HIV、HBV共感染患者病毒載量和外周T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性研究

鄭立娜 金明珠

浙江省樂清市血站，浙江樂清 325600

流行病學(xué)調(diào)查顯示，乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV） 感染引起的肝炎是肝硬化和原發(fā)性肝癌發(fā)生的主要原因之一[1-2]。 HBV 和人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）存在相同的感染途徑，如毒品途徑傳播、性途徑傳播和母嬰途徑傳播等，且HIV 感染患者的免疫能力較健康人群更為低下，因此在HIV 感染者中HBV 感染率也居高不下[3]。 有研究報道，約50%的HIV 感染者血清中存在HBV 的病毒標(biāo)志物[4]。 在HIV 感染患者中，乙型肝炎的感染率高達(dá)4%～10%[4-5]。 機(jī)體對HBV 的清除需要通過特異性淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫途徑進(jìn)行，然而在HIV 和HBV 共感染的患者中，HIV 破壞了患者體內(nèi)CD4+T 淋巴細(xì)胞的正常生理功能，導(dǎo)致HIV 患者對HBV 的清除能力降低，臨床癥狀也更為嚴(yán)重[6]。 隨著雞尾酒療法的普及，HIV 感染患者的生活質(zhì)量和生存期已顯著升高[7]。 有關(guān)HIV、HBV 共感染患者的治療情況，尤其是感染發(fā)生后病毒載量和免疫學(xué)關(guān)系的研究較為少見，因此對其展開研究具有重要意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011 年1 月～2014 年1 月就診于樂清市血站門診和住院部未經(jīng)高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療的HIV感染患者（單純感染組，1230 例）和HIV、HBV 共感染患者（共感染組，148 例）作為研究對象，共計1378 例，其中男1031 例，女347 例，年齡16～72 歲，平均（54.3±12.6）歲。 單純感染組中男932 例，女298 例，平均年齡為（54.4±11.8）歲；共感染組中男99 例，女49 例，平均年齡為（54.3±13.1）歲。 HIV 感染依據(jù)《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009 年版）》確診，首先對患者血液進(jìn)行HIV 抗體初查確認(rèn)，對陽性患者抽取血樣后送往樂清市CDC 經(jīng)蛋白印跡法確診；HBV 感染依據(jù)《慢性乙型肝炎防治指南（2010 年版）》確診，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測患者血清中的HBsAg，兩次重復(fù)陽性結(jié)果判為HBV 感染陽性。 本研究經(jīng)樂清市血站倫理學(xué)會批準(zhǔn)，所有患者或其家屬均被告知且簽署了知情同意書。 兩組患者性別、年齡等比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05），具有可比性。

1.2 檢測內(nèi)容

1.2.1 HIV-1 抗體檢測 采用上海生工生物公司提供的酶聯(lián)免疫試劑盒對HIV-1 抗體進(jìn)行檢測，陽性者抽取血樣后送往樂清市CDC 經(jīng)蛋白印跡法確診，檢驗步驟嚴(yán)格依據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.2 HBsAg 檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附試劑盒檢測血清中的HBsAg，兩次重復(fù)陽性結(jié)果判為HBV 感染陽性，操作過程依據(jù)說明書進(jìn)行。

1.2.3 T 淋巴細(xì)胞亞群計數(shù) 使用FACS Calibur 流式細(xì)胞儀對研究對象外周靜脈血中的T 淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行計數(shù)，記錄CD3+、CD4+、CD8+T 淋巴細(xì)胞數(shù)量和CD4+/CD8+的比值。 使用試劑和流程均依照FACS Calibur 流式細(xì)胞儀使用說明書進(jìn)行。

1.2.4 病毒載量測定 血清HIV RNA 病毒載量采用RT-PCR 方法測定，使用羅氏公司的全自動核酸分離純化系統(tǒng)及核酸提取試劑盒進(jìn)行，提取病毒總RNA并測定病毒載量，操作嚴(yán)格依據(jù)說明書進(jìn)行。 血清HBV DNA 病毒載量采用熒光定量PCR 監(jiān)測系統(tǒng)（FQD-33B 型）進(jìn)行，操作嚴(yán)格依據(jù)說明書進(jìn)行。

1.2.5 生化指標(biāo)檢測 采用全自動生化分析儀分析患者的天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、總蛋白（TP）、總膽紅素（TBIL）、白蛋白（ALB）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0 軟件分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，非正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用對數(shù)轉(zhuǎn)換后符合正態(tài)分布，組間比較采用獨(dú)立樣本t 檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)分析，以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者生化指標(biāo)和病毒學(xué)指標(biāo)比較

兩組患者ALT、AST、TP、ALB、TBIL 水平和HIV RNA 載量比較，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.01）。見表1。

表1 兩組患者生化指標(biāo)和病毒學(xué)指標(biāo)比較（±s）

表1 兩組患者生化指標(biāo)和病毒學(xué)指標(biāo)比較（±s）

注：ALT：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；AST：天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；TP：總蛋白；ALB：白蛋白；TBIL：總膽紅素；HIV：人類免疫缺陷病毒；HBV：乙型肝炎病毒；“-”：無數(shù)據(jù)

組別 生化指標(biāo)ALT（U/L） AST（U/L） TP（g/L） ALB（g/L） TBIL（μmol/L）病毒學(xué)指標(biāo)（log10 cps/mL）HIV RNA HBV DNA單純感染組（n = 1230）共感染組（n = 148）t 值P 值42.6±64.4 78.3±63.2 6.479＜0.01 40.1±32.5 88.3±82.6 7.034＜0.01 72.3±6.3 71.1±5.4 2.506＜0.01 41.3±5.7 37.1±4.1 10.156＜0.01 13.5±13.4 17.2±18.3 2.384＜0.01 4.8±1.2 6.4±1.1 16.55＜0.01-6.1±1.3

2.2 兩組患者外周T 淋巴細(xì)胞亞群比較

兩組患者CD4+、CD8+、CD3+T 淋巴細(xì)胞亞群計數(shù)和CD4+/CD8+比較，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.01）。見表2。

2.3 HIV、HBV 病毒載量與外周T 淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性

HIV RNA 載量與HBV DNA 載量呈正相關(guān)（r =0.471）；CD4+/CD8+與HBV DNA 載量呈負(fù)相關(guān)（r =-0.412）；CD4+、CD4+/CD8+與HIV RNA 載量呈負(fù)相關(guān)（r=-0.841、-0.583）。 見表3。

3 討論

HIV 和HBV 具有相似的傳播途徑（主要是性傳播、靜脈吸毒傳播）和易感人群，因此HIV 和HBV 共感染現(xiàn)象在我國和全世界范圍內(nèi)都十分普遍，雖然HBV 屬于DNA 病毒而HIV 屬于RNA 逆轉(zhuǎn)錄病毒，但HBV 與HIV 在復(fù)制能力和基因結(jié)構(gòu)上均有相似之處，且HBV 同樣具有感染T 淋巴細(xì)胞的能力[8]。 目前，我國缺乏有關(guān)HIV、HBV 共感染的大規(guī)模調(diào)查，衛(wèi)大英等[9]調(diào)查顯示，HIV、HBV 共感染的主要原因是靜脈注射毒品，約93.6%的靜脈吸毒HIV 患者共感染HBV。有報道指出，HIV、HBV 共感染加速了艾滋病的病情發(fā)展，增加了治療的肝毒性，并降低了患者生存率[10-11]，因此，艾滋病和HIV 感染患者中，共感染其他病毒尤其是HBV 感染情況的調(diào)查對于提高艾滋病和HIV 感染的治療效果具有重要意義。 HIV 的病毒載量對HIV 感染患者的生存率具有顯著影響，然而對HIV、HBV 共感染患者中病毒載量和外周T 淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性研究較少。 在HIV、HBV 共感染患者體內(nèi)，HIV 與HBV 的存在是呈競爭性相互抑制關(guān)系，還是存在一定程度的促進(jìn)作用仍未有統(tǒng)一定論，且共感染患者中病毒載量與患者病情尤其是對肝臟和免疫系統(tǒng)的影響是否與單純HIV 感染患者的情況相同尚需要大量的研究進(jìn)行證實。 王海斌[12]調(diào)查了HIV、HBV、丙型肝炎病毒三重病毒共感染患者中病毒載量與T 淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，HBV 和丙型肝炎病毒的病毒載量與HIV 病毒載量具有相關(guān)性，且HBV 的病毒載量與T 淋巴細(xì)胞亞群呈負(fù)相關(guān)，但HIV 和丙型肝炎病毒的病毒載量與T 淋巴細(xì)胞亞群無相關(guān)性，提示三重感染患者對免疫系統(tǒng)的破壞以HBV 對患者的影響為主，而與HIV 的關(guān)系較小，提示HBV 雖然促進(jìn)HIV 的復(fù)制，但是會抑制其對機(jī)體免疫功能的破壞。 黃海軍等[13]研究肝炎患者（B 型和C 型）病毒載量與T 淋巴細(xì)胞亞群相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，慢性乙型肝炎患者基因型與病毒載量和集體細(xì)胞免疫存在一定相關(guān)性，提示HBV 對于患者的免疫系統(tǒng)具有一定的破壞作用[14-15]。

表2 兩組患者外周T 淋巴細(xì)胞亞群比較（±s）

表2 兩組患者外周T 淋巴細(xì)胞亞群比較（±s）

組別 CD4+（個/μL）CD8+（個/μL）CD3+（個/μL）CD4+/CD8+單純感染組（n=1230）共感染組（n=148）t 值P 值230.5±186.3 130.1±116.3 9.180＜0.01 881.2±665.8 654.2±401.2 5.965＜0.01 1332.5±902.6 1110.5±503.8 4.553＜0.01 0.34±0.26 0.21±0.18 7.856＜0.01

表3 HIV、HBV 病毒載量與外周T 淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性

本研究結(jié)果顯示，1378 例HIV 患者中，HIV、HBV共感染患者148 例，感染率超過10%，單純HIV 感染和共感染患者的年齡和性別分布差異無統(tǒng)計學(xué)意義；HBV、HIV 共感染患者的肝損傷程度顯著高于單純HIV 感染患者，提示不同年齡和性別的患者共同感染HIV 和HBV 的概率相近，但HBV、HIV 共感染患者的肝損傷程度相較于單純HIV 感染患者更為嚴(yán)重。 其原因一方面是由于HBV 對肝細(xì)胞產(chǎn)生了直接的破壞作用，另一方面是HBV 導(dǎo)致抗病毒治療對肝細(xì)胞的損傷增加，因此在HIV 感染患者中應(yīng)進(jìn)行HBV 感染的篩查以確認(rèn)患者是否共感染HBV，對共感染HBV 的患者應(yīng)及時進(jìn)行保肝治療，降低病毒對肝臟的損傷。本研究還顯示，HBV、HIV 共感染患者的HIV 病毒載量顯著高于單純HIV 病毒感染患者，且HIV RNA 載量與HBV DNA 載量呈正相關(guān)（r = 0.471），與王海斌[12]的研究結(jié)果相近，提示HBV 共感染會促進(jìn)HIV 感染的病程，原因可能是HBV 感染對患者的免疫功能造成較大的影響，降低了患者免疫系統(tǒng)對HIV 病毒的抑制作用，且HBx 蛋白的發(fā)現(xiàn)也支持了這一結(jié)論[16]。進(jìn)一步分析共感染患者中HIV、HBV 病毒載量與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，在共感染患者中單純感染組與共感染組的HIV RNA 載量和外周T 淋巴細(xì)胞計數(shù)比較，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.01）；CD4+/CD8+與HBV DNA 載量呈負(fù)相關(guān)（r = -0.412）；CD4+、CD4+/CD8+與HIV RNA 載量呈負(fù)相關(guān)（r = -0.841、-0.583）。 本研究結(jié)果提示HIV、HBV 共感染會增加HIV 感染患者的免疫損傷， 且免疫損傷程度不僅與HBV 的感染程度（即病毒載量）相關(guān)，而且與HIV 的感染程度也有一定的相關(guān)性。 HIV 病毒載量與CD4+、CD4+/CD8+的相關(guān)性較HBV 更為密切，因此筆者推測共感染患者中免疫損傷主要由HIV 引起；HBV 會增加HIV 的病毒載量， 因此其與患者的免疫損傷指標(biāo)有一定的相關(guān)性

綜上所述，HBV 可能存在促進(jìn)HIV 復(fù)制的功能，因此患者的肝損傷和免疫損傷較單純HIV 感染更為嚴(yán)重，在臨床上應(yīng)引起重視。

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