HPLC法測定金松止癢洗液中梣酮的含量

陸暉　劉春明　黃秀花

【摘 要】 目的：建立金松止癢洗液中梣酮的含量測定方法。方法：采用HPLC法，以Zorbax XDB-C18為分析柱（46mm×150mm，5μm），甲醇-水（60∶40）為流動相，流速1ml·min-1，檢測波長為236nm。結(jié)果：梣酮在002～025μg線性關(guān)系良好（R=09999），平均加樣回收率為9851%，RSD為091%（n=6）。結(jié)論：本法準(zhǔn)確、簡便、重復(fù)性好，可作為金松止癢洗液的質(zhì)量控制方法。

【關(guān)鍵詞】 金松止癢洗液；梣酮；HPLC

【中圖分類號】R927 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2014）24-0013-02

HPLC determination of fraxinellone in Jinsongzhiyang lotion

LU Hui，LIU Chunming，HUANG Xiuhua

Guangxi Huahong Pharmaceutical Co. Ltd.， Liuzhou 545007，China

Abstract：Objective To establish an HPLC method for determining the content of fraxinellone in Jinsongzhiyang lotion. Methods methanol-water（60∶40），the flow rate was 1.0 ml·min-1，and the deterring wavelength was 236nm. Results The linear range of gaillic acid was from 002μg to 025μg（R=09999）.The average recovery rate was 9851%，RSD was 091%（n=6）.Conlusion The method was accurate and simple with high repeatablility，which can be used for the qualtity control of Jinsongzhiyang lotion.

Keywords：Jinsongzhiyang lotion；fraxinellone；HPLC

金松止癢洗液為我公司獨(dú)家品種（國藥準(zhǔn)字B20020210），由白鮮皮、千里光等9味中藥組成，具有清熱祛濕、殺蟲止癢之功效，用于治療成年女性外陰炎、濕熱帶下、外陰及皮膚瘙癢等癥。白鮮皮為方中主藥，梣酮為白鮮皮主要有效成分[1]，參考相關(guān)文獻(xiàn)[1-3]白鮮皮及其制劑的含量測定方法，本文采用HPLC法測定金松止癢洗液中的梣酮。

1 儀器和試藥

11 儀器 安捷倫1200高效液相色譜儀（美國Angilent公司），含在線脫氣機(jī)、自動進(jìn)樣器、四元梯度泵、UV檢測器；AL104型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；SB4200DT型超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

12 試藥 梣酮（批號：111700-200602，中國食品藥品檢定研究院）；甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，水為娃哈哈飲用純凈水；金松止癢洗液3批（批號：20140101、20140102、20140103，廣西壯族自治區(qū)花紅藥業(yè)股份有限公司）。

2 方法與結(jié)果

21 色譜條件 色譜柱：Zorbax XDB-C18色譜柱（46×150mm，5μm）；流動相：甲醇-水（60∶40）；檢測波長：236nm；柱溫：30℃；流速：10ml/min；進(jìn)樣量10μl。

22 對照品溶液的制備 精密稱取梣酮對照品100mg，置于20ml量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，作為貯備液（梣酮濃度為0500mg/ml），精密量取貯備液1ml，置于50ml量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，即得梣酮濃度為0010mg/ml的對照品溶液。

23 供試品溶液的制備 取本品適量，經(jīng)045μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

24 陰性對照品的制備 按規(guī)定制法制備缺白鮮皮的陰性樣品，再按“23”項(xiàng)下制備方法制備陰性對照品溶液。

25 [JP+1]系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 分別取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液按上述色譜條件進(jìn)樣，進(jìn)樣量為10μl。在本實(shí)驗(yàn)條件下，梣酮的保留時(shí)間約為100min，梣酮與其相鄰峰的分離度>15，以梣酮計(jì)算理論塔板數(shù)不低于3000，供試品溶液與對照品溶液色譜在同一保留時(shí)間位置上有相應(yīng)色譜峰，陰性對照品色譜圖中無梣酮的色譜峰，陰性無干擾。

26 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取梣酮對照品溶液（C=0010mg/ml）2、5、10、15、20、25μl進(jìn)樣，按上述色譜條件測定色譜峰面積，以峰面積A對進(jìn)樣量（μg）進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得線性回歸方程為：A=2878×103X-2936，R=09999。梣酮在002～025μg，與峰面積線性關(guān)系良好。

27 精密度試驗(yàn) 精密吸取梣酮對照品溶液（C=0010mg/ml）10μl，連續(xù)進(jìn)樣5次測定，梣酮峰面積的RSD為054%，表明儀器精密度良好。

28 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液（20140101批樣品），分別于0、4、8、24h進(jìn)樣10μl測定，梣酮峰面積值RSD為025%，表明供試品溶液在24h有良好的穩(wěn)定性。

29 重復(fù)性試驗(yàn) 對同一批金松止癢洗液（20140101批）平行制備5份供試品溶液，分別進(jìn)樣測定，計(jì)算其梣酮含量，其RSD為170%，表明該方法的重復(fù)性良好。

210 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取同一批金松止癢洗液（20140101批）（含梣酮1020μg/ml）6份，各取約50ml，每份等量加入梣酮酸貯備液（C=0500mg/ml）10ml，按“23”項(xiàng)下進(jìn)行樣品制備并測定，計(jì)算回收率。梣酮的平均回收率為9851%，RSD為091%，結(jié)果見表1。

3 討論

金松止癢洗液為純中藥制劑，由9味中藥組成，成分復(fù)雜，其對應(yīng)白鮮皮的有效成分有梣酮、黃酮醇等，經(jīng)預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，黃酮醇含量測定雜質(zhì)干擾嚴(yán)重，色譜分離度不理想，而梣酮含量較高，其色譜峰峰型、分離度都比較理想，故選定梣酮作為該制劑的含量測定成分。在流動相的選擇方面，嘗試過甲醇-水不同比例流動相，經(jīng)過比較，按藥典收載的白鮮皮藥材梣酮含量測定方法甲醇-水（60∶40），峰型尖銳，分離度理想，分析時(shí)間適宜，故予以采用。本文建立了金松止癢洗液中梣酮的含量測定方法，所建方法簡便、準(zhǔn)確、可行，重現(xiàn)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

[1] 陳發(fā)奎.常用中草藥有效成分含量測定[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1997：517.

[2] 原春蘭，楊得鎖.RP-HPLC測定白鮮皮中梣酮含量[J].中國中藥雜志，2006，31（12）：992-994.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

（收稿日期：20140915）

【摘 要】 目的：建立金松止癢洗液中梣酮的含量測定方法。方法：采用HPLC法，以Zorbax XDB-C18為分析柱（46mm×150mm，5μm），甲醇-水（60∶40）為流動相，流速1ml·min-1，檢測波長為236nm。結(jié)果：梣酮在002～025μg線性關(guān)系良好（R=09999），平均加樣回收率為9851%，RSD為091%（n=6）。結(jié)論：本法準(zhǔn)確、簡便、重復(fù)性好，可作為金松止癢洗液的質(zhì)量控制方法。

【關(guān)鍵詞】 金松止癢洗液；梣酮；HPLC

【中圖分類號】R927 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2014）24-0013-02

HPLC determination of fraxinellone in Jinsongzhiyang lotion

LU Hui，LIU Chunming，HUANG Xiuhua

Guangxi Huahong Pharmaceutical Co. Ltd.， Liuzhou 545007，China

Abstract：Objective To establish an HPLC method for determining the content of fraxinellone in Jinsongzhiyang lotion. Methods methanol-water（60∶40），the flow rate was 1.0 ml·min-1，and the deterring wavelength was 236nm. Results The linear range of gaillic acid was from 002μg to 025μg（R=09999）.The average recovery rate was 9851%，RSD was 091%（n=6）.Conlusion The method was accurate and simple with high repeatablility，which can be used for the qualtity control of Jinsongzhiyang lotion.

Keywords：Jinsongzhiyang lotion；fraxinellone；HPLC

金松止癢洗液為我公司獨(dú)家品種（國藥準(zhǔn)字B20020210），由白鮮皮、千里光等9味中藥組成，具有清熱祛濕、殺蟲止癢之功效，用于治療成年女性外陰炎、濕熱帶下、外陰及皮膚瘙癢等癥。白鮮皮為方中主藥，梣酮為白鮮皮主要有效成分[1]，參考相關(guān)文獻(xiàn)[1-3]白鮮皮及其制劑的含量測定方法，本文采用HPLC法測定金松止癢洗液中的梣酮。

1 儀器和試藥

11 儀器 安捷倫1200高效液相色譜儀（美國Angilent公司），含在線脫氣機(jī)、自動進(jìn)樣器、四元梯度泵、UV檢測器；AL104型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；SB4200DT型超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

12 試藥 梣酮（批號：111700-200602，中國食品藥品檢定研究院）；甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，水為娃哈哈飲用純凈水；金松止癢洗液3批（批號：20140101、20140102、20140103，廣西壯族自治區(qū)花紅藥業(yè)股份有限公司）。

2 方法與結(jié)果

21 色譜條件 色譜柱：Zorbax XDB-C18色譜柱（46×150mm，5μm）；流動相：甲醇-水（60∶40）；檢測波長：236nm；柱溫：30℃；流速：10ml/min；進(jìn)樣量10μl。

22 對照品溶液的制備 精密稱取梣酮對照品100mg，置于20ml量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，作為貯備液（梣酮濃度為0500mg/ml），精密量取貯備液1ml，置于50ml量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，即得梣酮濃度為0010mg/ml的對照品溶液。

23 供試品溶液的制備 取本品適量，經(jīng)045μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

24 陰性對照品的制備 按規(guī)定制法制備缺白鮮皮的陰性樣品，再按“23”項(xiàng)下制備方法制備陰性對照品溶液。

25 [JP+1]系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 分別取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液按上述色譜條件進(jìn)樣，進(jìn)樣量為10μl。在本實(shí)驗(yàn)條件下，梣酮的保留時(shí)間約為100min，梣酮與其相鄰峰的分離度>15，以梣酮計(jì)算理論塔板數(shù)不低于3000，供試品溶液與對照品溶液色譜在同一保留時(shí)間位置上有相應(yīng)色譜峰，陰性對照品色譜圖中無梣酮的色譜峰，陰性無干擾。

26 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取梣酮對照品溶液（C=0010mg/ml）2、5、10、15、20、25μl進(jìn)樣，按上述色譜條件測定色譜峰面積，以峰面積A對進(jìn)樣量（μg）進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得線性回歸方程為：A=2878×103X-2936，R=09999。梣酮在002～025μg，與峰面積線性關(guān)系良好。

27 精密度試驗(yàn) 精密吸取梣酮對照品溶液（C=0010mg/ml）10μl，連續(xù)進(jìn)樣5次測定，梣酮峰面積的RSD為054%，表明儀器精密度良好。

28 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液（20140101批樣品），分別于0、4、8、24h進(jìn)樣10μl測定，梣酮峰面積值RSD為025%，表明供試品溶液在24h有良好的穩(wěn)定性。

29 重復(fù)性試驗(yàn) 對同一批金松止癢洗液（20140101批）平行制備5份供試品溶液，分別進(jìn)樣測定，計(jì)算其梣酮含量，其RSD為170%，表明該方法的重復(fù)性良好。

210 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取同一批金松止癢洗液（20140101批）（含梣酮1020μg/ml）6份，各取約50ml，每份等量加入梣酮酸貯備液（C=0500mg/ml）10ml，按“23”項(xiàng)下進(jìn)行樣品制備并測定，計(jì)算回收率。梣酮的平均回收率為9851%，RSD為091%，結(jié)果見表1。

3 討論

金松止癢洗液為純中藥制劑，由9味中藥組成，成分復(fù)雜，其對應(yīng)白鮮皮的有效成分有梣酮、黃酮醇等，經(jīng)預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，黃酮醇含量測定雜質(zhì)干擾嚴(yán)重，色譜分離度不理想，而梣酮含量較高，其色譜峰峰型、分離度都比較理想，故選定梣酮作為該制劑的含量測定成分。在流動相的選擇方面，嘗試過甲醇-水不同比例流動相，經(jīng)過比較，按藥典收載的白鮮皮藥材梣酮含量測定方法甲醇-水（60∶40），峰型尖銳，分離度理想，分析時(shí)間適宜，故予以采用。本文建立了金松止癢洗液中梣酮的含量測定方法，所建方法簡便、準(zhǔn)確、可行，重現(xiàn)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

[1] 陳發(fā)奎.常用中草藥有效成分含量測定[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1997：517.

[2] 原春蘭，楊得鎖.RP-HPLC測定白鮮皮中梣酮含量[J].中國中藥雜志，2006，31（12）：992-994.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

（收稿日期：20140915）

【摘 要】 目的：建立金松止癢洗液中梣酮的含量測定方法。方法：采用HPLC法，以Zorbax XDB-C18為分析柱（46mm×150mm，5μm），甲醇-水（60∶40）為流動相，流速1ml·min-1，檢測波長為236nm。結(jié)果：梣酮在002～025μg線性關(guān)系良好（R=09999），平均加樣回收率為9851%，RSD為091%（n=6）。結(jié)論：本法準(zhǔn)確、簡便、重復(fù)性好，可作為金松止癢洗液的質(zhì)量控制方法。

【關(guān)鍵詞】 金松止癢洗液；梣酮；HPLC

【中圖分類號】R927 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2014）24-0013-02

HPLC determination of fraxinellone in Jinsongzhiyang lotion

LU Hui，LIU Chunming，HUANG Xiuhua

Guangxi Huahong Pharmaceutical Co. Ltd.， Liuzhou 545007，China

Abstract：Objective To establish an HPLC method for determining the content of fraxinellone in Jinsongzhiyang lotion. Methods methanol-water（60∶40），the flow rate was 1.0 ml·min-1，and the deterring wavelength was 236nm. Results The linear range of gaillic acid was from 002μg to 025μg（R=09999）.The average recovery rate was 9851%，RSD was 091%（n=6）.Conlusion The method was accurate and simple with high repeatablility，which can be used for the qualtity control of Jinsongzhiyang lotion.

Keywords：Jinsongzhiyang lotion；fraxinellone；HPLC

金松止癢洗液為我公司獨(dú)家品種（國藥準(zhǔn)字B20020210），由白鮮皮、千里光等9味中藥組成，具有清熱祛濕、殺蟲止癢之功效，用于治療成年女性外陰炎、濕熱帶下、外陰及皮膚瘙癢等癥。白鮮皮為方中主藥，梣酮為白鮮皮主要有效成分[1]，參考相關(guān)文獻(xiàn)[1-3]白鮮皮及其制劑的含量測定方法，本文采用HPLC法測定金松止癢洗液中的梣酮。

1 儀器和試藥

11 儀器 安捷倫1200高效液相色譜儀（美國Angilent公司），含在線脫氣機(jī)、自動進(jìn)樣器、四元梯度泵、UV檢測器；AL104型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；SB4200DT型超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

12 試藥 梣酮（批號：111700-200602，中國食品藥品檢定研究院）；甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，水為娃哈哈飲用純凈水；金松止癢洗液3批（批號：20140101、20140102、20140103，廣西壯族自治區(qū)花紅藥業(yè)股份有限公司）。

2 方法與結(jié)果

21 色譜條件 色譜柱：Zorbax XDB-C18色譜柱（46×150mm，5μm）；流動相：甲醇-水（60∶40）；檢測波長：236nm；柱溫：30℃；流速：10ml/min；進(jìn)樣量10μl。

22 對照品溶液的制備 精密稱取梣酮對照品100mg，置于20ml量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，作為貯備液（梣酮濃度為0500mg/ml），精密量取貯備液1ml，置于50ml量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，即得梣酮濃度為0010mg/ml的對照品溶液。

23 供試品溶液的制備 取本品適量，經(jīng)045μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

24 陰性對照品的制備 按規(guī)定制法制備缺白鮮皮的陰性樣品，再按“23”項(xiàng)下制備方法制備陰性對照品溶液。

25 [JP+1]系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 分別取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液按上述色譜條件進(jìn)樣，進(jìn)樣量為10μl。在本實(shí)驗(yàn)條件下，梣酮的保留時(shí)間約為100min，梣酮與其相鄰峰的分離度>15，以梣酮計(jì)算理論塔板數(shù)不低于3000，供試品溶液與對照品溶液色譜在同一保留時(shí)間位置上有相應(yīng)色譜峰，陰性對照品色譜圖中無梣酮的色譜峰，陰性無干擾。

26 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取梣酮對照品溶液（C=0010mg/ml）2、5、10、15、20、25μl進(jìn)樣，按上述色譜條件測定色譜峰面積，以峰面積A對進(jìn)樣量（μg）進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得線性回歸方程為：A=2878×103X-2936，R=09999。梣酮在002～025μg，與峰面積線性關(guān)系良好。

27 精密度試驗(yàn) 精密吸取梣酮對照品溶液（C=0010mg/ml）10μl，連續(xù)進(jìn)樣5次測定，梣酮峰面積的RSD為054%，表明儀器精密度良好。

28 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液（20140101批樣品），分別于0、4、8、24h進(jìn)樣10μl測定，梣酮峰面積值RSD為025%，表明供試品溶液在24h有良好的穩(wěn)定性。

29 重復(fù)性試驗(yàn) 對同一批金松止癢洗液（20140101批）平行制備5份供試品溶液，分別進(jìn)樣測定，計(jì)算其梣酮含量，其RSD為170%，表明該方法的重復(fù)性良好。

210 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取同一批金松止癢洗液（20140101批）（含梣酮1020μg/ml）6份，各取約50ml，每份等量加入梣酮酸貯備液（C=0500mg/ml）10ml，按“23”項(xiàng)下進(jìn)行樣品制備并測定，計(jì)算回收率。梣酮的平均回收率為9851%，RSD為091%，結(jié)果見表1。

3 討論

金松止癢洗液為純中藥制劑，由9味中藥組成，成分復(fù)雜，其對應(yīng)白鮮皮的有效成分有梣酮、黃酮醇等，經(jīng)預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，黃酮醇含量測定雜質(zhì)干擾嚴(yán)重，色譜分離度不理想，而梣酮含量較高，其色譜峰峰型、分離度都比較理想，故選定梣酮作為該制劑的含量測定成分。在流動相的選擇方面，嘗試過甲醇-水不同比例流動相，經(jīng)過比較，按藥典收載的白鮮皮藥材梣酮含量測定方法甲醇-水（60∶40），峰型尖銳，分離度理想，分析時(shí)間適宜，故予以采用。本文建立了金松止癢洗液中梣酮的含量測定方法，所建方法簡便、準(zhǔn)確、可行，重現(xiàn)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

[1] 陳發(fā)奎.常用中草藥有效成分含量測定[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1997：517.

[2] 原春蘭，楊得鎖.RP-HPLC測定白鮮皮中梣酮含量[J].中國中藥雜志，2006，31（12）：992-994.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

（收稿日期：20140915）