炒炭對荷葉主要化學成分轉(zhuǎn)化機制的研究

吳 鵬， 李慧芬， 張學蘭*， 崔偉亮， 王均秀

（1.山東中醫(yī)藥大學，山東濟南250355；2.山東省食品藥品檢驗研究院，山東濟南250101）

［飲片炮制］

炒炭對荷葉主要化學成分轉(zhuǎn)化機制的研究

吳 鵬1， 李慧芬1， 張學蘭1*， 崔偉亮2， 王均秀1

（1.山東中醫(yī)藥大學，山東濟南250355；2.山東省食品藥品檢驗研究院，山東濟南250101）

目的分析荷葉炒炭后煙霧的主要化學成分。方法采用高效液相-電噴霧離子阱質(zhì)譜 （HPLC-ESI/MSn）技術(shù)分析荷葉炒炭散發(fā)煙霧的甲醇液成分，再采用HPLC技術(shù)分析金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素-3-O-桑布雙糖苷和荷葉堿分別在270℃烘制3 min后升華物的化學成分。結(jié)果在荷葉炒炭散發(fā)的煙霧中檢出5種生物堿，分別為蓮心堿、杏黃罌粟堿、2-羥基-1-甲氧基阿樸啡、原荷葉堿、荷葉堿，在金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素-3-O-桑布雙糖苷的模擬炮制品中均檢出其苷元槲皮素，在荷葉堿炮制時有荷葉堿升華。結(jié)論炒炭可使荷葉中金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素-3-O-桑布雙糖苷含有量降低，而使槲皮素含有量升高。

荷葉；炒炭；煙霧；化學成分；HPLC-ESI/MSn；HPLC

荷葉為睡蓮科植物蓮Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥葉，生物堿和黃酮類成分為其主要活性物質(zhì)［1-4］。其中，生物堿類成分主要有荷葉堿、原荷葉堿、蓮堿等；黃酮類成分主要有金絲桃苷、異槲皮苷等［5-6］。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，荷葉炒炭后，荷葉堿損失殆盡，總生物堿、金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素-3-O-桑布雙糖苷的含有量顯著降低，而槲皮素的含有量顯著升高［7-11］，但在炒炭過程中其主要化學成分的轉(zhuǎn)化機制目前尚不清楚。本實驗采用HPLC-ESI/MSn技術(shù)對荷葉炒炭時散發(fā)的煙霧進行成分分析，然后模擬荷葉炒炭條件，對荷葉堿、金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素-3-O-桑布雙糖苷進行模擬炮制，再采用HPLC技術(shù)，通過對照品比對，分析4種黃酮苷模擬炮制品及荷葉堿模擬炮制升華物的化學成分，為全面了解荷葉炮制前后主要化學成分變化規(guī)律及其轉(zhuǎn)化機制提供科學依據(jù)。

1 儀器和試藥

Agi1ent 1200高效液相色譜儀、Agi1ent LC/ MSD Trap XCT-P1us液相質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Agi1ent公司）；耐高溫橡膠球膽氣體取樣袋 （上海人和分析器材有限公司）；PM PLUS型紅外測溫儀（美國Raytek公司）；KQ-250E型醫(yī)用超聲波清洗器（江蘇昆山市超聲儀器有限公司）。

金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素-3-O-桑布雙糖苷、槲皮素 （自制，純度均大于98%）；荷葉堿對照品 （上海源葉生物科技有限公司，批號20111201，純度大于98%）。甲醇為色譜純 （德國Merck公司）；水為純凈水；其余試劑均為分析純。

荷葉飲片經(jīng)山東中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室李峰教授鑒定為睡蓮科植物蓮Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥葉，再經(jīng)加工而成絲狀片 （山東百味堂中藥飲片有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 荷葉炒炭散發(fā)煙霧的成分分析

2.1.1 供試品溶液的制備 取凈荷葉絲50 g，置于炒鍋內(nèi)，270℃下炒至表面棕褐色，炒制過程中通過手動擠壓氣體取樣袋的橡膠球膽，收集荷葉炒炭時散發(fā)的煙霧。收集滿后，將煙霧通過玻璃管溶解至裝有15 mL甲醇的三角瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.2 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析條件

2.1.2.1 色譜條件 Agi1ent XDB-C18柱（4.6 mm×150 mm，5μm）；流動相為A（甲醇）-B（水），線性梯度洗脫 （0～7 min，5%～12%A；7～22 min，12%～40%A；22～35 min，40%A）；檢測波長270 nm；進樣量2μL；體積流量0.6 m L/min；柱溫35℃。

2.1.2.2 質(zhì)譜條件 ESI/MS正離子模式；ESI離子源；干燥氣體積流量10 L/min；霧化器壓力221 kPa；質(zhì)譜掃描范圍m/z 100～1 000；離子阱質(zhì)譜脫溶劑溫度325℃。

2.1.3 樣品成分分析 精密吸取 “2.1.1”項下供試品溶液2μL，在 “2.1.2”項下條件進行檢測，質(zhì)譜總離子流圖見圖1，結(jié)果見表1。從荷葉炒炭散發(fā)的煙霧中，共鑒別了5種化合物。

圖1 荷葉炒炭散發(fā)煙霧總離子流圖Fig.1 Total ion flow chart of the sm oke of lotus leaves after carbonizing by stir-frying

表1 荷葉炒炭散發(fā)煙霧HPLC-ESI/M Sn數(shù)據(jù)及成分鑒定結(jié)果Tab.1 Resu lt of constituent identification and HPLC-ESI /M Sndata of the smoke of lotus leaves after carbonizing by stir-drying

峰1獲得m/z 611.5［M+H］+的分子離子峰和m/z306.0［M-C18H27NO3］+的碎片離子，根據(jù)文獻 ［12］，推斷為蓮心堿 （1iensinine，C37H4206N2）；峰2獲得m/z 314.1［M+H］+質(zhì)譜信號，根據(jù)文獻［13］，推斷為杏黃罌粟堿（armepavine， C19H23NO3）；峰3獲得m/z 282.0［M+H］+的分子離子峰，并且有251.0［M-NH2CH3］+的碎片離子，推測此結(jié)構(gòu)的氮原子上有甲基取代，根據(jù)文獻［14］，推斷為2-羥基-1-甲氧基阿樸啡（2-hydroxy-1-methoxy-yaporphine，C18H19NO2）；峰4獲得m/z 312.1［M+H］+質(zhì)譜信號，根據(jù)文獻 ［15］，推斷為原荷葉堿（pronuciferine，C19H21NO3）；峰5獲得m/z 296.0［M+H］+的分子離子峰，并且有265.0［M-NH2CH3］+的碎片離子，根據(jù)荷葉堿對照品對照，確定其為荷葉堿（nuciferine，C19H21NO2）。

2.2 荷葉主要化合物模擬炮制品的成分分析

2.2.1 主要化合物模擬炮制品的制備 分別精密稱取金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素-3-O-桑布雙糖苷、荷葉堿對照品適量，置于4個帶蓋坩堝中，270℃下烘制3 min，取出，放涼，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 分別精密稱取金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素-3-O-桑布雙糖苷模擬炮制品及荷葉堿模擬炮制后坩堝蓋上的升華物適量，加甲醇5 mL溶解，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 混合對照品溶液的制備 分別精密稱取金絲桃苷、槲皮素、槲皮素-3-O-桑布雙糖苷、異槲皮苷、荷葉堿對照品適量，置同一10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，即得。

2.2.4 色譜條件 Kromasi1C18色譜柱（200 mm× 4.6 mm，5μm）；流動相為甲醇（A）-0.2%磷酸水溶液 （B），線性梯度洗脫 （0～7 min，5%～12%A，體積流量1 mL/min；7～22 min，12%～40%A，體積流量1.0→0.8 m L/min；22～30 min，40%A，體積流量0.8 mL/min）；檢測波長254 nm；柱溫30℃；運行時間30 min；進樣量20μL。

2.2.5 樣品成分分析 精密吸取 “2.2.3”項下混合對照品溶液及 “2.2.2”項下供試品溶液各20 μL，在 “2.2.4”項色譜條件下進行檢測。結(jié)果，在金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素-3-O-桑布雙糖苷模擬炮制品中均檢出槲皮素，而在荷葉堿模擬炮制的升華物中只檢出荷葉堿，色譜圖見圖2。

3 討論

本實驗采用氣體取樣袋收集荷葉炒炭過程中散發(fā)的煙霧，將其導入甲醇溶液中，再用HPLC-ESI/ MSn技術(shù)進行成分分析。結(jié)果表明，該方法操作簡便，可對煙霧中多種化學成分進行快速鑒別，也可用于其他中藥炒制過程中產(chǎn)生的煙霧或揮發(fā)性氣體的成分分析。

對中藥進行炮制的過程是藥物中化學成分量變和質(zhì)變的過程，也是中藥有效成分這個 “黑箱”內(nèi)部的 “重組”，關乎藥性變化、功能主治改變和臨床應用的調(diào)整［16］。通過對單一成分模擬炮制后的成分分析，可以清晰地研究主要化合物在炮制中的量變和質(zhì)變過程。通過該方法追蹤荷葉炒炭過程中金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素-3-O-桑布雙糖苷、荷葉堿的變化過程，能為荷葉炒炭前后主要化學成分轉(zhuǎn)化機制研究提供了簡便、可行的思路和方法。

本實驗采用HPLC-ESI/MSn技術(shù)從荷葉炒炭散發(fā)的煙霧中鑒別出5種生物堿類成分，分別為蓮心堿、杏黃罌粟堿、2-羥基-1-甲氧基阿樸啡、原荷葉堿、荷葉堿。另外，從金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素-3-O-桑布雙糖苷和的模擬炮制品中均檢出了槲皮素，在荷葉堿模擬炮制升華物中檢出了荷葉堿，說明在荷葉炒炭過程中，蓮心堿、杏黃罌粟堿、荷葉堿等生物堿受熱升華，導致荷葉炭飲片中生物堿類成分含有量降低；金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素-3-O-桑布雙糖苷受熱分解生成其苷元槲皮素，推測為荷葉炭飲片中這些苷類成分含有量降低而槲皮素含有量升高的原因。

圖2 荷葉主要化學成分模擬炮制品HPLC圖Fig.2 HPLC chromatogram s of main chem ical constituents in lotus leaves by simulation processingmethod

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M echanism of transformation ofm ain chem ical constituents in lotus leaves after carbonizing by stir-frying

WU Peng1， LIHui-fen1， ZHANG Xue-1an1*， CUIWei-1iang2， WANG Jun-xiu1

（1.Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China；2.Shandong Institute for Food and Drug Control，Jinan 250101，China）

AIMTo study the main chemica1 constituents in the smoke of 1otus 1eaves after carbonizing by stir-frying.METHODSHPLC-ESI/MSnwas used to ana1yze the smokemethano1ic extractof 1otus 1eaves.HPLC was then emp1oyed on the ana1ysis of the sub1imation of hyperin，isoquercitrin，quercetin-3-O-sambubioside and mi1tanthin after drying for threeminutes under 270℃.RESULTSFive a1ka1oids were detected in the smoke of 1otus 1eaves，inc1uding 1iensinine，armepavine，2-hydroxy-1-methoxy aporphine，pronuciferine and nuciferine. Quercetin was found in the sub1imation of hyperin，isoquercitrin and quercetin-3-O-sambubioside.Mi1tanthin was sub1imed when processing.CONCLUSIONCarbonizing by stir-frying can make the contents of hyperin，isoquercitrin and quercetin-3-O-sambubioside decrease but quercetin increase.

1otus 1eaves；carbonizing by stir-frying；smoke；chemica1 constituents；HPLC-ESI/MSn；HPLC

R283

A

1001-1528（2015）08-1767-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.08.029

2014-10-30

山東省自然基金資助項目 （ZR2012HM003）

吳 鵬 （1991—），女，碩士，主要從事中藥炮制及中藥新藥研究。E-mai1：935369647@qq.com

*通信作者：張學蘭（1963—），女，教授，主要從事中藥炮制及中藥新藥研究。E-mai1：zhang8832440@sina.com