復方護肝解酒晶解酒護肝作用的研究

王志萍， 雷曉翠， 鄧家剛 ， 夏 星， 趙斌斌， 王美琪

(1. 廣西中醫(yī)藥大學藥學院，廣西 南寧530001;2. 廣西中藥藥效研究重點實驗室，廣西 南寧530001;3. 廣西高校中藥制劑共性技術(shù)研發(fā)重點實驗室，廣西南寧530001)

復方護肝解酒晶由壯藥余甘果、萬壽果(枳椇子)、杭菊花、葡萄籽、檸檬、車前子、鐵皮石斛、羅漢果及陳皮等藥食兩用［1］的藥材組成，原方為廣西中醫(yī)藥大學鄧家剛教授的臨床經(jīng)驗方，臨床上主要用于防醉酒和解醉酒具有較好療效。方中的藥材均具有不同程度的護肝解酒作用，如枳椇子水提液給小鼠灌胃后，可顯著降低血液中乙醇的濃度，明顯降低肝組織中MDA 水平［2］;余甘果水提醇沉物對D-半乳糖胺所致急性肝損傷具有明顯的保護作用［3］，而且其主要成分為沒食子酸，對肝臟具有一定的保護作用［4］。

為了進一步驗證復方護肝解酒晶的護肝解酒作用，筆者開展了藥效學實驗研究，通過直接給予小鼠致醉劑量的食用酒造模，觀察其翻正反射情況，記錄酒后醉酒維持時間，測定肝組織中乙醇脫氫酶 (ADH)活力及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、甘油三酯(TG)水平，然后測定小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性。

1 試藥與儀器

1.1 試藥 復方護肝解酒晶(廣西中醫(yī)藥大學現(xiàn)代中藥制劑工程中心，批號20131215)，其高劑量組配制方法為稱取復方護肝解酒晶適量，加純凈水溶解，配成0.36 g/mL的藥液，即小鼠給藥量7.2 g/kg，相當于19.6 g(藥材)/kg;中劑量組配制方法為稱取復方護肝解酒晶高劑量藥液適量，加純凈水稀釋成0.18 g/mL 的藥液，即小鼠給藥量3.6 g/kg，相當于9.8 g (藥材)/kg;低劑量組配制方法為稱取復方護肝解酒晶中劑量藥液適量，加純凈水稀釋成0.09 g/mL 的藥液，即小鼠給藥量1.8 g/kg，相當于4.9 g (藥材)/kg;紅星二鍋頭酒(56°，北京紅星股份有限公司，批號20111101);海王金樽片(深圳海王健康科技發(fā)展有限公司，批號20120503);磷酸氫二鈉為分析純(成都市科龍化工試劑廠，批號0120522);磷酸二氫鈉為分析純(天津博迪化工股份有限公司，批號20111006)?？捡R斯亮藍、乙醇脫氫酶(ADH)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST/GOT)、丙二醛(MDA)、還原型谷胱甘肽(GSH)測試盒(南京建成生物工程研究所，批號分別為20140113、 20140115、 20131223、 20131228、 20140112、20140111);甘油三酯測定試劑盒(酶偶聯(lián)比色法/單試劑型，浙江東甌診斷產(chǎn)品有限公司，批號2013110023)。

1.2 動物 昆明種小鼠，雄性，體質(zhì)量(20 ±2)g (廣西醫(yī)科大學實驗動物中心，實驗動物許可證號SCXK ［桂］2009-0002)。

1.3 儀器 TU-1901 雙光束紫外可見光光度計(北京普析通用儀器有限公司);YN-80P 制冰機(上海英紐特制冷設(shè)備有限公司);酶標儀(美國BioTek 公司);一次性使用無菌注射器(浙江歐健醫(yī)用器材有限公司);采樣容器為試管(姜堰市永康醫(yī)療器械廠)。

2 試驗方法

2.1 小鼠醉酒量的確定 取小鼠30 只，隨機分為3 組，每組10 只，分別以二鍋頭0.12、0.14、0.16 mL/10 g 灌胃，觀察其步態(tài)和活動情況，記錄翻正反射消失和恢復時間，根據(jù)實驗結(jié)果來確定小鼠的醉酒量［5-6］。

2.2 解酒護肝作用研究 取小鼠84 只，隨機分為6 組，設(shè)置空白對照組、模型對照組、海王金樽對照組、復方護肝解酒晶高劑量組、中劑量組、低劑量組，每組14 只，按“2.1”項下的最佳給酒量灌服二鍋頭，而空白對照組灌服以等體積的純凈水。30 min 后，空白對照組和模型對照組灌服純凈水20 mL/kg，陽性對照組灌服海王金樽2.0 g/kg，復方護肝解酒晶高、中、低劑量組分別按7.2、3.6、1.8 g/kg 灌服。

然后，觀察并記錄小鼠步態(tài)情況，記錄其翻正反射消失［7-8］和恢復時間，計算耐受(從灌胃二鍋頭至翻正反射完全消失的時間)和醉酒維持時間(從翻正反射完全消失到完全恢復的時間)。灌酒后禁食12 h，24 h 后眼球取血，離心5 min (轉(zhuǎn)速3 500 r/min)，取上清液，按試劑盒操作說明測定血清中ALT 和AST 活性。然后，斷頸處死小鼠，立即取出肝臟，PBS 緩沖液洗滌并用濾紙吸凈，精密稱定，剪碎，加PBS 緩沖液，勻漿后離心5 min (轉(zhuǎn)速3 500 r/min)，取上清液，制成10%肝勻漿上清液，測定ADH 活性以及MDA、GSH、TG 水平。

3 實驗結(jié)果

3.1 小鼠醉酒量的確定結(jié)果 由表1 可知，小鼠灌酒后，均出現(xiàn)步態(tài)不穩(wěn)和活動量減少現(xiàn)象。其中，第1 組淺睡，腹呼吸明顯;第2 組翻正反射全部消失，出現(xiàn)沉睡現(xiàn)象;第3 組在灌酒后24 h 內(nèi)出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。因此，本實驗選擇第2 組的0.14 mL/10 g 為適宜灌酒量。

3.2 小鼠解酒護肝作用研究結(jié)果 由表2 ～表5 可知，與模型組相比，復方護肝解酒晶高劑量組能縮短小鼠的醉酒維持時間，有顯著性差異(P ＜0.05)，而高、中劑量組能使小鼠肝組織中ADH 活力顯著增加(P ＜0.05)，顯著提高GSH 水平(P ＜0.05)，顯著降低MDA 和TG 水平和血清中AST 和ALT 活力(P ＜0.05)。

表1 小鼠醉酒量的確定結(jié)果(±s，n=10)

注:耐受時間為從灌胃酒精至翻正反射完全消失的時間;醉酒維持時間為從翻正反射消失到恢復的時間

組別 每10 g 給酒量/mL耐受時間/min醉酒維持時間/min醉酒率/%死亡率/%1 0.12 31.7 ±9.4 139.5 ±31.73 60 0 2 0.14 22.9 ±7.58 249.8 ±59.84 100 0 3 0.16 11.5 ±6.62 340.5 ±26.8 100 20

表2 復方護肝解酒晶對小鼠醉酒時間的影響(±s)

表2 復方護肝解酒晶對小鼠醉酒時間的影響(±s)

注:與模型組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01

組別 例數(shù) 耐受時間/min 醉酒維持時間/min空白組 14——模型組 14 14.21 ±10.71 212.57 ±22.49陽性組 12 26.33 ±40.00 167.33 ±61.11△△高劑量組 14 27.93 ±22.72 167.14 ±41.46△中劑量組 13 28.54 ±4.73 192.23 ±57.10低劑量組14 17.36 ±0.96 188.34 ±35.62

表3 復方護肝解酒晶對小鼠肝組織中ADH 活力的影響(±s)

表3 復方護肝解酒晶對小鼠肝組織中ADH 活力的影響(±s)

注:與空白組比較，* P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與模型組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01。高劑量組原有14 只，但有6 只在灌胃時，酒精進入氣管而死亡，故最終只有8 只，下同

組別 例數(shù) ADH 活力/(U·mgprot -1)14 27.78 ±16.02模型組 10 17.61 ±5.01*陽性組 14 27.77 ±17.25△高劑量組 8 26.58 ±8.36△中劑量組 14 27.27 ±10.79△低劑量組空白組10 24.99 ±9.58

表4 復方護肝解酒晶對小鼠血清中AST 和ALT 活力的影響(±s)

表4 復方護肝解酒晶對小鼠血清中AST 和ALT 活力的影響(±s)

注:與空白組比較，* P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與模型組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01

組別 例數(shù) AST 活力/(U·L -1) ALT 活力/(U·L -1)14 37.06 ±7.94 32.89 ±21.84模型組 10 47.28 ±13.89* 51.62 ±15.09*陽性組 14 36.52 ±8.17△ 38.18 ±11.21△高劑量組 8 36.28 ±8.79△ 34.61 ±10.12△中劑量組 14 35.41 ±8.44△ 26.24 ±7.64△△低劑量組空白組10 34.87 ±8.58 34.90 ±18.06

表5 復方護肝解酒晶對小鼠肝組織中GSH、MDA、TG水平的影響(±s)

表5 復方護肝解酒晶對小鼠肝組織中GSH、MDA、TG水平的影響(±s)

注:與空白組比較，* P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與模型組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01

組別 例數(shù)GSH/(U·mgprot -1)MDA/(U·mgprot -1)TG/(U·mgprot -1)14 0.078 ±0.047 1.494 ±1.235 0.128 ±0.052模型組 10 0.041 ±0.027* 2.784 ±1.077* 0.205 ±0.077*陽性組 14 0.077 ±0.049△1.648 ±1.415△ 0.144 ±0.063△高劑量組 8 0.076 ±0.033△1.578 ±1.321△ 0.142 ±0.036△中劑量組 14 0.076 ±0.046△ 1.737±0.686△△0.152 ±0.064△低劑量組 10 0.074 ±0.084 1.764 ±0.639△空白組0.165 ±0.070

4 討論

復方護肝解酒晶是以天然水果及衛(wèi)生部公布的藥食兩用或可用于保健食品的中藥為原料，加上適宜的輔料制備而成，不僅可起到很好的解酒作用，同時還有護肝作用。

本實驗發(fā)現(xiàn)，復方護肝解酒晶高、中劑量組可顯著升高ADH 活性(P ＜0.05)，加快乙醇在體內(nèi)的代謝。由于在乙醇代謝過程中，ADH 起到重要作用，因此根據(jù)其活性可判斷乙醇在體內(nèi)的代謝速度［9］，并能顯著抑制肝細胞TG和MDA 水平的升高(P ＜0.05)，顯著增加GSH 水平(P＜0.05)。乙醇可導致磷酸甘油增多，從而促進TG 合成，同時激活氧分子，產(chǎn)生大量氧自由基，致使肝細胞膜的脂質(zhì)過氧化及體內(nèi)GSH 的耗竭［10］，而且它還能直接與GSH結(jié)合［11］，消耗后者的量，使其抗氧化能力減弱，導致MDA 水平升高，顯著降低血清中AST 和ALT 活力(P ＜0.05)，它們主要存在于肝細胞中，當肝臟受損時，肝臟中的轉(zhuǎn)氨酶會進入血液，引起血清中兩者水平升高。正常情況下，肝內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶的含有量約為血液中的100 倍，但當肝臟受損時，1%的肝細胞壞死就可使血清轉(zhuǎn)氨酶的活性升高1 倍［12］。因此，轉(zhuǎn)氨酶活性的升高是肝臟損害的重要標志。

綜上所述，復方護肝解酒晶具有顯著的解酒和護肝作用。

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