堿提酸沉法提取虎杖中白藜蘆醇的研究

尚天翠

摘 ?要：采用堿提酸沉法從虎杖中提取白藜蘆醇，用紫外分光光度法測(cè)定其含量，并研究了不同pH值、溫度、提取方式等各種因素對(duì)其提取率的影響。通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定了最佳的提取工藝條件為：以pH值為10的氫氧化鈉為提取劑，在60℃下磁力攪拌1h，濾液在pH值為3時(shí)沉淀白藜蘆醇，離心分離。

關(guān)鍵詞：白藜蘆醇;虎杖;堿提酸沉法

中圖分類號(hào) S567 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A ?文章編號(hào) 1007-7731（2015）01-25-02

虎杖（Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.）為蓼科蓼屬多年生草本植物，其干燥的莖和根具有活血化淤、祛風(fēng)利濕、清熱解毒的作用[1-2]。虎杖含有多種有效成分，其中白藜蘆醇是從虎杖的干燥根莖中提取出來(lái)的一種芪類化合物。研究表明，白藜蘆醇具有抗菌、抗癌、抗氧化、降血脂等多種生物學(xué)活性和藥理作用[3-7]，因此在醫(yī)藥上得到了廣泛應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)采用堿提酸沉法對(duì)白藜蘆醇的提取條件進(jìn)行了優(yōu)化，旨在為白藜蘆醇工業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器 78-1型磁力加熱攪拌器（杭州儀表電機(jī)廠）;PHS-3D型pH計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）;FW-80高速萬(wàn)能粉碎機(jī)（武義縣屹立工具有限公司）;UV-4501S紫外分光光度計(jì)（天津市港東科技發(fā)展公司）;TB-214電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）;電熱恒溫水浴鍋（國(guó)華電器有限公司）;HC-3018R離心機(jī)（北京中科儀器有限公司）。

1.2 材料及試劑 虎杖（購(gòu)自安徽省毫州市雙華中藥飲片廠，產(chǎn)地山西）;白藜蘆醇對(duì)照品（購(gòu)自陜西賽德生物有限公司）;氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸氫鈉、碳酸鈉、乙醇、鹽酸、三氯化鐵、鐵氰化鉀。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 堿提取白藜蘆醇的操作方法 精確稱取40g預(yù)先干燥、粉碎的虎杖粗粉，加入NaOH溶液500mL，浸泡24h后，在不同pH值、不同溫度、不同提取方式下提取白藜蘆醇。然后保溫過(guò)濾，在濾液中加入1mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)濾液pH值，待充分沉淀后離心分離，真空干燥。

1.3.2 定性檢測(cè) 按上述提取方法所提的白藜蘆醇粗品取適量，用濃度為60%的乙醇萃取，過(guò)濾去渣。萃取液取2組，一組加FeCL3在可見(jiàn)光下顯色，另一組加K3Fe（CN）6在紫外光下顯色。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精確稱取白藜蘆醇對(duì)照品5份，5份質(zhì)量分別為2mg、4mg、6mg、8mg、10mg。分別將各份置于10mL容量瓶中，每個(gè)容量瓶中加入甲醇定容到10mL，搖勻，則得濃度分別為0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL、1.0mg/mL的白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)溶液。用紫外分光光度計(jì)在306nm處測(cè)定各標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光值[8]，以吸光值y為縱坐標(biāo)，濃度x為橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，則白藜蘆醇的直線方程為：y=0.0596x+0.0241（R2=0.998），其質(zhì)量濃度在0～1.0mg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其濃度，得出提取率。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同pH值對(duì)白藜蘆醇提取的影響 精確稱取40g預(yù)先干燥、粉碎的虎杖粗粉6份，分別在pH值為8、9、10、11、12、13時(shí)提取虎杖中白藜蘆醇，結(jié)果如圖1所示。由圖1可知，當(dāng)pH值為10時(shí)，白藜蘆醇提取率最高。

圖1 不同pH值對(duì)白藜蘆醇提取的影響

2.2 不同提取溫度對(duì)白藜蘆醇提取影響 精確稱取40g預(yù)先干燥、粉碎的虎杖粗粉5份，分別在30、40、50、60、70℃下提取虎杖中白藜蘆醇，結(jié)果如圖2所示。由圖2可知，當(dāng)提取溫度為50℃時(shí)，白藜蘆醇提取率最高。

圖2 不同提取溫度對(duì)白藜蘆醇的影響

2.3 不同提取方式對(duì)白藜蘆醇提取的影響 精確稱取40g預(yù)先干燥、粉碎的虎杖粗粉3份，分別在恒溫水浴靜置、恒穩(wěn)磁力攪拌下提取虎杖中白藜蘆醇，結(jié)果如表1所示。由表1可知，采用恒溫磁力攪拌的方式提取白藜蘆醇的效果明顯優(yōu)于采用恒溫水浴靜置的方式提取白藜蘆醇。這是由于磁力攪拌能充分破碎細(xì)胞，使細(xì)胞內(nèi)組分更易滲透到溶液中，進(jìn)而提高了提取率，因此采用恒溫磁力攪拌提取白藜蘆醇。

表1 不同提取方式對(duì)白藜蘆醇提取的影響

[提取方式＼&吸光值A(chǔ)＼&提取率（%）＼&恒溫水浴靜置＼&0.0693＼&0.530＼&恒溫磁力攪拌＼&0.0937＼&0.817＼&]

2.4 酸沉淀過(guò)程對(duì)白藜蘆醇提取的影響 精確稱取40g預(yù)先干燥、粉碎的虎杖粗粉6份，加入pH值為10的NaOH溶液500mL，浸泡24h后在60℃下磁力攪拌1h后，過(guò)濾，濾液冷卻后，用1mol/L的鹽酸將6份濾液的pH值分別調(diào)為2、3、4、5、6、7，待充分沉淀后離心分離，干燥稱量。將干燥的沉淀用甲醇溶解，用紫外分光光度計(jì)測(cè)溶液吸光值如圖3。由圖3可以看出，隨著溶液pH值的增大，提取液的吸光值在減小，當(dāng)pH=3時(shí)，吸光值達(dá)到最大為0.082 5;當(dāng)pH=2時(shí)，吸光值基本不再變化，說(shuō)明在pH=3時(shí)白藜蘆醇即可沉淀完全。

圖3 酸性的強(qiáng)弱對(duì)吸光值的影響

2.5 定性分析 按前述提取方法所提的白藜蘆醇粗品，取適量溶于乙醇，加入不同試劑或者進(jìn)行光照試驗(yàn)，其顏色反應(yīng)結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可以看出，白藜蘆醇與FeCL3在可見(jiàn)光下呈暗綠色，白藜蘆醇與K3Fe（CN）6 在紫外光下呈血紅色。這是因?yàn)榘邹继J醇為多元酚，大多數(shù)酚與FeCL3有特殊的顏色反應(yīng)，顏色的產(chǎn)生是由于形成電離度很大的配合物。

表2 特征顏色反應(yīng)結(jié)果

[作用條件＼&可見(jiàn)光＼&紫外光＼&特征顏色＼&暗黃色＼&紫色熒光＼&作用條件＼&FeCL3+可見(jiàn)光＼&K3Fe（CN）6+紫外光＼&特征顏色＼&暗綠色＼&血紅色＼&]

3 結(jié)論

由本次實(shí)驗(yàn)可知，不同的提取條件對(duì)虎杖白藜蘆醇的提取率不同，白藜蘆醇?jí)A提酸沉的最佳提取條件為：以pH值為10的NaOH溶液為提取溶劑，在磁力攪拌器上加熱至60℃恒速、均勻攪拌1h，濾液用1mol/L的鹽酸調(diào)pH=3，放置沉淀，離心分離，將沉淀烘干為宜。

參考文獻(xiàn)

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