杜仲葉提取物滴丸質(zhì)量控制及穩(wěn)定性考察＊

王柏強，劉 福，江承平，何效平，曾芝蘭

(1. 川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科，四川 南充 637000; 2. 川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，四川 南充 637000)

杜仲葉提取物滴丸是將杜仲葉經(jīng)提取、純化后再利用固體分散技術(shù)制備的滴丸制劑[1]，是《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第11 冊)》收載的杜仲平壓片[2]的改劑型品種，具有服用劑量小、速效、攜帶方便等優(yōu)點，能降血壓、強筋健骨，主要用于高血壓、頭暈?zāi)垦！⒀ニ嵬?、筋骨痿軟等證[3]。為了有效地控制該制劑質(zhì)量，保證臨床療效，本試驗中采用薄層色譜(TLC)法對制劑中的綠原酸進(jìn)行了定性鑒別，同時采用高效液相色譜(HPLC)法對制劑中綠原酸進(jìn)行了含量測定，并對其在室溫和加速條件下的穩(wěn)定性進(jìn)行了考察[4]。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

SPD-10A 型高效液相色譜儀(日本島津公司);SPD-10A 型紫外檢測器(日本島津);溶劑過濾器(大連依利特科學(xué)儀器有限公司);SHZ-D(Ⅲ)型循環(huán)水式真空泵(鞏義市英峪予華儀器廠);TP-114 型電子分析天平(德國賽多利斯股份有限公司);760CRT 型雙光束可見分光光度計(北京普析通用儀器有限公司)。綠原酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為0753 -200111);杜仲葉提取物滴丸(自制，批號分別為050926，050927，050928);乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

取杜仲葉對照藥材1 g，加50%甲醇25 mL，于50 ℃超聲提取1 h，放冷，濾過，濾液作為對照藥材溶液。稱取綠原酸對照品適量，加50%甲醇制成每1 mL 含1 mg 的溶液，作為對照品溶液。取20 粒杜仲葉提取物滴丸研細(xì)，稱取約0.2 g，加50%甲醇5 mL 溶解，作為供試品溶液。照2010 年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB 薄層色譜法試驗，分別吸取供試品溶液及對照藥材溶液各10 μL、對照品溶液5 μL，點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G 薄層板上，以醋酸丁酯-甲酸-水(7 ∶2.5 ∶2.5)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365 nm)下檢視[5]。供試品溶液色譜中，在與對照品及對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的熒光斑點(見圖1)。

2.2 綠原酸含量測定

2.2.1 溶液制備

稱取干燥至恒重的綠原酸對照品約25 mg，精密稱定，置50 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取溶液12.5 mL，置50 mL 棕色容量瓶中，加50%甲醇液稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液，避光低溫保存。取20 粒滴丸，研細(xì)，稱取約40 mg，精密稱定，置25 mL 容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm 微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。取適量不含藥的空白滴丸，加50%甲醇溶解并用0.45 μm 微孔濾膜過濾，即得陰性對照品溶液。

2.2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Hypersic C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈-0.4% 磷酸溶液(13 ∶87);流速:1.0 mL /min;檢測波長:327 nm;柱溫:室溫;進(jìn)樣量:20 μL。在此色譜條件下的色譜圖見圖2?？梢?，陰性對照品溶液不干擾測定，供試品溶液色譜與對照品溶液色譜上保留時間一致的峰可確定為綠原酸峰，保留時間約9 min，理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于2 000。

2.2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密量取對照品溶液0，1，3，5，8，10 mL，置10 mL 容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm 微孔濾膜過濾，各取續(xù)濾液20 μL 注入高效液相色譜儀，重復(fù)3 次，記錄色譜圖，計算平均峰面積。以平均峰面積值(A)對進(jìn)樣質(zhì)量濃度(C)進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A=31 860 C+27 633，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，綠原酸質(zhì)量濃度在1.3 ～130 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液20 μL，連續(xù)測定5次，記錄峰面積值。結(jié)果的RSD 為0.94% ( n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取同一供試品溶液20 μL，于0，2，4，6，8 h 時進(jìn)樣測定峰面積。結(jié)果的RSD 為1.33% ( n=5)，表明供試品溶液在8 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗:取同一批樣品5 份，依法制備供試品溶液，并按擬訂方法測定。結(jié)果平均含量為每丸0.263 mg，RSD 為0.71%(n=5)，表明方法的重復(fù)性良好。

圖1 薄層色譜圖

圖2 高效液相色譜圖

加樣回收試驗:取已知含量的綠原酸滴丸20 粒，研細(xì)，取細(xì)粉約40 mg，精密稱定，置10 mL 容量瓶中，分別精密加入綠原酸對照品溶液6.0，3.2，1.0 mL，按供試品溶液制備方法操作，并量取續(xù)濾液20 μL，依法測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 綠原酸加樣回收試驗結(jié)果(n=9)

2.2.4 樣品含量測定

取3 批杜仲葉提取物滴丸，制備供試液，按擬訂方法測定，按外標(biāo)法計算樣品中綠原酸含量。結(jié)果3 批樣品每丸含綠原酸量分別為0.256，0.260，0.263 mg。

2.3 穩(wěn)定性考察[6 -7]

取模擬上市包裝中試樣品3 批進(jìn)行加速試驗和長期試驗。加速試驗條件為溫度(40 ±2)℃、相對濕度(75 ±5)%(氯化鈉飽和溶液)，放置6 個月，分別于第0，1，2，3，6 個月取樣。長期試驗條件為溫度(25 ±2)℃、相對濕度(60±10)%(亞硝酸鈉飽和溶液)，放置12 個月，分別于第0，3，6，9，12 個月取樣。結(jié)果在加速試驗及長期試驗條件下，滴丸性狀均為棕褐色圓球，無明顯變化，溶散時限及含量見表2?？梢?，制劑中綠原酸含量雖有所下降，但均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。

表2 加速試驗結(jié)果

3 討論

采用薄層色譜法對杜仲葉提取物滴丸中杜仲葉進(jìn)行定性鑒別，在薄層色譜中能檢出綠原酸的特征斑點，斑點分離清晰，專屬性強，重復(fù)性好，可作為杜仲葉提取物滴丸制劑的有效鑒別方法。

采用HPLC 法測定制劑中綠原酸時，比較了不同比例的甲醇-水、甲醇-0.4%磷酸溶液、乙腈-水、乙腈-0.4%磷酸溶液等流動相系統(tǒng)，結(jié)果以乙腈-0.4%磷酸溶液(13 ∶87)為流動相，不僅峰形良好，且保留時間適中，并具有良好的重復(fù)性。

在滴丸穩(wěn)定性試驗中，除對性狀、溶散時限、含量測定進(jìn)行了考察外，還分別進(jìn)行了薄層鑒別、微生物限度等檢查，結(jié)果均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。

[1] 王柏強，劉 福，江承平，等. 正交試驗優(yōu)選杜仲葉滴丸成型工藝[J].中國藥房，2012，23(7):616 -618.

[2] 馬鳳仙，赫錦錦，李 欽.RP-HPLC 測定杜仲平壓片中京尼平苷酸、綠原酸、京尼平苷的含量[J]. 中成藥，2008，30(1):86 -89.

[3] 周厚瓊. 對杜仲葉深度開發(fā)的思考與建議[J]. 中國藥房，1998，9(5):203 -204.

[4] 蘭燕宇，鄭 林，黃 勇，等. 甘菊滴丸的質(zhì)量控制及穩(wěn)定性考察[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19(1):99 -101.

[5] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(一部)[M]. 北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:154.

[6] 張望剛，王 俏，陳國神，等. 鹽酸丙卡特羅舌下滴丸的研制及其穩(wěn)定性考察[J]. 中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2011，28(6):542 -545.

[7] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(二部)[M]:北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄199.