干擾素α治療JAK2V617F陽性的真性紅細(xì)胞增多癥的療效觀察

郭慧梅，薛華，王靜，田明杰，趙雪蓮

（河北大學(xué)附屬醫(yī)院血液內(nèi)科，河北 保定 071000）

干擾素α治療JAK2V617F陽性的真性紅細(xì)胞增多癥的療效觀察

郭慧梅，薛華，王靜，田明杰，趙雪蓮

（河北大學(xué)附屬醫(yī)院血液內(nèi)科，河北 保定 071000）

目的分析干擾素α（IFN-α）治療JAK2V617F陽性的真性紅細(xì)胞增多癥（PV）的療效。方法采用IFN-α治療21例JAK2V617F陽性的PV患者，以同期羥基脲（HU）治療18例為對照，觀察血細(xì)胞計數(shù)和脾臟變化，并應(yīng)用熒光定量PCR方法檢測JAK2V617F表達(dá)水平變化，比較兩種治療的血液學(xué)和分子學(xué)緩解率。結(jié)果IFN-α組血液學(xué)總緩解率（CHR+PHR）85.71%，顯著高于HU組（55.56%）。IFN-α組總分子學(xué)緩解率（CMR+PMR）為71.43%，顯著高于HU組（5.56%）。結(jié)論相比于HU，IFN-α可使PV患者獲得更高的血液學(xué)緩解率，且可降低JAK2V617F負(fù)荷，達(dá)到分子學(xué)緩解。

真性紅細(xì)胞增多癥；JAK2V617F；干擾素α

本文引用：郭慧梅,薛華,王靜,等.干擾素α治療 JAK2V617F陽性的真性紅細(xì)胞增多癥的療效觀察[J].醫(yī)學(xué)研究與教育,2015,32(3): 36-39.

真性紅細(xì)胞增多癥（PV）是一種BCR/ABL陰性的慢性骨髓增殖性腫瘤，是惡性克隆性疾病。近期，在絕大多數(shù)的PV患者中發(fā)現(xiàn)了高致病性的獲得性JAK2V617F點突變。JAK2是一種組成性酪氨酸激酶，能激活JAK-STAT信號傳導(dǎo)途徑。干擾素α（IFN-α）已廣泛應(yīng)用于PV患者，觀察IFN-α治療后PV患者的血液學(xué)緩解率，并檢測IFN-α治療前后JAK2V617F突變負(fù)荷的變化，以觀察IFN-α治療的分子學(xué)療效，指導(dǎo)臨床治療。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選自2008年9月至2014年1月在河北大學(xué)附屬醫(yī)院血液科住院及門診隨訪的PV患者39例，所有患者JAK2V617F陽性，診斷及療效判定參照2001年WHO標(biāo)準(zhǔn)。IFN-α組21例，男性12例，女性9例，平均年齡50（42～78）歲。羥基脲（HU）組18例，男性10例，女性8例，平均年齡52（45～80）歲。

1.2 治療方案

IFN-α組：確診后給予IFN-α，起始劑量為100萬單位，每日1次，3 d后改為300萬單位，每周3次，如達(dá)到血液學(xué)緩解，可減量至1～2次/周，應(yīng)用6個月以上。HU組：0.25～2.00 g/d，根據(jù)血細(xì)胞計數(shù)水平調(diào)節(jié)用量。

1.3 療效評價

參考WHO 2001年標(biāo)準(zhǔn)。完全血液學(xué)緩解（CHR）定義為：脾大消失；血細(xì)胞計數(shù)正常，白細(xì)胞＜10.00×109/L、血小板＜400.00×109/L，紅細(xì)胞壓積＜45%（男）、42%（女）（持續(xù)3 個月以上）。部分血液學(xué)緩解（PHR）定義為：血細(xì)胞計數(shù)較初診時下降50%，可伴有脾大。治療無效判斷標(biāo)準(zhǔn)：達(dá)不到部分緩解者。完全分子學(xué)緩解（CMR）定義為 JAK2V617F基因突變經(jīng)PCR測不到。部分分子學(xué)緩解（PMR）定義為JAK2V617F突變負(fù)荷較前減少≥50%。微小分子學(xué)反應(yīng)（MMR）定義為JAK2V617F突變負(fù)荷減少20%～49%。

1.4 分子學(xué)檢測

采用實時熒光定量PCR測定JAK2V617F突變。

（1）留取PV患者的骨髓液，提取單個核細(xì)胞。

（2）提取細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。

（3）引物和探針：由上海生工生物工程公司合成，標(biāo)準(zhǔn)品為包含突變核苷酸在內(nèi)的447 bp的質(zhì)粒。JAK2的引物和探針序列如下：下游突變引物5’-CCAGAATATTCTCGTCTCCACTGAA-3’,下游未突變引物5’-TGAACCAGAATA TTCTCGT CTCCAC-3’,上游公共引物5’-CAGCAAGTATGATGAGCAAGCTTT-3’,MGB探針5’-FAM-TCACAAGCATTTGGTTTT-MGB-3’。

（4）PCR反應(yīng)體系：體系共25 μl。PCR反應(yīng)條件為94 ℃ 預(yù)變性5 min，94 ℃變性45 s，60 ℃退火1 min，共40個循環(huán)。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白對照。PCR反應(yīng)前3～15個循環(huán)的熒光信號是熒光本底信號，調(diào)節(jié)基線，各熒光曲線與基線交叉點的循環(huán)數(shù)是Ct值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品計算JAK2和JAK2V617F的絕對拷貝數(shù)量，計算JAK2/JAK2V617F比值。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計軟件處理資料，采用卡方檢驗。檢驗水準(zhǔn)取α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 血液學(xué)反應(yīng)

IFN-α組血液學(xué)總緩解率（CHR+PHR）85.71%， CHR 61.90%，PHR 23.81%，達(dá)CHR時間（4.20±1.40）個月。HU組血液學(xué)總緩解率（CHR+PHR）55.56%， CHR 22.22%，PHR 33.33%，達(dá)CHR時間（6.80±1.60）個月。IFN-α組顯著高于HU組，P=0.037。見表1。

表1 IFN-α組與HU組患者血液學(xué)緩解率的比較

2.2 分子學(xué)反應(yīng)

IFN-α組分子學(xué)總緩解率（CMR+PMR）71.43%，CMR 28.57%，PMR 42.86%，達(dá)CMR時間（21.20±5.40）個月。HU組只有1例達(dá)到PMR，分子學(xué)緩解率為5.56%。IFN-α組顯著高于HU組，P＜0.001。見表2。

表2 IFN-α組與HU組患者分子學(xué)緩解率的比較

3 討論

隨著BCR/ABL陰性的骨髓增殖性腫瘤發(fā)病機(jī)制的研究發(fā)現(xiàn)，JAK2V617F已經(jīng)成為其診斷標(biāo)記、治療靶點。絕大多數(shù)的PV患者存在JAK2V617F[1]。對于真性紅細(xì)胞增多癥的治療，傳統(tǒng)治療方法包括HU的應(yīng)用可降低血細(xì)胞，但長期應(yīng)用有轉(zhuǎn)化為白血病的風(fēng)險，也不能在分子水平上使患者獲益。JAK激酶抑制劑正在進(jìn)行臨床實驗，尚未進(jìn)入臨床。早在20余年前就證實了IFN-α可有效治療PV患者[2]，且其無致白血病作用，目前，IFN-α仍為治療PV的一線藥物。

研究對比了HU和IFN-α治療PV的血液學(xué)及分子學(xué)緩解率，發(fā)現(xiàn)與HU相比，IFN-α有更高的血液學(xué)緩解率，且有較高的分子學(xué)緩解率。目前更多的臨床試驗也證實了除了可以達(dá)到血液學(xué)緩解，IFN-α可以使PV患者達(dá)到分子學(xué)完全緩解[3-4]。而且，有報道顯示IFN-α停藥后仍可有長時間的分子學(xué)緩解，認(rèn)為攜帶JAK2V617F突變的造血干細(xì)胞被IFN-α根除[5]。而且近期動物實驗也顯示JAK2V617F突變的造血干細(xì)胞對IFN-α治療更敏感[6]。

總之，IFN-α可選擇作用于PV惡性克隆，降低JAK2V617F突變負(fù)荷，使PV患者發(fā)生血液學(xué)緩解的同時可達(dá)分子學(xué)緩解，是目前PV患者治療的優(yōu)先選擇。

[1]BAXTER E J,SCOTT L M,CAMPBELL P J,et al.Acquired mutation of the tyrosine kinase JAK2 in human myeloproliferative diseases[J].Lancet,2005,365(3): 1054-1061.

[2]SILVER R T.Recombinant interferon-alpha for treatment of polycythaemia vera[J].Lancet,1988,2(8607): 403.

[3]KILADJIAN J J,CASSINAT B,CHEVRET S,et al.Pegylated interferon-alfa-2a induces complete hematologic and molecular responses with low toxicity in polycythemia vera[J].Blood,2008,112(8): 3065-3072.

[4]QUINTAS-CARDAMA A,KANTARJIAN H,MANSHOURI T,et al.Pegylated interferon alfa-2a yields high rates of hematologic and molecular response in patients with advanced essential thrombocythemia and polycythemia vera[J].J Clin Oncol,2009,27(32): 5418-5424.

[5]LARSEN T S,MOLLER MB,D E STRICKER K,et al.Minimal residual disease and normalization of the bone marrow after long-term treatment with alpha-interferon2b in polycythemia vera.A report on molecular response patterns in seven patients in sustained complete hematological remission[J].Hematology,2009,14(6): 331-334.

[6]MULLALLY A,BRUEDIGAM C,POVEROMO L,et al.Depletion of Jak2V617F myeloproliferative neoplasm-propagating stem cells by interferon-alpha in a murine model of polycythemia vera[J].Blood,2013,121(18): 3692-3702.

(責(zé)任編輯：高艷華)

The effcacy evaluation of interferon alpha on JAK2V617F positive polycythemia vera

GUO Huimei,XUE Hua,WANG Jing,TIAN Mingjie,ZHAO Xuelian
(Department of Hematology,Affliated Hospital of Hebei University,Baoding 071000,China)

ObjectiveTo observe the clinical effcacy of interferon alpha(IFN-α) in the treatment of polycythemia vera(PV) patients with JAK2V617F mutation.Methods21 patients of PV with JAK2V617F mutation were treated with IFN-α,and 18 patients were treated with hydroxyurea(HU) as a control.The changes of blood cell counts and spleen sizes were observed.The expression levels of JAK2V617F were detected by real-time fluorescent quantitative PCR.The hematologic remission rate and molecular remission rate were compared between two groups.ResultsThe overall hematologic remission rate(complete and partial remission) of IFN-α group was 85.71%,which was significantly higher than that of HU group(55.56%).The overall molecular remission rate(complete and partial remission) of IFN-α group was 71.43%,and HU group was 5.56%,the difference was statistically signifcant.ConclusionCompared with HU,IFN-α not only can make PV patients get a higher hematologic remisson rate,but also can reduce the load of JAK2V617F to reach molecular remisson.

polycythemia vera; JAK2V617F; interferon alpha

10.3969/j.issn.1674-490X.2015.03.008

R55

A

1674-490X(2015)03-0036-04

2015-03-25

郭慧梅（1979—），女，河北邯鄲人，主治醫(yī)師，在讀博士，主要從事惡性血液病的研究。E-mail: guohuimei2006@163.com

田明杰（1980—），女，河北保定人，主管護(hù)師，主要從事惡性血液病患者的護(hù)理。

E-mail: tianmingjie@foxmail.com