疫組，接種90d再次免疫組），結(jié)果顯示，各組在發(fā)病率上沒有明顯差異，但免疫組與未免疫組相比能顯著減輕臨床乳房炎的嚴(yán)重程度，而且免疫組的產(chǎn)奶量和質(zhì)量明顯比未免疫組高。在我國，曲小軍等［32］利用毒力較強的金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、大腸桿菌制成奶牛乳房炎多聯(lián)苗，通過實驗發(fā)現(xiàn)，該疫苗對免疫小鼠的保護率達83％。李宏勝等［33］篩選出了毒力及交叉免疫原性強的無乳鏈球菌、停乳鏈球菌和金黃色葡萄球菌3種菌的優(yōu)勢菌株，并研制出了乳牛乳腺炎滅活多聯(lián)疫苗。通過對2萬多頭奶牛的免疫實驗，結(jié)果表明，該滅活多聯(lián)疫苗對乳牛具有安全高效的特點，經(jīng)臀部肌肉或后海穴免疫1次，每次5mL，免疫持續(xù)期達4個月；且后海穴免疫效果優(yōu)于肌肉注射，可使臨床型乳腺炎發(fā)病率降低49.2％～59.86％。

在新型疫苗方面，Yu等［34］重組構(gòu)建GapC1-tIsdBTRAP（GIT）基因，它包含截短的GapC1（停乳鏈球菌）、截短的tIsdB和全長的TRAP（金黃色葡萄球菌）的基因片段。研究人員將它們連接到質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中表達，然后將分離到的基因表達的蛋白制成疫苗免疫小鼠。結(jié)果顯示，GIT能誘導(dǎo)產(chǎn)生體液免疫和細胞免疫。同時，攻毒結(jié)果顯示，免疫GIT可使小鼠產(chǎn)生應(yīng)對金黃色葡萄球菌和停乳鏈球菌的協(xié)同免疫保護。Xu等［35］構(gòu)建了Sip-ClfA的重組蛋白，Sip是一種無乳鏈球菌表面蛋白，ClfA是金黃色葡萄球菌的粘附因子。研究人員用此重組蛋白加入佐劑制成疫苗，并以小鼠為模型進行評估。研究發(fā)現(xiàn)，重組蛋白疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生的IgG滴度顯著高于滅活苗，此外，對免疫小鼠攻毒24h后，接種重組蛋白疫苗的小鼠乳腺的細菌數(shù)量是接種滅活苗的1/5（P＜0.01）。實驗結(jié)果初步顯示，Sip-ClfA重組蛋白苗是一種防治奶牛乳房炎的候選疫苗。

6 前景及展望

6.1 治療藥物

由于抗生素的長期大量使用，使得很多細菌產(chǎn)生耐藥性，給乳房炎的治療提出難題。因此，應(yīng)用中藥治療乳房炎成為研究的熱點，雖然中藥治療奶牛乳房炎確實有效，但目前的研究力度還遠遠不夠，未來應(yīng)在現(xiàn)有研究的基礎(chǔ)上，以中獸醫(yī)理論為依據(jù)，充分利用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)展的科學(xué)成果，建立高效、微量、準(zhǔn)確的中藥有效成分的分離方法，開展中獸藥藥代動力學(xué)和方劑配伍理論的研究，以科學(xué)的數(shù)據(jù)闡明中藥的藥效、作用機制和方劑配伍規(guī)律，科學(xué)的選藥組方，研制新劑型，創(chuàng)造新工藝，開發(fā)出優(yōu)質(zhì)、高效、安全和穩(wěn)定的中藥制劑。中藥作為純天然綠色產(chǎn)品，日益受到人們的重視，雖尚有許多困難，但隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和對中藥的深入研究，中藥必將在防治奶牛乳房炎上發(fā)揮重要作用。

6.2 疫苗研制

奶牛乳房炎疫苗的研制和開發(fā)對奶牛乳房炎的防治有著廣闊的應(yīng)用前景。在使用安全的前提下，盡可能地提高抗原的免疫原性以及乳腺的反應(yīng)強度，利用分子生物學(xué)技術(shù)提取有效抗原成分，進一步改進疫苗的設(shè)計程序，設(shè)計搭配良好的多聯(lián)苗，選擇毒力和血清交叉性強的優(yōu)勢血清型菌株，篩選具有明顯增強效果的免疫佐劑，研制出能抵抗更多血清型病原感染的多聯(lián)疫苗。

6.3 防治

對奶牛乳房炎應(yīng)采取綜合預(yù)防，以防為主，防治結(jié)合。開展以高效疫苗預(yù)防為主、藥物治療為輔的綜合防治措施。今后乳房炎的防治手段應(yīng)朝著操作方便、療效顯著、特異性強、無毒無殘留的方向發(fā)展。

［1］Olde R R，Barkemah W，Veenstra S，et al.Prevalence of contagious mastitis pathogens in bulk tank milk in Prince Edward Island［J］.Can Vet J，2006，47（6）：567-572.

［2］Denis M，Wedlock D N，Lacy-Hulbert S J，et al.Vaccines against bovine mastitis in the New Zealand context：What is the best way forward［J］.New Zealand Veterinary Journal，2009，57（3）：132-140.

［3］LamTJgM，van den Borne BH P，Jansen J，et al.Improvingbovine udderhealth：A national mastitis control program in the Netherlands［J］.Journal ofDairyScience，2013，96（2）：1301-1311.

［4］楊瀾，張國生，黃纓，等.不同乳頭藥浴液的應(yīng)用效果對比試驗［J］.中國乳業(yè)，2015（3）：53-56.

［5］Phuektes P，Mansell P D，Browningg F.Multiplex polymerase chain reaction assay for simultaneous detection of staphylococcus aureus and streptococcal causes of bovine mastitis［J］.Journal of Dairy Science，2001，84（5）：1140-1148.

［6］聶培，易馳喆，賀婷，等.奶牛乳房炎金黃色葡萄球菌和大腸桿菌二重PCR檢測方法的建立［J］.廣西畜牧獸醫(yī)，2013，29（1）：11-15.

［7］陳亞明，杜玉蘭，聶培，等.奶牛乳房炎3種主要致病菌三重PCR檢測方法的建立［J］.中國動物檢疫，2014，31（7）：82-85.

［8］李棟梁，寇亞楠，宋月，等.利用16SrDNA檢測奶牛乳房炎5種病原菌PCR方法的建立及應(yīng)用［J］.河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014（6）：132-136.

［9］賀婷.奶牛鏈球菌性乳房炎可視化LAMP檢測方法的建立及應(yīng)用［D］.南寧：廣西大學(xué)，2014.

［10］王娟.致奶牛乳房炎大腸桿菌快速診斷及藥敏試驗方法的改進［D］.揚州：揚州大學(xué)，2014.

［11］富艷玲，劉愛玲，李旭東.奶牛乳房炎防治技術(shù)研究進展［J］.中國獸藥雜志，2010（7）：51-54.

［12］楊雪峰，范國英，歐陽五慶.復(fù)方阿莫西林納米乳治療奶牛臨床型乳房炎的效果觀察［J］.畜牧與獸醫(yī)，2012，44（3）：71-73.

［13］馮言言，王海挺，鄭莉，等.硫酸頭孢喹肟乳房注入劑治療奶牛乳房炎的臨床療效觀察［J］.中國奶牛，2014（5）：28-30.

［14］馮言言，陳瑞，鄭莉，等.鹽酸頭孢噻呋乳房注入劑治療奶牛干乳期乳房炎的臨床療效觀察［J］.中國奶牛，2014（16）：20-23.

［15］王尚榮.鐵母散合劑對雜交奶牛乳房炎的預(yù)防和治療效果觀察［J］.邵陽學(xué)院學(xué)報：自然科學(xué)版，2014（1）：54-59.

［16］李秀麗.公英車前薄荷蘆根湯治療奶牛乳房炎［J］.中國獸醫(yī)雜志，2014（10）：94.

［17］唐靜靜，何潤霞，王魯.金英黃歸注射液制備檢測及其對奶牛乳房炎的療效［J］.中國獸醫(yī)雜志，2014（9）：78-81.

［18］馬樹東，馮麗榮，王梅.中、西獸藥配合治療奶牛臨床型乳房炎的效果［J］.中國奶牛，2000（5）：39-40.

［19］李文輝，武嘉平.乳源康+鹽酸左旋咪唑?qū)δ膛Ｈ榉垦椎闹委熜Ч跩］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2014（22）：100-101.

［20］白文順，孫偉，李書軍.愛乳寶IgY抗體治療奶牛乳房炎臨床試驗報告［J］.中國奶牛，2014（Z1）：57-59.

［21］王方正，田中杰，田文儒.噬菌體內(nèi)溶素對奶牛乳房炎致病菌的溶解作用［J］.動物醫(yī)學(xué)進展，2015（4）：113-116.

［22］易明梅，馮華，朱建國，等.生物制劑在奶牛乳房炎防治中的應(yīng)用［J］.中國奶牛，2007（10）：45-47.

［23］Scali F，Camussone C，Calvinho L F，et al.Which are important targets in development of S.aureus mastitis vaccine？［J］.Research in VeterinaryScience，2015：88-99.

［24］Leitner G，Lubashevsky E，Trainin Z.Staphylococcus aureus vaccine against mastitis in dairy cows，composition and evaluation of its immunogenicity in a mouse model［J］.Vet Immunol Immunopathol，2003，93（3-4）：159-167.

［25］史冬艷.奶牛乳房炎金黃色葡萄球菌耐藥性及以黏附素為靶位的疫苗的基礎(chǔ)研究［D］.呼和浩特：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

［26］Leitner G，LubashevskyE，Glickman A，et al.Development ofa Staphylococcus aureus vaccine against mastitis in dairy cows［J］.Veterinary Immunologyand Immunopathology，2003，93（1-2）：31-38.

［27］Shkreta L，Talbot BG，Diarra MS，et al.Immune responses toa DNA/protein vaccination strategy against Staphylococcus aureus induced mastitis in dairycows［J］.Vaccine，2004，23（1）：114-126.

［28］Wilson D J，González R N.Vaccination strategies for reducing clinicalseverityofcoliformmastitis［J］.VeterinaryClinicsofNorthAmerica：Food Animal Practice，2003，19（1）：187-197.

［29］Fontaine M C，Perez-Casal J，Song X，et al.Immunisation of dairy cattle with recombinant Streptococcus uberis GapC or a chimeric CAMP antigen confers protection against heterologous bacterial challenge［J］.Vaccine，2002，20（17-18）：2278-2286.

［30］Margarit I，Rinaudo C D，Galeotti C L，et al.Preventing bacterial infections with pilus-based vaccines：the group B streptococcus paradigm［J］.J Infect Dis，2009，199（1）：108-115.

［31］BradleyAJ，Breen J E，Payne B，et al.An investigation ofthe efficacy of a polyvalent mastitis vaccine using different vaccination regimens under field conditions in the United Kingdom［J］.Journal of Dairy Science，2015，98（3）：1706-1720.

［32］曲曉軍，孫建華，夏海華，等.新型奶牛乳房炎多聯(lián)苗的研制及免疫力試驗［J］.生物技術(shù)，2008，18（4）：89-90.

［33］李宏勝，郁杰，李新圃，等.乳牛乳腺炎多聯(lián)疫苗的研制及其臨床應(yīng)用效果［J］.中國獸醫(yī)科學(xué)，2007，37（4）：363-368.

［34］YuL，F(xiàn)anZ，MaJ，etal.Cross-protectiveeffectofanovelmulti-antigenchimeric vaccine against Streptococcus and Staphylococcus aureus infection in mice［J］.J Med Microbiol，2014，63（Pt 12）：1732-1740.

［35］Xuh，Hu C，Gong R，et al.Evaluation of a novel chimeric B cell epitope-based vaccine against mastitis induced byeither Streptococcus agalactiae or Staphylococcus aureus in mice［J］.Clinical and Vaccine Immunology，2011，18（6）：893-900.

Progress in the Key Technologies for Controlling Bovine Mastitis

Liu Longhai，Li Xinpu，Li Hongsheng，et al
（KeyLaboratoryofNewAnimal DrugProject ofGansu Province，KeyLaboratoryofVeterinaryPharmaceutical Discovery，MinistryofAgriculture，Lanzhou Institute ofAnimal Husbandryand Pharmaceutical Sciences，Chinese AcademyofAgricultural Sciences，Lanzhou 730050，China）

Bovine mastitis is one ofthe major complicated diseases that impacts，and can cause severely economical losses to cow breeding.Current research shows that comprehensive control is the best way to control the disease.In this article，we summarized the research in incidence，the causes，regularities of the disease developing and the hazards caused by dairy mastitis，the major pathogenic bacteria and theirs regional distribution pattern，the diagnostic methods，drug treatments and bovine mastitis vaccine.In addition，we prospect the comprehensive control of bovine mastitis to provide experiences and references for further study in prevention and control ofdairymastitis.

bovine mastitis；comprehensive control；pathogenic bacteria；diagnosis and treatment；vaccine

S823.7

A

2095-3887（2015）05-0056-06

10.3969/j.issn.2095-3887.2015.05.016

2015-07-10

“十二五”國家科技支撐計劃（2012BAD12B03）；甘肅省科技支撐計劃（144NKCA240）；甘肅省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新項目（GNCX-2013-59）；中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院創(chuàng)新工程項目（奶牛疾病研究團隊）

劉龍海（1990-），男，碩士研究生。

李宏勝（1964-），男，研究員，博士。研究方向：主要從事奶牛乳房炎免疫及預(yù)防研究。