PTTG mRNA和CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌鑒別診斷中的應(yīng)用

李雅萍

PTTG mRNA和CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌鑒別診斷中的應(yīng)用

李雅萍

目的 探討垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因（PTTG）mRNA和囊性纖維跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子（CFTR）mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌疾病中的變化及臨床意義。方法 選擇慢性胰腺炎患者20例，胰腺癌患者30例；采用實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)檢測兩組組織中PTTG mRNA和CFTR mRNA表達(dá)狀況，比較分析兩標(biāo)志物的變化。結(jié)果 慢性胰腺炎組織中CFTR mRNA的表達(dá)水平明顯高于胰腺癌（P＜0.01），PTTG mRNA在慢性胰腺炎組織中的表達(dá)水平明顯低于胰腺癌（P＜0.01）。PTTG mRNA和CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌組織中的表達(dá)量具有相關(guān)性（r=-0.526、-0.539，P＜0.01）。結(jié)論 檢測PTTG mRNA表達(dá)水平可用于胰腺癌診斷，檢測CFTR mRNA表達(dá)水平可用于慢性胰腺炎診斷，且均具有較強(qiáng)的靈敏性。

垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因 囊性纖維跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子 慢性胰腺炎 胰腺癌

慢性胰腺炎及胰腺癌早期均會有腹痛黃疸等臨床癥狀，二者鑒別有一定難度。囊性纖維跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子（CFTR）是一種與慢性胰腺炎及胰腺癌相關(guān)的蛋白，國外研究發(fā)現(xiàn)，CFTR基因突變及多態(tài)性與慢性胰腺炎密切相關(guān)［1］。垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因（PTTG）是來源于垂體瘤組織中的原癌基因，PTTG的高表達(dá)能促進(jìn)細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化，在腫瘤形成過程中起重要作用［2～4］。本文采用實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（RT-PCR）檢測胰腺癌和慢性胰腺炎組織中PTTG mRNA和CFTR mRNA的表達(dá)水平，探討其相互關(guān)系及臨床意義。

1 臨床資料

1.1 一般資料 回顧性分析2005年9月至2014年9月本院收治的胰腺癌患者手術(shù)切除標(biāo)本30例，男19例，女11例；年齡38～72歲，平均（53±15）歲。均為胰腺導(dǎo)管癌。其中高分化腺癌12例、中分化腺癌7例、低分化腺癌11例。經(jīng)臨床和（或）病理證實(shí)發(fā)生胰腺外轉(zhuǎn)移者20例。另選取同期慢性胰腺炎患者手術(shù)切除標(biāo)本20例，男13例，女7例；年齡35～73歲，平均（50±13）歲。懷疑胰腺癌而行手術(shù)切除的慢性胰腺炎患者16例，癌旁慢性胰腺炎組織者4例。其中伴有發(fā)熱者3例，伴有不同程度黃疸者8例，伴有脂肪肝者8例，合并門靜脈高壓者1例。各組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本項(xiàng)目經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)，所有對象均簽署知情同意書。

1.2 方法 （1）mRNA表達(dá)水平檢測：RT-PCR技術(shù)檢測胰腺癌和慢性胰腺炎組織中PTTG mRNA和CFTR mRNA表達(dá)狀況。（2）儀器、試劑和引物：RNA提取試劑盒由美國Invitrogen公司提供。德國Roche公司light Cycler熒光PCR儀。PCR試劑盒由上海久盛醫(yī)療用品有限公司提供。（3）細(xì)胞分離和總RNA提?。篢rizol法提取組織中總RNA，通過分光光度計(jì)檢測A260/280比值以驗(yàn)證RNA純度。（4）PCR擴(kuò)增：引物設(shè)計(jì)采用Primer5軟件，PTTG引物序列為：正義鏈5'-CAGGCACCCGTGTGGTTGCT-3'，反義鏈 5'-AGGCTGGTGGGGCATCGAAC-3'，產(chǎn)物長度116 bp。CFTR引物序列為：正義鏈5'-CGGAAAAGATGAGGTTCTTCCAG-3'，反義鏈 5'-TCTTGAACTTCTTCTTCTGTCTC-3'，產(chǎn)物長度116bp。內(nèi)參基因?yàn)棣?actin，引物序列為：正義鏈5‘-ACCATGGATGATGATATCGCC-3'，反義鏈5'-GCCTTGCACATGCCGG-3'。反應(yīng)條件：95℃，10min→95℃，30 s→52℃，30 s→72℃，30 s，40個循環(huán)→72℃，10 min→4℃保存。（5）基因序列分析：采用BLAST應(yīng)用軟件及Gen Bank對比分析基因序列同源性。對擴(kuò)增的目的片斷進(jìn)行凝膠電泳，通過紫外光凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行掃描并記錄，用四維成像處理系統(tǒng)測定各組cDNA特異性，RNA表達(dá)量與內(nèi)參基因的比值表示mRNA的相對表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)及Fishers精確概率法檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson 法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 組織PTTG mRNA和CFTR mRNA表達(dá)率比較 CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌組織中的表達(dá)率分別為50.0%（10例）和3.3%（1例）；PTTG mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌組織中的表達(dá)率分別為10.0%（2例）和63.0%（19例）。CFTR mRNA在慢性胰腺炎組織中的表達(dá)率明顯高于胰腺癌（χ2=10.15，P＜0.01），PTTG mRNA在慢性胰腺炎組織中的表達(dá)率明顯低于胰腺癌（χ2=14.01，P＜0.01）。

2.2 組織PTTG mRNA和CFTR mRNA表達(dá)量比較 CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌組織中的表達(dá)量分別為（0.73±0.08）和（0.13±0.02）；PTTG mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌組織中的表達(dá)量分別為（0.17±0.03）和（0.80±0.11）。CFTR mRNA在慢性胰腺炎組織中的表達(dá)量明顯高于胰腺癌（χ2=30.27，P＜0.01），PTTG mRNA在慢性胰腺炎組織中的表達(dá)量明顯低于胰腺癌（χ2=31.57，P＜0.01）。

2.3 相關(guān)性及靈敏度分析 PTTG mRNA和CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌組織中的表達(dá)量均具有相關(guān)性（r=-0.526、-0.539，P＜0.01）。PTTG mRNA和CFTR mRNA鑒別慢性胰腺炎的靈敏度分別為10%和50%，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。PTTG mRNA和CFTR mRNA鑒別胰腺癌的靈敏度分別為63%和3.3%，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

3 討論

PTTG為原癌基因，在垂體腫瘤及其他惡性腫瘤組織中呈高表達(dá)［2～4］。有研究認(rèn)為，PTTG 可通過不同的途徑促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，可能與細(xì)胞轉(zhuǎn)化及調(diào)控腫瘤血管生成等機(jī)制密切相關(guān)［5］。更有研究發(fā)現(xiàn)，PTTG mRNA高表達(dá)者的癌細(xì)胞增殖活性及腫瘤血管生成密度高，易轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)［6，7］。本文結(jié)果顯示，PTTG mRNA在胰腺癌組織中的表達(dá)率及相對表達(dá)量均明顯高于慢性胰腺炎組織（P＜0.01）。

CFTR是分布于胰腺、腸道等部位上皮細(xì)胞膜上的一種氯離子通道，在鹽類轉(zhuǎn)運(yùn)、水分流動和離子濃度調(diào)節(jié)中有重要作用［8～10］。異常 CFTR 表達(dá)可導(dǎo)致上皮細(xì)胞的液體轉(zhuǎn)運(yùn)發(fā)生改變，引起局部組織阻塞和感染［1，11］。本研究結(jié)果顯示，CFTR mRNA在慢性胰腺炎組織中的表達(dá)率和表達(dá)量均高于胰腺癌組織（P＜0.01）。同時(shí)，PTTG mRNA和CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌組織中的表達(dá)量均具有負(fù)相關(guān)性（P＜0.01），提示兩標(biāo)志物與慢性胰腺炎和胰腺癌疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，有助于胰腺癌和慢性胰腺炎疾病的早期鑒別診斷，降低漏檢率。

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Objective To explore the application of PTTG mRNA and CFTR mRNA in the differential diagnosis of chronic pancreatitis and pancreatic cancer. Method 20 cases of patients with chronic pancreatitis and 30 cases of patients with pancreatic cancer were selected. The expression of organize PTTG mRNA and CFTRmRNA in the two groups was detected，real-time reverse transcription-polymerase chain reaction（RT - PCR）technology was applied. The changes of the two markers were comparetively analysed. Results The expression rate of CFTRmRNA in chronic pancreatitis group and PTTGmRNA in pancreatic cancer group was respectively obviously higher（P＜0.01）. The expression quantity of PTTGmRNA and CFTRmRNA in chronic pancreatitis and pancreatic cancer were in the correlation（r=-0.526，-0.539，P＜0.01）. Conclution PTTGmRNA has higher sensitivity in diagnosis of pancreatic cancer，so does CFTRmRNA in diagnosis of chronic pancreatitis. Testing organization PTTGmRNA and CFTRmRNA can be used in the differential diagnosis of chronic pancreatitis and pancreatic cancer disease.

PTTGmRNA CFTRmRNA Chronic pancreatitis Pancreatic cancer

712000 陜西省咸陽市核工業(yè)二一五醫(yī)院消化內(nèi)科