結(jié)核菌快速培養(yǎng)法與γ-干擾素釋放試驗在結(jié)核病診斷中的應用價值

王 馨

結(jié)核菌快速培養(yǎng)法與γ-干擾素釋放試驗在結(jié)核病診斷中的應用價值

王 馨

目的探討結(jié)核菌快速培養(yǎng)法與γ-干擾素釋放試驗在結(jié)核病診斷中的應用價值。方法選擇2013年11月至2014年7月在我院進行檢查的與結(jié)核病密切接觸者180例，均進行結(jié)核菌快速培養(yǎng)法與γ-干擾素釋放試驗檢測結(jié)核桿菌，以結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果為對照，分析兩種檢測方法結(jié)核桿菌陽性檢出率的敏感性及特異性，并分析導致結(jié)核菌快速培養(yǎng)法誤診的危險因素。結(jié)果結(jié)核菌快速培養(yǎng)法和γ-干擾素釋放試驗結(jié)核菌檢出陽性率分別是13.3% 和16.1%，兩者比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。以結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果為金標準，結(jié)核菌快速培養(yǎng)法和γ-干擾素釋放試驗的診斷敏感性分別為70.0%和96.7%，特異性分別為98.0%和100.0%。γ-干擾素釋放試驗的診斷敏感性明顯高于結(jié)核菌快速培養(yǎng)法，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。logistic多元回歸分析表明年齡和既往結(jié)核史是導致結(jié)核菌快速培養(yǎng)法誤診的主要因素 (P＜0.05)。結(jié)論相對于結(jié)核菌快速培養(yǎng)法，γ-干擾素釋放試驗結(jié)核病診斷的敏感性更高。

結(jié)核菌快速培養(yǎng)法;γ-干擾素釋放試驗;結(jié)核病

結(jié)核病(tuberculosis，TB)是由結(jié)核分枝桿菌引起的慢性傳染性疾病，其中分枝桿菌由結(jié)核分枝桿菌復合群和非結(jié)核分枝桿菌組成，最重要的種類當屬結(jié)核分枝桿菌［1，2］。目前全世界活動性結(jié)核病患者達2 000萬人，每年因此病死 200 ～300 萬人［3，4］。我國活動性肺結(jié)核患者約有450萬人，年均死亡約13萬人［5］。因此，快速準確檢測結(jié)核菌感染極為重要。結(jié)核菌快速培養(yǎng)法是集分枝桿菌快速培養(yǎng)、檢測及藥敏技術為一體的全自動分枝桿菌培養(yǎng)系統(tǒng)，廣泛用于結(jié)核診斷和臨床鑒別診斷，但其確診時間需3～4周;PCR檢測具有靈敏度高、特異性強、簡便和快速等優(yōu)點，但其對于設備的要求較高，檢查費用也較貴［6］。隨著醫(yī)學技術的發(fā)展，γ-干擾素釋放試驗(interferon gamma release assay，IGRA)作為用于診斷結(jié)核分枝桿菌潛伏感染的新方法正在逐漸被廣泛使用，其主要通過檢測外周血單核細胞在結(jié)核分枝桿菌特異性抗原刺激下釋放γ-干擾素的水平［7，8］。本文對比分析了結(jié)核菌快速培養(yǎng)法與IGRA檢測結(jié)核桿菌的陽性檢出率和診斷效果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年11月至2014年7月在我院檢查的與結(jié)核病密切接觸者180例，其中男性108例，女性72例;年齡32～78歲，平均(45.34±2.19)歲;與結(jié)核病患者密切接觸時間3～15年，平均為(6.45±0.45)年;平均受教育年限為(11.87±2.22)年。臨床表現(xiàn):咯血112例，支氣管擴張43例，合并肺不張44例，咳嗽109例，胸悶45例，氣促23例;平均體溫(38.31±2.34)℃。納入標準:與結(jié)核病患者一起生活時間≥3年;年齡≥14歲;臨床出現(xiàn)咳嗽咳痰超過2周，伴或者不伴呼吸急促、胸痛、咯血、消瘦、厭食、發(fā)熱;針對目前病情已進行診斷性抗結(jié)核治療超過1月;且知情同意者。排除標準:HIV陽性患者;合并嚴重并發(fā)癥(惡性腫瘤、心臟疾病)等;存在明確的免疫抑制或者免疫低下病史;服用了影響本文檢測結(jié)果的藥物。

1.2 檢查方法 結(jié)核菌快速培養(yǎng)法:選擇BACT/Alert 3D結(jié)核菌快速培養(yǎng)儀器，選擇患者的痰標本，以1∶3的比例加入消化液，漩渦振蕩器振蕩5～10 min，3 000 r/min，離心15 min，取沉淀用PBS重懸，融入儀器進行培養(yǎng)與鑒定，干燥后光學顯微鏡下鏡檢。以致病菌分離出濃度≥105cFu/mL為陽性。IGRA:使用酶聯(lián)免疫法進行檢測，試劑盒為結(jié)核桿菌特異性細胞免疫反應監(jiān)測試劑盒(?？诰S瑅璦生物研究所提供)，收集每位受試者外周靜脈血3～4 mL，將血漿樣品和γ-干擾素檢測部分于室溫下(22±5℃)平衡至少30 min，制作標準曲線、檢測抗體工作液、親和素-辣根過氧化物酶工作液及洗滌液，嚴格按照試劑盒步驟進行檢測，使用酶標儀在450 nm處讀取相應OD值。根據(jù)OD值及標準曲線計算得到T(檢測值)，根據(jù)樣品的N(陰性對照)、P(陽性對照)OD值計算(P-N)及(T-N)值。

1.3 判斷標準 以結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果為金標準，大于1.0×103拷貝/mL判定為陽性。結(jié)核菌快速培養(yǎng)法陽性標準:以致病菌分離出濃度≥105cFu/mL為陽性。γ-干擾素釋放試驗標準:N＜0.5 IU/mL時，(TN)/(P-N)≥0.60時為陽性，否則為陰性;N≥0.5 IU/mL時，(T-N)/(P-N)≥0.85 A時為陽性，否則為陰性。

1.4 統(tǒng)計學方法 選擇SPSS 14.0進行數(shù)據(jù)的錄入與分析，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，因素分析選擇多因素logistic多元回歸分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 陽性檢出率對比 經(jīng)過觀察，結(jié)核菌快速培養(yǎng)法檢出陽性24例，檢出率為13.3%，IGRA檢出陽性29例，檢出率為16.1%，IGRA檢出陽性率高于結(jié)核菌快速培養(yǎng)法，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。詳見表1。

表1 結(jié)核菌快速培養(yǎng)法與γ-干擾素釋放試驗的陽性檢出率對比(n)

2.2 診斷效果對比 以結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果為金標準，判定陽性共30例，陰性共150例;以結(jié)核菌快速培養(yǎng)法判定陽性24例，陰性156例;IGRA判定的陽性29例，陰性151例。因此可得結(jié)核菌快速培養(yǎng)法檢的診斷敏感性(檢測陽性數(shù)/金標準陽性數(shù))為70.0%，特異性(檢測陰性數(shù)/金標準陰性數(shù))為98.0%;IGRA的診斷敏感性為96.7%，特異性為100.0%。IGRA的診斷敏感性明顯高于結(jié)核菌快速培養(yǎng)法，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=11.94，P＜0.05)。兩組特異性比較，差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.411，P ＞0.05)。

2.3 誤診分析 IGRA誤診的1例是由于標本量太少，提取不到足夠的細胞數(shù)量，導致漏診斷。而通過logistic多元回歸分析，本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)導致結(jié)核菌快速培養(yǎng)法誤診的因素主要為年齡、既往結(jié)核史(P＜0.05)。詳見表2。

表2 導致結(jié)核菌快速培養(yǎng)法誤診的因素

2.4 病例分析 患者王某某，男性，漢族，45歲，患者于2010年曾患肺結(jié)核，2012年治愈。家中母親長期患有結(jié)核疾病，且共同居住，2014年1月患者無誘因出現(xiàn)咳嗽，以干咳為主伴少量白色稀薄液，存在發(fā)熱、乏力等臨床癥狀，并出現(xiàn)間斷咯血。在結(jié)核菌快速培養(yǎng)法中，檢查為陰性結(jié)果，予以止血與抗生素治療，效果欠佳。后采用IGRA診斷為結(jié)核病陽性，給予抗癆支持治療，INH 0.4 g 1次/日，RFP 0.45 g 1次/日，PZA 1.5 g 1次/日，SM 0.75 g 1次/日，治療2周后癥狀緩解，無藥物不良反應后出院。

3 討論

結(jié)核病是目前世界上首要的感染性疾病，是全球關注的公共衛(wèi)生和社會問題，我國為結(jié)核病高負擔、高危險性的國家［9］。肺結(jié)核的病原菌主要為結(jié)核分枝桿菌，不過隨著獲得性免疫缺陷綜合征(ADIS)的出現(xiàn)，醫(yī)源性免疫抑制的發(fā)生率增高，非結(jié)核分枝桿菌疾病發(fā)生率也在不斷增加，為了保持結(jié)核疾病診斷的一致性，本文選擇的患者都為結(jié)核分枝桿菌感染引起的結(jié)核病患者。在診治中，肺結(jié)核患者起病初期常合并一般細菌感染，可因漏診或者抗感染力度不足而加重病情。主要由于肺結(jié)核患者細胞免疫功能降低，容易引起條件致病菌感染［10］。

結(jié)核菌快速培養(yǎng)是目前常用的結(jié)核菌培養(yǎng)系統(tǒng)，該系統(tǒng)能進行多種標本的結(jié)核菌培養(yǎng)，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)陽性可以及時通知臨床，必要時立即加做藥敏，可大大縮短了報告時間［11］。但該方法存在許多不足之處，其敏感性不高，不能排除潛伏性結(jié)核感染影響，造成特異性也有所降低［12］。而近年來新出現(xiàn)的檢測受檢者全血或外周血單個核細胞對結(jié)核分枝桿菌特異抗原的γ-干擾素釋放反應，已被應用于結(jié)核分枝桿菌潛伏感染的診斷。γ-干擾素釋放反應技術的應用無疑大大縮短了實驗周期，且操作簡便［13］。本文結(jié)核菌快速培養(yǎng)法檢出陽性24例，檢出率為13.3%，IGRA檢出陽性29例，檢出率為16.1%，IGRA檢出陽性率高于結(jié)核菌快速培養(yǎng)法，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。結(jié)核菌快速培養(yǎng)法的診斷敏感性明顯高于結(jié)核菌快速培養(yǎng)法，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。不過在漏診中，也可能出現(xiàn)操作不規(guī)范，破壞了細胞完整性，導致診斷效果不好。另外，檢測系統(tǒng)的靈敏度，特異性及重復性也影響著檢出的質(zhì)量［14］。

我們通過二分類logistic多元回歸分析，發(fā)現(xiàn)導致結(jié)核菌快速培養(yǎng)法誤診的因素主要為年齡、既往結(jié)核史(P＜0.05)。當患者既往曾患活動性結(jié)核，即使當時己治愈，仍有可能遺留有細胞免疫記憶，從而可能造成結(jié)核菌快速培養(yǎng)法假陽性。而年齡越大，既往暴露于結(jié)核分枝桿菌的機會越高，從而可能造成結(jié)核菌快速培養(yǎng)法假陽性［15］。另外肺結(jié)核病灶引起呼吸道結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變，使支氣管引流不暢，深部痰液不易排出。但在我國這種高卡介苗接種率和高結(jié)核感染率的國家，兩種方法檢測的穩(wěn)定性和應用價值還有待進一步研究［16］。

總之，相對于結(jié)核菌快速培養(yǎng)法，γ-干擾素釋放試驗在結(jié)核病診斷中的臨床應用具有好的檢出率，其敏感性更高，值得推廣應用。

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The clinical values of TB rapid culture method and γ-interferon release assay in diagnosis of tuberculosis

Wang Xin
Department of Clinical Laboratory，the Fourth People's Hospital of Qinghai Province，Xining 810000，China

ObjectiveTo investigate the clinical values of TB rapid culture method and γ-interferon release assay in the diagnosis of tuberculosis.MethodsA total of 180 close contact cases with tuberculosis from November 2013 to July 2014 in our hospital were selected and given the rapid TB culture and γ-interferon release assay，then the risk factors for misdiagnosis were analysed.ResultsThe detection positive rate of the TB rapid culture method and γ-interferon release assay was respectively 13.3%and 16.1% ，and the difference had no statistical significance(P＞0.05).With mycobacterium tuberculosis sputum culture results as the gold standard，the sensitivity of the TB rapid culture method and γ-interferon release assay was respectively 70.0%and 96.7%，and the specificity was 96.7%and 100.0%.The diagnostic sensitivity of the γ-interferon release assay was significantly higher than that of the rapid culture method(P ＜0.05).Logistic regression analysis showed that the factors leading to TB rapid culture method misdiagnosis were mainly age and previous history of tuberculosis(P＜0.05).ConclusionCompared with TB rapid culture，γ-interferon release assay in the diagnosis of tuberculosis in clinical applications has better detection rate and higher sensitivity.

TB rapid culture;γ-interferon release assay;Tuberculosis

10.3969/j.issn.1000 －0399.2015.05.027

810000 西寧 青海省第四人民醫(yī)院檢驗科

(2015－01－11收稿 2015－04－15修回)