ABO血型鑒定中2例混合視野結(jié)果分析

靖春旭 趙菲

ABO血型鑒定中2例混合視野結(jié)果分析

靖春旭 趙菲

目的探討ABO血型正反定型鑒定困難的血型鑒定及結(jié)果判斷與分析。方法采用血型血清學(xué)方法對(duì)標(biāo)本2例進(jìn)行血型鑒定, 采用PCR-SSP法進(jìn)行基因分型。結(jié)果案例1血清學(xué)ABO血型為A3B3亞型, 其基因分型結(jié)果為A102, B101, O01。案例2血清學(xué)ABO血型為A3亞型, 其基因分型結(jié)果為A101型。結(jié)論某些生理和病理原因會(huì)造成ABO正反定型不符, 在ABO血型檢測(cè)時(shí)應(yīng)注意結(jié)合臨床診斷進(jìn)行區(qū)分, 正確鑒定ABO血型。

ABO血型；亞型；混合視野

ABO血型系統(tǒng)是1900年由Karl Landsteiner 首先發(fā)現(xiàn)的,其A﹑B 抗原的免疫原性是所有人類血型系統(tǒng)抗原中免疫原性最強(qiáng)的, 血清中規(guī)律的存在抗-A或(和)抗-B抗體, ABO血型的正確定型對(duì)輸血至關(guān)重要。由于生理或病理原因引起ABO抗原或抗體減弱造成的ABO正反定型不符, 常常會(huì)干擾ABO血型的正確定型, 本文以1例嵌合型和1例白血病導(dǎo)致的混合視野外觀為研究對(duì)象, 對(duì)混合視野現(xiàn)象進(jìn)行比較分析。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 案例1為本中心檢驗(yàn)科送檢獻(xiàn)血者ABO正反不符標(biāo)本；案例2為外院送檢患者標(biāo)本, 懷疑急性白血病,無輸血史, ABO正反不符。

1.2 試劑與儀器 單克隆抗-A﹑抗-B, 抗-A1﹑抗-AB,抗-H, 抗-D﹑抗-C﹑抗-c﹑抗-E﹑抗-e, ABO試劑紅細(xì)胞, 譜細(xì)胞均為上海血液生物醫(yī)藥有限公司產(chǎn)品。人源抗-A﹑抗-B(效價(jià)均≥64), 成人ABO細(xì)胞均為實(shí)驗(yàn)室自制試劑。所有試劑均經(jīng)過批批檢合格, 并在有效期內(nèi)使用。KA-2200離心機(jī)(日本久保田), 毛細(xì)管血液離心機(jī)TG12MX(湖南賽特湘儀), 所有儀器均在校準(zhǔn)有效期內(nèi)使用。

1.3 血清學(xué)檢測(cè)方法 均采用經(jīng)典試管法進(jìn)行檢測(cè)［1］。

1.3.1 正反定型試驗(yàn) 按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作。先將受檢者紅細(xì)胞洗滌3次, 配制成3%～5%紅細(xì)胞懸液備用。正定型：取2支干凈試管, 分別標(biāo)為抗-A﹑抗-B, 分別滴加1滴抗血清試劑, 每管滴加1滴3%～5%受檢者紅細(xì)胞懸液；反定型：取4支干凈試管, 分別標(biāo)為Ac﹑Bc﹑Oc﹑自身, 每孔滴加2滴受檢者血清, 再分別滴加1滴3%～5%試劑紅細(xì)胞懸液和受檢者紅細(xì)胞懸液, 混勻, 3400 r/min離心15 s, 觀察結(jié)果。

1.3.2 H抗原檢測(cè) 1滴抗-H試劑加1滴3%～5%受檢者紅細(xì)胞懸液, 3400 r/min離心15 s, 觀察結(jié)果。同時(shí)取新鮮成人B型紅細(xì)胞和O型紅細(xì)胞做強(qiáng)陽性和弱陽性對(duì)照, 根據(jù)各血型紅細(xì)胞H抗原強(qiáng)度由強(qiáng)到弱依次為O型＞A2型＞B型＞A2B型＞A1型＞A1B型的特點(diǎn), 判斷被檢者紅細(xì)胞H抗原是否增強(qiáng)。

1.3.3 毛細(xì)管離心分離試驗(yàn) 使用毛細(xì)管取壓積紅細(xì)胞,封住遠(yuǎn)心端一側(cè), 配平放入毛細(xì)管離心機(jī), 10000 r/min離心5 min, 用砂輪截取毛細(xì)管近心端約1 cm的紅細(xì)胞作為新鮮細(xì)胞, 取毛細(xì)管遠(yuǎn)心端約1 cm的紅細(xì)胞作為陳舊細(xì)胞, 紅細(xì)胞三洗后配制成3%～5%的紅細(xì)胞懸液進(jìn)行試驗(yàn)。

1.3.4 Rh分型檢測(cè) 取5支試管分別標(biāo)識(shí)為抗-D﹑抗-C﹑抗-c﹑抗-E﹑抗-e, 每管加入1滴相應(yīng)的Rh分型試劑, 再各加1滴被檢者3%～5%紅細(xì)胞懸液, 3400 r/min離心15 s,觀察結(jié)果。

1.3.5 混合視野標(biāo)準(zhǔn)凝集比例建立試驗(yàn) 分別取3～5例檢測(cè)結(jié)果為A型和B型的混合壓積紅細(xì)胞1 ml, 洗滌3次, 按照95%A細(xì)胞+5%B細(xì)胞, 90%A細(xì)胞+10%B細(xì)胞, 80%A細(xì)胞+20%B細(xì)胞…10%A細(xì)胞+90%B細(xì)胞, 5%A細(xì)胞+95%B細(xì)胞的比例配制成11份不同比例的3%紅細(xì)胞懸液；取22支試管, 分別標(biāo)為1-A﹑1-B…11-A﹑11-B, 加入相應(yīng)抗-A或抗-B試劑50 μl/孔, 再分別加入50 μl紅細(xì)胞懸液,混勻, 3400 r/min離心15 s, 反復(fù)離心幾次, 觀察結(jié)果。將病例1和病例2的紅細(xì)胞配制成3%紅細(xì)胞懸液, 同樣條件下檢測(cè), 與標(biāo)準(zhǔn)管結(jié)果進(jìn)行比較, 得出其凝集細(xì)胞的大致比例。

1.4 ABO基因測(cè)序 ABO基因測(cè)序由試劑公司完成。

2 結(jié)果

2.1 案例1試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 ABO正反定型檢測(cè)結(jié)果 抗-A﹑抗-B結(jié)果為70% mf (表示混合視野)﹑80% mf, 其他為陰性。

2.1.2 人源試劑及抗-H測(cè)結(jié)果為 人源抗-A﹑抗-B結(jié)果為60% mf﹑70% mf；抗-H結(jié)果為2+。

2.1.3 Rh分型檢測(cè)結(jié)果 抗-D﹑抗-c﹑抗-E結(jié)果為4+﹑3+﹑2+, 抗-C﹑抗-e結(jié)果為50% mf﹑40% mf。

2.1.4 毛細(xì)管離心分離檢測(cè)結(jié)果 近心端和遠(yuǎn)心端抗-A﹑抗-B結(jié)果均為60% mf﹑70% mf。

2.1.5 基因分型及克隆檢測(cè)結(jié)果 A102, B101, O01。

2.2 案例2試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 ABO正反定型檢測(cè)結(jié)果 抗-A結(jié)果為40% mf, B細(xì)胞4+, 其他陰性。

2.2.2 人源試劑及抗-H檢測(cè)結(jié)果 人源抗-A結(jié)果為40% mf﹑人源抗-B結(jié)果為陰性；抗-H結(jié)果為4+。

2.2.3 毛細(xì)管離心分離檢測(cè)結(jié)果 近心端和遠(yuǎn)心端抗-A結(jié)果分別為5% mf﹑50% mf；近心端和遠(yuǎn)心端抗-B結(jié)果均為陰性。

2.2.4 基因分型及克隆檢測(cè)結(jié)果 A101。

3 討論

案例1的血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果符合A3B3的反應(yīng)格局, 但從人群中A﹑B亞型的分布頻率來看, 胡應(yīng)明等［2］和許志遠(yuǎn)等［3］報(bào)道無償獻(xiàn)血者中A3亞型的比例約為1/100 000, B3亞型的比例約為2/100 000, 據(jù)此推算, 真正A3B3亞型的比例約為1/5 000 000 000, 極為罕見, 如果血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)A3B3的表現(xiàn), 應(yīng)該首先考慮排除其它原因造成的混合視野現(xiàn)象, 如嵌合現(xiàn)象﹑疾病影響(案例1為無償獻(xiàn)血者標(biāo)本, 通過健康征詢已排除輸血史﹑移植史等)等。案例2患者無近期輸血史,排除了輸錯(cuò)血造成的混合視野現(xiàn)象, 進(jìn)行臨床追溯得知其為急性髓系白血病, 可判斷為白血病引起的抗原減弱。對(duì)于這兩例標(biāo)本, 可以考慮采用毛細(xì)管離心分離方法, 檢測(cè)比較新鮮和陳舊紅細(xì)胞表面的抗原存在的差異來進(jìn)行分析, 案例1的毛細(xì)管離心結(jié)果顯示新鮮和陳舊紅細(xì)胞表面抗原一致, 案例2毛細(xì)管離心結(jié)果顯示新鮮紅細(xì)胞表面抗原表達(dá)明顯弱于陳舊紅細(xì)胞；而生理原因形成的混合視野其新鮮和陳舊紅細(xì)胞表面抗原表達(dá)應(yīng)該無差異, 疾病狀態(tài)(血液系統(tǒng)疾病)造成的混合視野可見新鮮和陳舊紅細(xì)胞表面抗原表達(dá)存在明顯差異。案例2新鮮細(xì)胞抗原比陳舊細(xì)胞明顯減弱, 這可能是由于白血病引起的A或B抗原表達(dá)缺失是由于A或B基因產(chǎn)物欠缺或者不足所致, 而不是由于酶的作用底物缺乏所致,故其陳舊細(xì)胞的抗原性強(qiáng)于新鮮細(xì)胞［4］。

案例1為嵌合體, 嵌合現(xiàn)象是同種抗體減弱或缺少的不常見原因。真正的嵌合現(xiàn)象很少發(fā)現(xiàn), 大半見于同卵雙胎的人體, 有兩種種群的紅細(xì)胞終生存在與在體內(nèi)。這兩種組群的紅細(xì)胞彼此都認(rèn)為身體是自己的, 所以這些人不會(huì)產(chǎn)生抗-A或抗-B抗體, 而在其血清內(nèi)沒有可檢出的同種抗體。若嵌合現(xiàn)象見于非同卵雙胎的人體, 則是雙受精的情況所引起, 而稱之為嵌合體［4］。

嵌合體通過的分子生物學(xué)檢測(cè)可以確認(rèn)［5,6］, 由于案例1獻(xiàn)血者未聯(lián)系到其家人, 未能進(jìn)行家系調(diào)查。其Rh分型檢測(cè)抗-C﹑抗-e出現(xiàn)了混合視野也從另一個(gè)側(cè)面印證了嵌合型的懷疑。這例標(biāo)本也為我們對(duì)于混合視野的理解開闊了思路。嵌合體在血清學(xué)檢測(cè)不易與亞型的混合視野區(qū)分, 臨床工作中可能漏檢部分嵌合體, 需要對(duì)亞型表型的患者進(jìn)行分子生物學(xué)檢測(cè)以便確認(rèn)。

［1］ 劉達(dá)莊.免疫血液學(xué).上海：上海科技出版社, 2007:41-47.

［2］ 胡應(yīng)明, 何子毅, 陳金鳳, 等.東莞市無償獻(xiàn)血者ABO亞型和弱D型分布調(diào)查.臨床血液學(xué)雜志, 2014, 27(6):475-477.

［3］ 許志遠(yuǎn), 王濤.北京地區(qū)獻(xiàn)血人群ABO亞型研究.北京醫(yī)學(xué), 2013, 35(8):712-714.

［4］ 杰夫·丹尼爾.人類血型.北京：科學(xué)出版社, 2007:57-58.

［5］陳愛蓉, 黃毅.罕見開米拉A3B3血型的分子生物學(xué)研究.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué), 2012, 30(1):15-18.

［6］喻瓊, 鄭巖.嵌合體血型的研究進(jìn)展.中國輸血雜志, 2010, 23(2):146-148.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.22.133

2015-08-19］

南陽市2014年科技攻關(guān)項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：2014GG029)

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