百尾參祛痰止咳、抗炎作用研究

任朝輝，曹劍鋒,2*，夏麗莎，劉 丹，陳慧琴

(1.貴州師范學(xué)院，貴州貴陽 550018；2.貴州省生物資源開發(fā)利用特色重點實驗室，貴州貴陽 550018)

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百尾參祛痰止咳、抗炎作用研究

任朝輝1，曹劍鋒1,2*，夏麗莎1，劉 丹1，陳慧琴1

(1.貴州師范學(xué)院，貴州貴陽 550018；2.貴州省生物資源開發(fā)利用特色重點實驗室，貴州貴陽 550018)

[目的]百尾參抗炎鎮(zhèn)痛、止咳祛痰活性部位研究。[方法]采用小鼠氨水引咳法、小鼠酚紅排泄法觀察其止咳、祛痰作用，小鼠醋酸扭體法觀察其鎮(zhèn)痛作用，用二甲苯致耳廓腫脹法和棉球致肉芽腫法觀察其抗炎作用。[結(jié)果]百尾參提取物中乙酸乙酯提取物、丙酮提取物和水提物顯示了明顯鎮(zhèn)咳平喘藥效作用，且隨著劑量的增加，藥效作用越明顯；中高劑量組能顯著延長咳嗽潛伏期，減少咳嗽次數(shù)；增加小鼠氣管內(nèi)酚紅分泌量，與對照組相比有顯著性差異。乙酸乙酯提取物的鎮(zhèn)咳平喘作用效果比水提取物和丙酮提取物更顯著些。百尾參乙酸乙酯提取物、水提物和丙酮提取物中高劑量顯著降低醋酸扭體法的小鼠扭體次數(shù)，抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹度；抑制棉球所引起的肉芽腫，顯示了良好的鎮(zhèn)痛消炎作用。[結(jié)論]該研究結(jié)果為進一步研究百尾參抗炎鎮(zhèn)痛、止咳平喘的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了科學(xué)依據(jù)。

百尾參；提取物；祛痰止咳；抗炎

百尾參為百合科( Liliaceae)萬壽竹屬(Disporum)植物萬壽竹(Disporumcantoniense( Lour.)Merr.)的根及根莖, 別名又叫白味參、百尾筍、白龍須。百尾參為多年生草本植物, 為苗族習(xí)用藥材, 其味甘、淡, 性平，具有潤肺止咳、健脾消積的功效，可用于虛損咳喘、痰中帶血、腸風(fēng)下血、食積脹滿等癥狀[1-2]。目前以百尾參為主藥的上市復(fù)方制劑有貴州百靈企業(yè)集團制藥股份有限公司生產(chǎn)的咳速停糖漿及膠囊，具有潤肺止咳、健脾消積的功效。除張松對百尾參煎提液的鎮(zhèn)痛作用進行了初步研究[3]外，未見其他關(guān)于百尾參的藥效學(xué)研究報道，該研究以百尾參為材料探討其鎮(zhèn)咳平喘、抗炎有效部位，為百尾參的進一步臨床應(yīng)用和藥物開發(fā)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1試材。昆明小鼠(貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心)，動物飼養(yǎng)合格證號SCXK(黔)2012-0001。

1.1.2藥品及試劑。急支糖漿(太極集團重慶涪陵制藥廠有限公司，批號Z5 0020615),冰醋酸(天津市富宇精細化工有限公司，批號120510),酚紅(上海源葉生物科技有限公司),氨水(上海廣諾化學(xué)科技有限公司，批號120208),磷酸組胺(上海譜振生物科技有限公司，批號ZY150112),乙酰膽堿(sigma公司)。

1.1.3受試藥物及制備。取百尾參干燥粉末2 kg，用95%的乙醇60 ℃回流提取2 h，過濾重復(fù)2次，合并濾液，濃縮的浸膏分別用不同的有機溶劑石油醚、氯仿、丙酮、乙酸乙酯萃取，濃縮至浸膏冷凍干燥后分別得到百尾參石油醚、氯仿、丙酮、乙酸乙酯提取物，冷藏備用。取百尾參干燥粉末1 kg沸水浴浸提2 h，浸提2次，合并濾液，濃縮的浸膏冷凍干燥得水提物。

1.1.4儀器。YLS-8A多功能引喘誘咳儀(安徽正華生物儀器設(shè)備有限公司)、722分光光度計(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

1.2 試驗方法

1.2.1止咳祛痰作用。

1.2.1.1百尾參提取物對小鼠酚紅祛痰作用的影響。取健康清潔級昆明種雄性小鼠(20±2 g)114只，隨機分為14組：空白對照組，百尾參水提取物、乙酸乙酯提取物、丙酮提取物、氯仿提取物各分大、中、小3個劑量組，急支糖漿組。空白對照組灌胃生理鹽水，其余各組分別給予相應(yīng)劑量的藥液。灌胃給藥連續(xù)5 d，每天1次。最后一次給藥前禁食不禁水12 h，給藥后30 min腹腔注射0.5%苯酚紅純化水溶液0.5 ml，30 min后脫頸椎處死小鼠，暴露氣管，氣管插管與注射器鏈接，用2%碳酸氫鈉溶液0.5 ml，緩慢注入氣管內(nèi)，然后輕輕吸出，如此反復(fù)3次。合并3次沖洗液放置一定時間使雜質(zhì)沉淀，得到透明紅色上清液，用紫外分光光度計于558 nm處測定A值，根據(jù)苯酚紅標準曲線回歸方程分別算出其粉紅濃度[4]，與空白對照組比較。

1.2.1.2百尾參提取物對小鼠氨水引咳試驗的影響。取健康清潔級昆明種雄性小鼠(20±2 g)112只，雌雄各半，隨機分成14組：空白對照組，百尾參水提取物、乙酸乙酯提取物、丙酮提取物、氯仿提取物各分大、中、小3個劑量組，急支糖漿組?？瞻讓φ战M灌胃給生理鹽水，其余各組分別給予相應(yīng)劑量的藥液。灌胃給藥連續(xù)4 d，每天1次。最后一次給藥后1 h,將小鼠置于引喘誘咳儀的玻璃鐘罩內(nèi)，超聲霧化噴氨霧20 s引咳，記錄0～3 min內(nèi)咳嗽潛伏期和咳嗽次數(shù)[4]，與空白對照組進行比較。

1.2.2抗炎鎮(zhèn)痛作用。

1.2.2.1百尾參提取物對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響。取健康清潔級昆明種雄性小鼠(20±2 g)104只，隨機分為13組：空白對照組，百尾參水提取物、乙酸乙酯提取物、丙酮提取物、氯仿提取物各分大、中、小3個劑量組?？瞻讓φ战M灌胃生理鹽水，其余各組分別給予相應(yīng)劑量的藥液。每日1次，連續(xù)5 d,各組末次給藥后30 min于小鼠右耳兩面涂抹 2 0 ml二甲苯致炎，致炎30 min后處死小鼠，打孔器摘下小鼠左右耳片，稱重，計算腫脹度(右耳重-左耳重，mg)，并求出腫脹抑制率(抑制率=空白對照組腫脹均值用藥組腫脹均值/空白對照組腫脹均值×100%)[5]。

1.2.2.2百尾參提取物對醋酸扭體反應(yīng)的影響(扭體法鎮(zhèn)痛試驗)。取健康清潔級昆明種雄性小鼠(20±2 g)105只，隨機分為13組：空白對照組，百尾參水提取物、乙酸乙酯提取物、丙酮提取物、氯仿提取物各分大、中、小3個劑量組?？瞻捉M給予生理鹽水每日1次，其余各組分別給予相應(yīng)劑量的藥液，連續(xù)5 d，末次給藥后30 min，每只小鼠腹腔注射0.7%的冰醋酸溶液0.2 ml，立即觀察并記錄小鼠發(fā)生扭體反應(yīng)的潛伏期和在15 min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)，并按公式計算小鼠扭體反應(yīng)潛伏期的延長率和鎮(zhèn)痛率。延長率(%)=[(給藥組潛伏期-對照組潛伏期)/對照組潛伏期]×100%，鎮(zhèn)痛率(%)=[(對照組扭體次數(shù)-給藥組扭體次數(shù))/對照組扭體次數(shù)]×100%[5]。

1.2.2.3百尾參提取物對棉球致肉芽腫的影響。取健康清潔級昆明種雄性小鼠(20±2 g)105只，隨機分為13組：空白對照組，百尾參水提取物、乙酸乙酯提取物、丙酮提取物、氯仿提取物各分大、中、小3個劑量組。手術(shù)在腋窩處植入10 mg滅菌棉球?？瞻捉M給予生理鹽水，其余各組分別給予相應(yīng)劑量的藥液。每日1次，連續(xù)灌胃給藥7 d。末次給藥后30 min，處死小鼠取出棉球及周圍結(jié)締組織，烘干后稱重[5]。

2 結(jié)果與分析

2.1 止咳祛痰作用

2.1.1百尾參提取物對小鼠酚紅祛痰作用的影響。 從表1可以看出，乙酸乙酯提取物組和水提取組均隨著劑量增加明顯具有祛痰作用，丙酮提取物中劑量組具有明顯祛痰作用，與空白對照組相比差異顯著，氯仿提取物組沒有顯著性差異。

表1 百尾參提取物對小鼠酚紅排除試驗的影響

組別劑量∥mg/kg酚紅分泌量∥μg/ml空白對照(生理鹽水)202．3±0．24急支糖漿203．2±1．12??乙酸乙酯提取物81．9±0．16162．6±0．62?323．2±1．16??丙酮提取物82．4±0．81162．9±0．59?322．7±0．36?氯仿提取物81．8±0．31162．5±0．45322．1±0．37水提物102．4±0．33202．9±0．80?402．7±0．67?

注：*、**分別表示與空白對照組比較P<0.05、P<0.01，n=8。

2.1.2百尾參提取物對小鼠氨水引咳試驗的影響。 從表2可以看出，乙酸乙酯提取物組和水提取組均隨著劑量增加明顯具有止咳作用，乙酸乙酯提取物高劑量組作用更顯著(P<0.01)，丙酮提取物組中劑量組具有明顯止咳作用(P<0.05)，與空白對照組相比差異顯著，氯仿提取物組沒有顯著性差異。

表2 百尾參提取物對小鼠氨水引咳試驗的影響

組別劑量mg/kg咳嗽潛伏期s3min內(nèi)咳嗽次數(shù)空白對照(生理鹽水)2028．8±5．6826．5±2．65急支糖漿2052．0±5．48??15．3±2．36??乙酸乙酯提取物836．5±10．8521．8±3．591646．3±6．39?18．3±4．99?3252．5±4．12??16．8±1．26??丙酮提取物835．5±2．5221．5±4．041642．4±13．24?18．0±4．55??3240．0±9．9719．3±4．78?氯仿提取物832．5±9．9524．0±4．041636．5±10．8725．8±4．193237．8±7．7621．8±1．89水提物1030．0±6．8823．3±5．322046．0±5．09?17．3±2．06??4041．0±10．23?18．8±2．87?

注：*、**分別表示與空白對照組比較P<0.05、P<0.01，n=8。

2.2 抗炎鎮(zhèn)痛作用

2.2.1百尾參提取物對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響。 從表3可以看出，乙酸乙酯提取物組、水提取組和丙酮提取物組均隨著劑量增加明顯具有抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹作用，中高劑量組與空白對照組相比差異顯著，乙酸乙酯提取物高劑量組抑制率達63%，丙酮提取物組的中劑量組作用強于高劑量組，氯仿提取物組沒有顯著性差異。

表3 百尾參提取物對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響

組別劑量mg/kg腫脹度mg抑制率%空白對照(生理鹽水)205．4±1．11乙酸乙酯提取物84．0±1．7326162．9±1．15?46322．0±0．83??63丙酮提取物84．3±0．7220163．1±0．43??43323．9±1．81?27氯仿提取物85．2±1．014165．1±1．676324．6±2．4515水提取物104．7±1．5513203．2±0．40??41403．7±1．01?32

注：*、**分別表示與空白對照組比較P<0.05、P<0.01，n=8。

2.2.2百尾參提取物對醋酸扭體反應(yīng)的影響 (扭體法鎮(zhèn)痛試驗)。 從表4可以看出，乙酸乙酯提取物組和水提取組均隨著劑量增加明顯具有延長小鼠扭體出現(xiàn)的時間和減少15 min內(nèi)扭體次數(shù)，乙酸乙酯提取物組高劑量組延長率達75.8%、扭體次數(shù)的減少率達42.8%；水提取組中劑量組具有明顯延長扭體出現(xiàn)的時間和減少扭體次數(shù)作用，與空白對照組相比差異顯著；氯仿提取物組沒有顯著性差異。

表4 百尾參提取物對醋酸扭體反應(yīng)的影響

組別劑量mg/kg扭體出現(xiàn)時間min延長率%15min內(nèi)扭體次數(shù)∥次鎮(zhèn)痛率∥%空白對照(生理鹽水)203．337．7±5．69乙酸乙酯提取物85．051．527．7±4．8026．5165．457．626．0±2．30?31．0325．875．821．0±3．21??44．2丙酮提取物85．257．629．7±4．3321．2165．463．627．3±3．2827．4325．769．725．3±2．84?32．7氯仿提取物84．227．342．7±7．330164．330．331．0±2．5117．7324．845．529．0±4．3323．0水提物104．536．430．7±1．7618．6205．772．722．3±0．88??40．7404．845．529．0±4．00?23．0

注：*、**分別表示與空白對照組比較P<0.05、P<0.01，n=8。

2.2.3百尾參提取物對棉球致肉芽腫的影響。 從表5可以看出，乙酸乙酯提取物組和水提取組均隨著劑量增加明顯具有抑制棉球致肉芽腫作用，乙酸乙酯提取物組高劑量組抑制率達49%，丙酮提取物組中劑量組具有明顯抑制肉芽腫作用，與空白對照組相比差異顯著，氯仿提取物組沒有顯著性差異。

表5 百尾參提取物對棉球致肉芽腫的影響

組別劑量mg/kg肉芽腫重量mg抑制率%空白對照(生理鹽水)204．8±1．05乙酸乙酯提取物83．9±0．3417163．4±1．12?28322．4±0．11??49丙酮提取物84．5±0．506163．4±0．18?28324．1±0．8416氯仿提取物84．9±0．910164．2±1．3213323．8±0．3720水提物103．8±0．2220203．1±0．95??34403．4±0．16?29

注：*、**分別表示與空白對照組比較P<0.05、P<0.01，n=8。

3 結(jié)論與討論

從試驗結(jié)果來看，百尾參提取物中乙酸乙酯提取物、丙酮提取物和水提物在止咳作用試驗中均顯示明顯鎮(zhèn)咳藥效作用，且隨著劑量的增加，藥效作用越明顯；中高劑量組能顯著延長咳嗽潛伏期，減少咳嗽次數(shù)；增加小鼠氣管內(nèi)酚紅分泌量，與對照組相比有顯著性差異；乙酸乙酯提取物的鎮(zhèn)咳平喘作用效果比水提取物和丙酮提取物更顯著些，與對照組相比氯仿提取物的鎮(zhèn)咳平喘作用沒有顯著差異性。百尾參提取物抗炎作用試驗結(jié)果也表現(xiàn)出與止咳平喘相似的效果，百尾參乙酸乙酯提取物、水提物和丙酮提取物中高劑量顯著降低醋酸扭體法的小鼠扭體次數(shù)，抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹度；抑制棉球所引起的肉芽腫，顯示了良好的鎮(zhèn)痛消炎作用。關(guān)于百尾參化學(xué)成分研究報道較少，陳磊從乙醇提取物中分離到了木犀草素、芹菜素、金圣草黃素、蘆丁及甾體皂苷類化合物等[6]，甘秀海等也從百尾參中分離出了槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇等成分[7-8]。百尾參水提物、乙酸乙酯提取物和丙酮提取物具有鎮(zhèn)咳平喘、抗炎鎮(zhèn)痛作用可能與存在黃酮類及甾體皂苷類有關(guān)，除此之外可能還有其他成分也具有止咳平喘、抗炎鎮(zhèn)痛作用，因此百尾參止咳祛痰、抗炎鎮(zhèn)痛的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)有待進一步研究。

[1] 邱德文,杜江.中華本草.苗藥卷[M].貴陽:貴州科學(xué)技術(shù)出版社,2005：54.

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[4] 徐淑云,卞如濂,陳修. 藥理實驗方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2002.

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[7] 甘秀海,周欣,梁志遠.不同產(chǎn)地百尾參揮發(fā)性成分比較研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2012(2):765.

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Study on Anti-inflammatory,Cough Relieving and Sputum Elimination ofDisporumcantoniense

REN Chao-hui1, CAO Jian-feng1,2*, XIA Li-sha1et al

(1. Guizhou Normal College, Guiyang, Guizhou 550018; 2. Guizhou Characteristic Key Laboratory of Biological Resource Exploitation and Utilization, Guiyang, Guizhou 550018)

[Objective] To study the effective part screening of the extract ofDisporumcantoniense(Lour.) Merr. in abirritation,anti-inflammatory,cough relieving and sputum elimination.[Method] The antalgic function ofDisporumcantoniense(Lour.) Merr.was tested by writhing reaction and anti-inflammatory was tested by the pinna swelling test and granulomas test;The effects of cough relieving and sputum elimination were observed by the ammonia water-induced tussive,excretion of phenol red in the airway of mice. [Result] The results show that medium and high dosages of extracted acetone, ethyl acetate and water extract significantly prolong the latent period, reduce the frequency of cough of mice,increase the quantity of phenol red output from the trachea in mice.Compared with the blank control group,there was statistical significance in antitussive effect, especially the antitussive effect is the best in the highest dosage of ethyl acetate and water extract groups. Meanwhile, medium and high dosages of extracted acetone, ethyl acetate, water extract significantly inhibit the ear edema induced by xylene, granuloma induced by cotton ball and pain caused by acetic acid in mice. [Conclusion] These results provide the basic data for the extraction and utilization of the active constituent ofDisporumcantoniense(Lour.) Merr. in abirritation, anti-inflammatory,cough relieving and sputum elimination.

Disporumcantoniense(Lour.) Merr.;Extract; Cough relieving and sputum elimination; Anti-inflammatory effect

貴州省科技廳自然科學(xué)

[(2013)2233]；貴州省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練項目[黔教辦(201314223005)]；貴州省學(xué)位辦重點支持學(xué)科建設(shè)項目(2011231)；貴州師范學(xué)院博士基金項目(12BS032)。

任朝輝(1991-)，男，貴州遵義人，本科生，專業(yè)：生物科學(xué)。*通訊作者，副教授，博士，從事天然藥物、生物資源開發(fā)利用研究。

2015-03-13

S 567.23+9

A

0517-6611(2015)11-116-03