浸潤(rùn)性乳腺導(dǎo)管癌與原位導(dǎo)管癌分子標(biāo)志物的臨床研究

張剛，齊娟，李中，林曉萌，蔡倩倩，郝鑫

（河北大學(xué)附屬醫(yī)院，河北 保定 071000）

浸潤(rùn)性乳腺導(dǎo)管癌與原位導(dǎo)管癌分子標(biāo)志物的臨床研究

張剛，齊娟，李中，林曉萌，蔡倩倩，郝鑫

（河北大學(xué)附屬醫(yī)院，河北 保定 071000）

目的尋找并探討乳腺癌組織可能分子標(biāo)志物的表達(dá)及其臨床意義。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法分別檢測(cè)浸潤(rùn)性乳腺導(dǎo)管癌、乳腺導(dǎo)管原位癌與乳腺增生癥組織中BRCA1、BRCA2、C-erbB-2、P53、 Bcl-2的表達(dá)情況，分析其改變?cè)蚣芭c浸潤(rùn)性乳腺癌發(fā)生的相關(guān)關(guān)系。結(jié)果100例浸潤(rùn)性乳腺癌中，分子標(biāo)志物的表達(dá)（BRCA1、BRCA2、C-erbB-2、P53、 Bcl-2）與乳腺導(dǎo)管原位癌及乳腺增生癥相比，均發(fā)生了一定程度的變化，其中BRCA1和P53表達(dá)情況的改變與浸潤(rùn)性乳腺癌的發(fā)生相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論BRCA1和P53基因蛋白表達(dá)可以作為乳腺癌預(yù)后的敏感因子及評(píng)估乳腺癌生物學(xué)行為和預(yù)后的參考指標(biāo)。

乳腺癌；BRCA1；BRCA2； C-erbB-2；P53；Bcl-2；免疫組化

本文引用：張剛,齊娟,李中,等.浸潤(rùn)性乳腺導(dǎo)管癌與原位導(dǎo)管癌分子標(biāo)志物的臨床研究[J].醫(yī)學(xué)研究與教育,2015,32(3): 31-35.

中國(guó)乳腺癌發(fā)病率呈現(xiàn)逐年增高趨勢(shì)，是婦女常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，因此，乳腺癌的病因?qū)W及預(yù)后研究成為醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。以往醫(yī)學(xué)，腫瘤直徑、腫瘤生長(zhǎng)部位、腫瘤臨床分期及組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移等因素用于判斷乳腺癌的預(yù)后。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，分子標(biāo)志物的重要性和臨床意義越來(lái)越得到人們的重視，截止到目前，已有一些分子標(biāo)志物應(yīng)用于臨床，指導(dǎo)乳腺癌臨床治療和預(yù)測(cè)預(yù)后方面發(fā)揮重要作用。

1 材料和方法

1.1 臨床資料

2008年6月至2012年6月，河北大學(xué)附屬醫(yī)院病理科手術(shù)切除乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌石蠟包埋標(biāo)本100例，平均年齡（48.35±5.14）歲，選取乳腺導(dǎo)管原位癌石蠟包埋標(biāo)本60例，平均年齡（40.52±5.13）歲，乳腺增生癥石蠟包埋標(biāo)本100例，平均年齡（39.52±6.22）歲，組間年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 主要試劑

兔抗人BRCA1、BRCA2、C-erbB-2、P53、Bcl-2單克隆抗體均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。SP免疫組化試劑盒（PV9000）購(gòu)自于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。DAB顯色劑購(gòu)自福建邁新技術(shù)有限公司。

1.3 染色方法

組織標(biāo)本以4%甲醛緩沖液固定、脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋、切片后進(jìn)行脫蠟，PBS 洗滌，免疫組化具體步驟按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，染色時(shí)每批均設(shè)立陰性對(duì)照（以PBS代替Ⅰ抗）和陽(yáng)性對(duì)照（已知陽(yáng)性片由試劑公司提供）。

1.4 結(jié)果判定

BRCA1、 BRCA2染色以癌細(xì)胞核、部分病例以癌細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒且其著色強(qiáng)度高于背景非特異性染色者判定為陽(yáng)性[1-2]；Bcl-2主要定位于細(xì)胞質(zhì)，同時(shí)也可見(jiàn)于細(xì)胞核及細(xì)胞膜；P53蛋白陽(yáng)性產(chǎn)物主要在細(xì)胞核；C-erbB-2主要見(jiàn)于細(xì)胞膜著色。以細(xì)胞核，細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜出現(xiàn)背景清晰的棕黃或棕褐色顆粒為陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞0～5%記為0分，6%～20%記為1分，21%～50%記為2分，50%以上記為3分。0分和1分視為陰性，2分和3分視為陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，蛋白表達(dá)與各實(shí)驗(yàn)組之間的關(guān)系采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05定為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

BRCA1蛋白在乳腺癌組織、乳腺原位癌組織和乳腺增生癥組織中的陽(yáng)性率分別為18.00%、40.00%和65.00%，3組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。BRCA2蛋白在乳腺癌組織、乳腺原位癌組織和乳腺增生癥組織中的陽(yáng)性率分別為49.00%、56.67%和58.00%，3組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。C-erbB-2蛋白在乳腺癌組織、乳腺原位癌組織和乳腺增生癥組織中的陽(yáng)性率分別為37.00%、28.00%和26.00%，3組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P53蛋白在乳腺癌組織、乳腺原位癌組織和乳腺增生癥組織中的陽(yáng)性率分別為42.00%、31.67%和17.00%，3組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Bcl-2蛋白在乳腺癌組織、乳腺原位癌組織和乳腺增生癥組織中的陽(yáng)性率分別為39.00%、51.67%和53.00%，3組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。BRCA1、BRCA2、C-erbB-2、P53,Bcl-2在乳腺導(dǎo)管原位癌與乳腺導(dǎo)管癌中的表達(dá)見(jiàn)圖1—10。

表1 BRCA1、BRCA2、C-erbB-2、P53、Bcl-2在乳腺組織中的表達(dá)

圖1 BRCA1在乳腺導(dǎo)管原位癌中高表達(dá)（SP×200）

圖2 BRCA1在乳腺導(dǎo)管癌中低表達(dá)（SP×200）

圖3 BRCA2在乳腺導(dǎo)管原位癌中高表達(dá)（SP×200）

圖4 BRCA2在乳腺導(dǎo)管癌中低表達(dá)（SP×400）

圖5 c-erbB-2在乳腺導(dǎo)管原位癌低表達(dá)（SP×400）

圖6 C-erbB-2在乳腺導(dǎo)管癌中高表達(dá)（SP×400）

圖7 P53在乳腺導(dǎo)管原位癌中低表達(dá)（SP×200）

圖8 P53在乳腺導(dǎo)管癌中高表達(dá)（SP×200）

圖9 Bcl-2在乳腺導(dǎo)管原位癌中高表達(dá)（SP×400）

圖10 Bcl-2在乳腺導(dǎo)管癌中低表達(dá)（SP×400）

3 討論

目前，乳腺癌發(fā)病率居女性腫瘤前列，嚴(yán)重威脅著女性健康。腫瘤直徑，腫瘤生長(zhǎng)部位，腫瘤臨床分期及組織學(xué)分級(jí)，淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移等因素常用于判斷乳腺癌的預(yù)后，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，分子標(biāo)志物的作用不斷被認(rèn)識(shí)和應(yīng)用，其重要性和臨床意義也越來(lái)越得到人們的重視。中外學(xué)者對(duì)乳腺癌的病因及預(yù)后研究較多，也較深入，認(rèn)識(shí)到乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)眾多因素共同作用的過(guò)程。

20世紀(jì)90年代，學(xué)者[3-4]發(fā)現(xiàn)BRCA1和BRCA2均是重要的抑癌基因，與乳腺癌的發(fā)生，尤其是家族遺傳性乳腺癌的發(fā)生有密切關(guān)系， BRCA1定位于人染色體17q21染色體上。研究表明，BRCA1、BRCA2基因突變與家族性乳腺癌發(fā)病關(guān)系最為密切，據(jù)統(tǒng)計(jì)，在歐美國(guó)家中，家族性乳腺癌患者BRCA1癌基因突變率高達(dá)80%[5]，散發(fā)性乳腺癌病例中也發(fā)現(xiàn)有BRCA1基因突變，BRCA1、BRCA2蛋白表達(dá)下調(diào)[6]。BRCA2基因定位于13q12染色體上，其編碼的蛋白含3418個(gè)氨基酸，有27個(gè)外顯子。如上所述，BRCA2蛋白與BRCA1共同在細(xì)胞周期的調(diào)解中發(fā)生作用。研究[7]表明，該蛋白在家族性乳腺癌中突變較多，散發(fā)性乳腺癌較少。正常生理狀態(tài)下，當(dāng)細(xì)胞處于細(xì)胞周期S期和G2期時(shí)，BRCA1與BRCA2蛋白存在于細(xì)胞核周邊，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞生長(zhǎng)與凋亡及轉(zhuǎn)錄等多種生物學(xué)行為。當(dāng)這一過(guò)程發(fā)生異常，即BRCA1和BRCA2蛋白表達(dá)下調(diào)，就會(huì)促進(jìn)正常細(xì)胞惡變和腫瘤的發(fā)生。

C-erbB-2是目前公認(rèn)的乳腺癌預(yù)后治療相關(guān)分子標(biāo)志物。C-erbB-2是與乳腺癌預(yù)和治療關(guān)系密切，且研究較多的基因，正常乳腺組織中表達(dá)較低，乳腺癌組織中表達(dá)上調(diào)[8]。P53[9]也是與人類腫瘤密切相關(guān)的抑癌基因，突變型P53更是幾乎存在于所有惡性腫瘤中，其突變率高直接導(dǎo)致腫瘤患者的預(yù)后差，分化低，生存時(shí)間短。Bcl-2[10]定位于人染色體18q21上，存在于惡性腫瘤細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜，其生理作用與細(xì)胞周期無(wú)關(guān)，直接控制著細(xì)胞的分化生長(zhǎng)及凋亡，其表達(dá)與腫瘤的惡性程度呈負(fù)相關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)免疫組化結(jié)果顯示，BRCA1、BRCA2及Bcl-2蛋白在乳腺癌組織、乳腺導(dǎo)管原位癌組織和乳腺增生癥組織中的表達(dá)呈上升趨勢(shì)，其中，BRCA1的表達(dá)3組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。C-erbB-2、P53蛋白在乳腺癌組織、乳腺導(dǎo)管原位癌組織和乳腺增生癥組織中的表達(dá)呈下降趨勢(shì)，其中P53的表達(dá)在3組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與上述文獻(xiàn)結(jié)果一致。

綜上所述，乳腺癌分子標(biāo)志物的研究和應(yīng)用，為臨床醫(yī)生的治療提供了有力保障，一些新的分子標(biāo)志物的出現(xiàn)，還需要進(jìn)一步的研究來(lái)作為應(yīng)用依據(jù)。BRCA1和P53基因蛋白表達(dá)有望作為乳腺癌預(yù)后的敏感因子，成為評(píng)估乳腺癌生物學(xué)行為和預(yù)后的參考指標(biāo)。

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（責(zé)任編輯：高艷華）

Clinical significance of molecular markers expression in invasive ductal breast cancer and ductal carcinoma in situ

ZHANG Gang,QI Juan,LI Zhong,LIN Xiaomeng,CAI Qianqian,HAO Xin
(Affliated Hospital of Hebei University,Baoding 071000,China)

ObjectiveTo explore the clinical signifcance of molecular markers expression in invasive ductal breast cancer and ductal carcinoma in situ.MethodsSP immunohistochemical were used to detect the expression of molecular markers（BRCA1,BRCA2,C-erbB-2,P53,Bcl-2） in 100 cases of invasive ductal breast cancer,60 cases of ductal carcinoma in situ,and 100 cases of Hyperplastic disease.The changes reasons and correlation between molecular markers and breast cancer were analyzed.ResultsContrast of ductal carcinoma in situ and Hyperplastic disease,biological molecular markers of 100 cases of invasive ductal breast cancer (BRCA1,BRCA2,C-erbB-2,P53,Bcl-2) all had some changes,and the changes of BRCA1,P53 expression were correlated with breast cancer（P＜0.05）.ConclusionExpression of BRCA1,P53 protein can be helpful in the prediction of the biological behavior and prognosis of invasive ductal breast cancer.

breast cancer; BRCA1; BRCA2; C-erbB-2; P53; Bcl-2; Immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1674-490X.2015.03.007

R287

A

1674-490X(2015)03-0031-05

2015-05-05

河北省2011年度醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題計(jì)劃項(xiàng)目（ZD20110521）

張剛（1975—），男，河北保定人，副主任醫(yī)師，在讀博士，主要從事普通腫瘤研究。

E-mail: zhanggang268@sina.com

齊娟（1978—），女，河北保定人，副主任護(hù)師，主要從事普通腫瘤研究。E-mail: 86781938@qq.com