菲牛蛭近20年的研究進展

潘 雪 嚴亞萍 林亞明△

1云南省中醫(yī)醫(yī)院，昆明 6500212云南海瑞迪生物藥業(yè)有限公司，云南保山 678206

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菲牛蛭近20年的研究進展

潘 雪1，2嚴亞萍1林亞明1△

1云南省中醫(yī)醫(yī)院，昆明 6500212云南海瑞迪生物藥業(yè)有限公司，云南保山 678206

菲牛蛭(poecilobdella manillensis)俗稱金邊螞蟥，別名馬尼擬醫(yī)蛭，在動物分類上隸屬于環(huán)節(jié)動物門(annelida)、蛭綱(hirudinea)、無吻蛭目(arhynchobdellida blanchard)、醫(yī)蛭科(hirudinidae whitman)、牛蛭屬(poecilobdella blanchard)，是吸血類水蛭中個體較大的品種，生活在稻田、水溝、江河或池塘里，以吸吮人和脊椎動物(如牛、青蛙等)的血液為生，主要分布于我國華南的廣西、廣東、福建、海南和香港，國外主要分布于菲律賓、印度尼西亞、泰國、越南等[1-3]。云南省于2013年將菲牛蛭收錄到《云南省中藥材標準》中，推動了菲牛蛭藥材的標準化進程[4]。

1 養(yǎng)殖技術(shù)

菲牛蛭喜歡在土壤含鐵量較高、水體呈弱酸性(pH值5.5～7.0)的環(huán)境中生存繁衍，野外多發(fā)現(xiàn)于荒蕪的山塘和山?jīng)_田塊或濕草地中，尤其是在土層深厚、土質(zhì)疏松潮濕、各種水草生長旺盛，并且經(jīng)常有耕牛、人活動、呈土畦式水體相對固定的環(huán)境中多見[5]。汪波等[6]提出在菲牛蛭養(yǎng)殖生產(chǎn)中，種蛭選擇是關(guān)系養(yǎng)殖效益的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，選種主要考慮三個因素：一是產(chǎn)繭多，二是卵繭大，三是卵繭孵化率和幼蛭成活率高，并通過實驗進一步指出體質(zhì)量、年齡、環(huán)境刺激對菲牛蛭繁殖性能有影響。李軍等[7]研究養(yǎng)殖密度、飼料配比和投飼頻率對菲牛蛭成活和生長的影響，結(jié)果表明，從存活率和個體體質(zhì)量增長率兩項指標考慮，人工養(yǎng)殖菲牛蛭，建議養(yǎng)殖密度為50尾/箱，飼料采用Ⅰ號配方(血球蛋白粉75.00 g、復(fù)合維生素預(yù)混合飼料0.10 g、氯化鈉17.53 g、精氨酸0.35 g、水2 000 ml)，投飼頻率為1次/10 d。由此可見菲牛蛭的養(yǎng)殖與地理環(huán)境、溫度、濕度、選種、飼料配制等多種因素有關(guān)，需要相關(guān)部門制訂詳盡的飼養(yǎng)計劃與監(jiān)測程序，方可保證菲牛蛭的產(chǎn)量與質(zhì)量。

2 品種鑒別

張衛(wèi)等[8]通過系統(tǒng)地本草文獻梳理與研究指出，傳統(tǒng)中醫(yī)使用的水蛭是生于水中，個頭較小且能吸食人及牛馬血的水蛭，具有這些特性的水蛭品種有日本醫(yī)蛭、麗醫(yī)蛭、南京牛蛭、菲牛蛭以及湖北牛蛭5個品種，但與2010年版《中國藥典》水蛭項下所規(guī)定的動物品種來源不完全一致，建議《中國藥典》修改并補充水蛭的品種來源，保留原有日本醫(yī)蛭，增補菲牛蛭。如何將菲牛蛭與其它品種區(qū)分開來，對于合理使用菲牛蛭至關(guān)重要。目前，對于菲牛蛭品種的鑒別方法主要有垂直平板十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳法(SDS-PAGE)[9]、基因序列及分子進化分析法[10-12]等。

3 化學(xué)成分與有效成分

苗艷麗等[13-14]對菲牛蛭中的脂肪酸、氨基酸、微量元素成分及含量進行了分析，結(jié)果表明菲牛蛭含有16種脂肪酸、18種氨基酸、8種微量元素，并指出天門冬氨酸、甘氨酸、亮氨酸等在菲牛蛭活血化瘀的功效中起到了十分重要的藥理作用，菲牛蛭的抗癌作用與其含有的微量元素有關(guān)。黃愛民等[15]從廣西菲牛蛭中分離出2種抗凝物質(zhì)，分別為菲牛蛭素A(BDA)和菲牛蛭素B(BDB)，且表明BDA、BDB對凝血酶具有極強的抑制作用。方富永等[16]建立水蛭素的雙水相萃取-凝膠色譜聯(lián)用提取法，進而從菲牛蛭中提取出水蛭素。由此可見，菲牛蛭的化學(xué)成分主要有多種脂肪酸、氨基酸及微量元素等，有效成分主要是水蛭素、菲牛蛭素A、菲牛蛭素B，除此之外菲牛蛭還含有一些其他的生物活性成分，如抗凝多肽[17]、纖維蛋白溶解酶[18]、透明質(zhì)酸酶、血管擴張劑[19]、抗血小板聚集活性成分[20]、抑菌活性成分[21]等。

4 提取工藝

鐘超等[22]以菲牛蛭為原料，通過實驗觀察確定其酶解的最佳反應(yīng)條件為：酶解溫度55 ℃、酶解時間2 h、底物濃度12%、加酶量3%、pH 8.5，并指出在該條件下所制備的抗凝血肽的抗凝血活性比目前市場上大部分類似水蛭肽產(chǎn)品的抗凝血活性提高了40%。方富永等[16，23]實驗證實雙水相萃取-凝膠色譜聯(lián)用提取水蛭素效果較好，還提出乳狀液膜體系萃取水蛭素工藝較簡單，實驗樣品純度及ATU(抗凝血酶活性單位)回收率均較高。關(guān)世俠等[24]實驗表明菲牛蛭具有強大的體內(nèi)外抗凝血、抗血栓活性，但干燥后活性會有部分損失，經(jīng)煮沸后，該活性則幾乎完全喪失。由此可見，當(dāng)采用菲牛蛭入藥，以往的傳統(tǒng)煎煮及服藥方法大大削減了菲牛蛭的藥理作用，因此采取合適的工藝提取出菲牛蛭的活性組分，制備成合適的制劑是今后研究的重點方向。

5 藥理作用及臨床應(yīng)用

5.1 抗血小板聚集與抗凝血作用

李文等[20]通過對7種水蛭抗血小板聚集與抗凝血的實驗研究，表明日本醫(yī)蛭、菲牛蛭、湖北牛蛭在2個方面均有明顯的作用。黃愛民等[25]研究廣西菲牛蛭中提取的2種菲牛蛭素(A、B)在人體外及動物體內(nèi)的抗凝作用，發(fā)現(xiàn)菲牛蛭素A對凝血酶時間(TT)的作用最顯著，菲牛蛭素B則對凝血酶原時間(PT)的作用更強。張彬等[26]研究3種提取方法對菲牛蛭不同處理品的抗凝作用，結(jié)果表明菲牛蛭具有較強的體外抗凝血酶活性，且人工養(yǎng)殖對菲牛蛭的抗凝活性未產(chǎn)生不利影響。李軍等[27]比較菲牛蛭、日本醫(yī)蛭、寬體金線蛭和八目石蛭鹽浸提物的抗凝活性，結(jié)論是4種水蛭中菲牛蛭和日本醫(yī)蛭為吸血類水蛭，其抗凝活性明顯高于非吸血類水蛭(寬體金線蛭和八目石蛭)。

5.2 抑制血栓形成作用

黎淵弘等[28]采用家兔動脈血栓和大白鼠靜脈血栓模型，靜脈注射菲牛蛭提取物，同時用生理鹽水作陰性對照，測定其對動脈及靜脈血栓形成的作用，結(jié)論是菲牛蛭提取物有較強的抗動物血栓形成作用。吳志軍等[29]采用大鼠靜脈血栓模型，研究菲牛蛭制品的抗血栓與溶血栓作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各物種抗血栓作用強度依次為菲牛蛭凍干粉>日本醫(yī)蛭凍干粉>歐洲醫(yī)蛭凍干粉>寬體金線蛭凍干粉。關(guān)世俠等[24]通過動物實驗比較研究寬體金線蛭和菲牛蛭體內(nèi)外的抗凝、抗血栓作用，發(fā)現(xiàn)菲牛蛭與寬體金線蛭的活性成分有很大區(qū)別，且菲牛蛭比目前廣泛應(yīng)用的寬體金線蛭具有更優(yōu)的藥效活性。

5.3 降脂作用

曹斌等[30]研究菲牛蛭對高脂血癥鵪鶉血脂及血液流變學(xué)的影響，獲知菲牛蛭可降低血脂，同時對血液流變學(xué)有改善作用。高脂血癥是脂類代謝紊亂所引起的一類常見疾患，是導(dǎo)致動脈粥樣硬化的物質(zhì)基礎(chǔ)和主要原因，同時也是冠心病、腦卒中的危險因素之一，TG(總膽固醇)、LDL-C(低密度脂蛋白膽固醇)與冠心病、腦卒中的危險性具有一定的協(xié)同作用，因此降低血脂成為治療心腦血管疾病的有效方法之一。大量實驗表明，菲牛蛭可以有效地降低高脂飲食所引起的高脂血癥的血脂，有利于防止動脈粥樣硬化，進而治療心腦血管疾病，可能成為治療心腦血管疾病的一種新藥，且具有極大的潛力。

5.4 纖溶作用

鐘小斌等[18]從廣西菲牛蛭消化液中分離純化出一種纖溶酶，研究其生化性質(zhì)發(fā)現(xiàn)菲牛蛭纖溶機制是直接溶解纖維蛋白。

5.5 抗腫瘤作用

黃紅坤等[31-32]通過動物實驗獲知菲牛蛭提取物與順鉑聯(lián)合使用治療S180荷瘤鼠具有相加作用，同時菲牛蛭提取物可減輕順鉑引起的肝腎毒性，其對6種以上腫瘤細胞的增殖均具有抑制作用，但對正常細胞L-929毒性作用較弱。

5.6 促進血管新生作用

劉言香等[33]通過菲牛蛭素刺激人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)和雞胚絨毛尿囊膜(CAM)血管，發(fā)現(xiàn)菲牛蛭素對血管新生具有促進作用，這可能為缺血性疾病治療提供依據(jù)。

綜上所述，菲牛蛭藥理作用主要有抗血小板聚集、抗凝血、抑制血栓形成、降脂、纖溶、抗腫瘤、促進血管新生等，主要用于治療心腦血管疾病、高脂血癥、腫瘤、缺血性疾病等，除此之外，應(yīng)用活體菲牛蛭吸血法治療皮瓣靜脈瘀血、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎有一定療效，生物療法充分體現(xiàn)了其作用直接、行之有效的鮮明特點，適宜在整形美容外科及相關(guān)學(xué)科中推廣應(yīng)用[34-35]。綜合菲牛蛭的有效成分、藥理作用、作用機制以及分子生物學(xué)相關(guān)資料為進一步開發(fā)利用菲牛蛭奠定了深厚的理論基礎(chǔ)。菲牛蛭作為一種新型藥物出現(xiàn)，為防冶心血管疾病，尤其為高脂血癥患者帶來了曙光。

[1] 楊潼.中國動物志-環(huán)節(jié)動物門-蛭綱[M].北京：科學(xué)出版社，1996：120-122.

[2] 周維官，呂偉萍，丘毅，等.菲牛蛭耗氧量、耗氧率和窒息點的研究[J].中藥材，2014，37(12)：2150-2154.

[3] 周維官，周維海，丘毅，等.菲牛蛭規(guī)范化養(yǎng)殖標準操作規(guī)程(SOP)[J].中藥材，2011，34(9)：1331-1335.

[4] 魏恒，李敏，段紅宇，等.不同試劑處理對菲牛蛭凍干粉抗凝活性的影響研究[J].成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2015，38(1)：37-40.

[5] 馮旭，孔維軍，楊美華，等.菲牛蛭的藥理作用及其機制研究進展[J].中南藥學(xué)，2013，11(10)：750-753.

[6] 汪波，龔元，于翔，等.菲牛蛭繁殖性能的初步研究[J].北京師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2012，48(2)：157-160.

[7] 李軍，于翔，張健，等.密度、飼料配比和投飼頻率對菲牛蛭成活和生長的影響[J].水產(chǎn)科學(xué)，2014，33(10)：658-661.

[8] 張衛(wèi)，張瑞賢，李健，等.中藥水蛭品種考證及資源可持續(xù)利用發(fā)展探討[J].中國中藥雜志，2013，38(6)：914-918.

[9] 汪波，張彬，龔元，等.七種水蛭組織細胞可溶性蛋白SDS-PAGE電泳分析[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，50(16)：3423-3425.

[10]徐云玲，聶晶，肖凌.6種水蛭的COⅠ、12 S rRNA和16 S rRNA基因及分子進化分析[J].生物學(xué)雜志，2013，30(6)：10-13.

[11]徐云玲，聶晶.水蛭及其近緣物種的rDNA-ITS序列分析[J].中藥材，2013，36(6)：874-879.

[12]劉曉帆，劉春生，楊瑤珺，等.基于COI基因的水蛭及其混偽品的DNA條形碼研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2013，36(1)：63-66.

[13]苗艷麗，宋文東.菲牛蛭中脂肪酸和氨基酸的分析[J].福建分析測試，2007，16(2)：49-51.

[14]苗艷麗，方富永，宋文東.中藥菲牛蛭化學(xué)成分的分析[J].中成藥，2007，29(8)：1248，插2，插3.

[15]黃愛民，黎肇炎，廖共山，等.廣西菲牛蛭消化液中抗凝物質(zhì)的分離純化[J].中國生化藥物雜志，2006，27(5)：273-276.

[16]方富永，苗艷麗，蘇舒華，等.雙水相萃取-凝膠色譜聯(lián)用法提取菲牛蛭中的水蛭素[J].中國藥學(xué)雜志，2012，47(7)：489-494.

[17]盧舒凡，李慶國，許淑芹.廣東菲牛蛭中有效抗凝物質(zhì)的分離純化[J].醫(yī)學(xué)研究雜志，2014，43(5)：104-107.

[18]鐘小斌，黎淵弘，周維海，等.廣西菲牛蛭中一種纖溶酶的分離純化[J].中國生化藥物雜志，2010，31(4)：225-227.

[19]張彬，龔元，于翔，等.體重、年齡和應(yīng)激刺激對菲牛蛭繁殖性能的影響[J].四川動物，2012，31(3)：397-401.

[20]李文，廖福龍，殷曉杰，等.七種水蛭抗血小板聚集與抗凝血研究[J].中藥藥理與臨床，1997，13(5)：32-34.

[21]黎淵弘，黎肇炎.我國菲牛蛭的研究概況[J].時珍國醫(yī)國藥，2008，19(11)：2716-2718.

[22]鐘超，吳暉，賴富饒.酶解菲牛蛭制備抗凝血肽的工藝優(yōu)化[J].現(xiàn)代食品科技，2012，28(2)：164-167.

[23]方富永，苗艷麗，劉惠欽，等.以D2 EHPA為流動載體的乳狀液膜萃取菲牛蛭中的水蛭素實驗研究[J].中國中藥雜志，2012，37(20)：3056-3061.

[24]關(guān)世俠，袁中文，周郁斌，等.不同品種水蛭抗凝抗血栓作用的比較[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2012，32(14)：1093-1096.

[25]黃愛民，黎肇炎，廖共山，等.菲牛蛭素體內(nèi)外抗凝實驗研究[J].廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2006，23(1)：30-32.

[26]張彬，汪波，龔元，等.幾種水蛭抗凝血物質(zhì)提取及活性分析[J].中山大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2012，51(4)：92-96.

[27]李軍，于翔，張健，等.4種水蛭粗提物抗凝活性及凍存時間對菲牛蛭抗凝活性影響[J].水產(chǎn)科學(xué)，2014，33(9)：591-593.

[28]黎淵弘，楊洋，黎肇炎.廣西菲牛蛭提取物抗動物血栓形成的作用[J].廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2006，23(6)：901-903.

[29]吳志軍，于立華.菲牛蛭及其制品的抗血栓、溶血栓作用[J].中成藥，2007，29(4)：591-593.

[30]曹斌，周維海，韋錦斌，等.菲牛蛭對實驗性高脂血癥血脂及血液流變學(xué)的影響[J].廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2010，27(2)：198-200.

[31]黃紅坤，王諾，王弋，等.菲牛蛭提取物對順鉑治療S180荷瘤鼠減毒作用的研究[J].中國民族民間醫(yī)藥雜志，2014，23(13)：12-14.

[32]黃紅坤，鄭佳琳，王諾，等.菲牛蛭提取物體外抗腫瘤活性的研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2014，25(12)：2870-2872.

[33]劉言香，黎淵弘，鐘小斌.菲牛蛭素對血管新生作用的研究[J].廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2014，31(1)：55-57.

[34]楊曉楠，殷國前，楊健祥，等.活體水蛭吸血療法臨床應(yīng)用8例[J].中國美容整形外科雜志，2007，18(4)：284-285.

[35]蘇承武，殷國前，徐惟永，等.痛風(fēng)病臨床診治及菲牛蛭生物療法的研究進展[J].蛇志，2014，26(1)：72-75.

10.3969/j.issn.1674-4616.2015.04.019

2015-05-07)

△通信作者，Corresponding author，E-mail：linyaming77@126.com