豬圓環(huán)病毒2型自然感染條件下的高致病豬藍(lán)耳病免疫效果調(diào)查

王克才，李祝田，鄭洪玲，于長(zhǎng)泳，楊國(guó)麗，張 儷，安鵬威，李紅魁

（1.遼寧省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 沈陽(yáng) 110164；2.遼寧省瓦房店市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，遼寧 瓦房店 116300；3.遼寧省鐵嶺市畜產(chǎn)品安全檢測(cè)站，遼寧 鐵嶺 112000；4.遼寧省畜牧業(yè)經(jīng)濟(jì)管理站，遼寧 沈陽(yáng) 110032）

豬圓環(huán)病毒2型自然感染條件下的高致病豬藍(lán)耳病免疫效果調(diào)查

王克才1，李祝田2，鄭洪玲1，于長(zhǎng)泳1，楊國(guó)麗1，張 儷3，安鵬威4，李紅魁1

（1.遼寧省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 沈陽(yáng) 110164；2.遼寧省瓦房店市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，遼寧 瓦房店 116300；3.遼寧省鐵嶺市畜產(chǎn)品安全檢測(cè)站，遼寧 鐵嶺 112000；4.遼寧省畜牧業(yè)經(jīng)濟(jì)管理站，遼寧 沈陽(yáng) 110032）

田間狀態(tài)下對(duì)可能遭受豬圓環(huán)病毒2型自然感染的10窩99頭仔豬，于斷奶后30日齡進(jìn)行高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗免疫，并分別于免疫前的28日齡、免疫后的56日齡和94日齡采血，進(jìn)行豬圓環(huán)病毒2型和高致病性豬藍(lán)耳病的病毒核酸和抗體檢測(cè)。結(jié)果顯示，豬群圓環(huán)病毒2型病毒核酸和抗體陽(yáng)性檢出率，3次分別為3.0%和14.1%、13.1%和96.0%、98.0%和98.0%；高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸和抗體陽(yáng)性檢出率，3次分別為0和97.0%、10.1%和61.6%、30.3%和94.9%。結(jié)果顯示，斷奶仔豬群在受到豬圓環(huán)病毒2型自然感染狀態(tài)下，進(jìn)行高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗免疫后26 d時(shí)，抗體合格率未達(dá)到國(guó)家規(guī)定的70%標(biāo)準(zhǔn)，免疫后64 d時(shí)，抗體合格率明顯高于70%。

豬圓環(huán)病毒2型；自然感染；高致病性豬藍(lán)耳病；免疫；效果

豬圓環(huán)病毒2型（Porcine circovirus type 2，PCV 2）是現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)十分重要的免疫抑制性病原之一。PCV2感染所引起的斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合癥（PMWS）、繁殖障礙（流產(chǎn)）、豬皮炎腎病綜合征（PDNS）、呼吸道病綜合征（PRDC）、增生性和壞死性肺炎（PNP）和先天性顫抖等，統(tǒng)稱為豬圓環(huán)病毒?。≒VCD）或豬圓環(huán)病毒相關(guān)性疾?。≒VCAD）。由PCV 2感染所引起的斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭癥（PMWS），流行面廣、危害性大，而且可能導(dǎo)致其他疫病免疫失敗，嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)健康發(fā)展。為探究田間狀態(tài)下豬圓環(huán)病毒2型自然感染豬群進(jìn)行高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗免疫的效果如何，本文開展了本次調(diào)查，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)豬 試驗(yàn)選擇具有豬圓環(huán)病毒2型感染病史的某種豬場(chǎng)進(jìn)行。由該場(chǎng)確定2013年6月3日～5日出生的10窩105頭仔豬群，作為特定的試驗(yàn)調(diào)查群體。

1.1.2 免疫用的疫苗 高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗（JXA1-R株），購(gòu)自國(guó)內(nèi)某生物制品公司（批號(hào)：1211027-1）。

1.1.3 主要檢測(cè)試劑 豬圓環(huán)病毒2型抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自北京世紀(jì)元亨生物技術(shù)公司（批號(hào)：PCV20130508E）。

豬2型圓環(huán)病毒核酸熒光PCR檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自達(dá)安基因生物技術(shù)公司（批號(hào)：2013001、2013002）。

高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自北京生科尚儀生物技術(shù)公司（批號(hào)：20130501）。

豬繁殖與呼吸綜合征抗體間接ELISA檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自北京天之泰生物技術(shù)公司（法國(guó)LSI公司生產(chǎn)，批號(hào)：5-VETPRA-026、5-VETPRA-027）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)豬處理 選擇該場(chǎng)同期分娩的10窩105頭仔豬作為試驗(yàn)豬，實(shí)行試驗(yàn)前、后對(duì)照的方法。為便于試驗(yàn)，出生后分別打上不同顏色的耳標(biāo)號(hào)，與場(chǎng)內(nèi)同期未參加試驗(yàn)的母豬和仔豬同舍飼養(yǎng),28日齡斷奶。試驗(yàn)豬標(biāo)記具體情況見表1。

1.2.2 參試豬免疫及采樣檢測(cè)程序

1.2.2.1 免疫程序 試驗(yàn)組仔豬達(dá)30日齡時(shí)，進(jìn)行高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗免疫，免疫劑量按疫苗說(shuō)明書要求，每頭仔豬頸部肌肉1 mL（1頭份）,共免疫99頭。

1.2.2.2 采樣程序 所有參試的仔豬分別于28、56和94日齡逐頭采血分離血清至少1 mL∕頭，送遼寧省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室分別進(jìn)行豬圓環(huán)病毒2型ELISA病毒核酸和抗體、高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸和抗體4項(xiàng)檢測(cè)。

1.2.3 臨床觀測(cè)指標(biāo) 試驗(yàn)期間按該場(chǎng)常規(guī)要求實(shí)施生物安全及飼養(yǎng)管理措施，每日觀察豬群精神狀態(tài)、采食狀況是否正常，生長(zhǎng)發(fā)育狀況是否良好，一旦發(fā)現(xiàn)臨床發(fā)病豬，及時(shí)隔離、采樣檢測(cè)。

主要臨床監(jiān)測(cè)指標(biāo)：28日齡斷奶成活率及個(gè)體平均體重，1～3月齡期間發(fā)病及死亡數(shù)，3月齡時(shí)成活率及個(gè)體平均體重。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)程序 依據(jù)豬圓環(huán)病毒2型熒光PCR試劑盒給出的檢測(cè)方法，分別對(duì)采集的豬血清樣品進(jìn)行熒光PCR檢測(cè)和結(jié)果判定。試驗(yàn)成立條件：陽(yáng)性對(duì)照Ct值≤28，陰性對(duì)照Ct值應(yīng)等于none。樣品的熒光PCR擴(kuò)增的Ct值≤35，判定為核酸陽(yáng)性，否則，均判為陰性。

依據(jù)豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測(cè)試劑盒給出的檢測(cè)方法，分別對(duì)采集的豬血清樣品進(jìn)行ELISA抗體檢測(cè)和結(jié)果判定。試驗(yàn)成立條件：陰性對(duì)照平均OD值≤0.15，陽(yáng)性對(duì)照平均OD值≥0.60。計(jì)算該次試驗(yàn)的臨界OD值=陽(yáng)性對(duì)照平均OD值×0.25，樣品OD值≥臨界OD值時(shí)，樣品抗體判為陽(yáng)性，否則，判為陰性。

依據(jù)高致病性豬藍(lán)耳病病毒熒光RT-PCR試劑盒給出的檢測(cè)方法，分別對(duì)采集的豬血清樣品進(jìn)行熒光RT-PCR檢測(cè)和結(jié)果判定。試驗(yàn)成立條件：陽(yáng)性對(duì)照Ct值≤28，陰性對(duì)照Ct值應(yīng)等于none。樣品的熒光PCR擴(kuò)增的Ct值≤30，判定為核酸陽(yáng)性，否則，均判為陰性。

依據(jù)豬繁殖與呼吸綜合征抗體間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒給出的檢測(cè)方法，分別對(duì)采集的豬血清樣品進(jìn)行ELISA抗體檢測(cè)和結(jié)果判定。試驗(yàn)成立條件：樣品的IRPC值＞20時(shí)，判為抗體陽(yáng)性，IRPC值≤20時(shí)，判為抗體陰性。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床觀測(cè)結(jié)果

2.1.1 10窩初生仔數(shù)共105頭，28日齡前死亡6頭，采集病料樣品進(jìn)行圓環(huán)病毒2型病毒核酸和高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸檢測(cè)，結(jié)果檢出圓環(huán)病毒2型病毒核酸和高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸均為陽(yáng)性的1頭，高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸陽(yáng)性的1頭，其他均為陰性。

2.1.2 試驗(yàn)豬斷奶時(shí)99頭稱重總重量為735 kg，平均個(gè)體重為7.42 kg，死亡率為2.86%。

2.1.3 試驗(yàn)豬達(dá)3月齡時(shí)，稱重總重量為4 062 kg，平均個(gè)體重為41.03 kg，臨床觀察有10頭豬發(fā)病，主要表現(xiàn)為精神及采食不佳，體溫升高，生長(zhǎng)發(fā)育不良，漸進(jìn)性消瘦，背毛粗亂無(wú)光，咳喘、頑固性腹瀉、關(guān)節(jié)腫大等癥狀，未發(fā)生死亡。主要臨床監(jiān)測(cè)項(xiàng)目及結(jié)果見表2。

表1 試驗(yàn)分組明細(xì)表Table1 Experimental grouping list

2.2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果

2.2.1 試驗(yàn)豬28日齡斷奶且進(jìn)行高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗免疫前，豬圓環(huán)病毒2型病毒核酸陽(yáng)性檢出率為3.0%，抗體陽(yáng)性率為14.1%；高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸無(wú)陽(yáng)性檢出，抗體陽(yáng)性率為97.0%。檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)詳見表3。

表2 臨床觀測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表Table2 Statistics o f clinical m onitoring result

表3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表Table3 statistical stable of test result in laboratory

2.2.2 試驗(yàn)豬56日齡且進(jìn)行高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗免疫26 d后，豬圓環(huán)病毒2型病毒核酸陽(yáng)性檢出率為13.0%，豬圓環(huán)病毒2型抗體陽(yáng)性率為96.0%；高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸陽(yáng)性檢出率為10.1%，抗體陽(yáng)性率為61.6%。檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)詳見表3。

2.2.3 試驗(yàn)豬94日齡且進(jìn)行高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗免疫64 d后，豬圓環(huán)病毒2型病毒核酸陽(yáng)性檢出率為98.0%，抗體陽(yáng)性率為98.0%；高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸陽(yáng)性檢出率為30.3%，抗體陽(yáng)性率為94.9%。檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)詳見表3。

2.3 結(jié)果分析

2.3.1 仔豬在28日齡斷奶前，一是臨床上表現(xiàn)為各種原因?qū)е碌乃劳雎瘦^高（5.71%）,但發(fā)生豬圓環(huán)病毒2型和高致病性豬藍(lán)耳病感染的比率較低（1.90%）,因此,仔豬的整體生長(zhǎng)發(fā)育水平基本正常。二是通過(guò)28日齡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，2種病毒核酸的陽(yáng)性檢出率很低（3.0%和0）,豬圓環(huán)病毒2型母源抗體陽(yáng)性率較低（14.1%）,高致病性豬藍(lán)耳病抗體陽(yáng)性率很高（97.0%）,表現(xiàn)為三低一高。說(shuō)明高致病性豬藍(lán)耳病母源抗體水平較高且在豬體內(nèi)維持時(shí)間較長(zhǎng)，豬圓環(huán)病毒2型母源抗體在仔豬體內(nèi)維持時(shí)間較短，說(shuō)明這一時(shí)期的仔豬處于豬圓環(huán)病毒2型和高致病性豬藍(lán)耳病病毒感染的低風(fēng)險(xiǎn)時(shí)期。

2.3.2 仔豬斷奶后并于30日齡進(jìn)行高致病性豬藍(lán)耳病免疫之后的2個(gè)月內(nèi)，通過(guò)臨床觀測(cè)和實(shí)驗(yàn)室4個(gè)項(xiàng)目的檢測(cè)，所有指標(biāo)均顯示上升態(tài)勢(shì)。一是臨床上表現(xiàn)為雖然整體生長(zhǎng)水平良好，但群體疑似多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）發(fā)病率較高（10.10%）。二是檢測(cè)的2種病毒核酸陽(yáng)性檢出率和2種病毒抗體均呈明顯上升態(tài)勢(shì)，圓環(huán)病毒2型病毒核酸陽(yáng)性檢出率3次分別為3.0%、13.1%和98.0%，與此同期，高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸陽(yáng)性檢出率分別為0.0%、10.1%和30.3%，豬圓環(huán)病毒2型抗體陽(yáng)性率分別為14.1%、96.0%和98.0%，豬繁殖與呼吸綜合征抗體陽(yáng)性率分別為97.0%（母源抗體）、61.6%和94.9%。說(shuō)明豬群進(jìn)行高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗免疫后，進(jìn)入豬圓環(huán)病毒2型感染活躍期時(shí)，高致病性豬藍(lán)耳病疫苗毒的陽(yáng)性檢出率呈上升態(tài)勢(shì)，相應(yīng)的抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率也從61.6%上升至94.9%。

3 討論與小結(jié)

3.1 討論 豬圓環(huán)病毒2型（PCV-2）是現(xiàn)階段養(yǎng)豬業(yè)普遍關(guān)注的免疫抑制性疫病。該病的發(fā)生及流行具有普遍性、頑固性和嚴(yán)重性。關(guān)于豬圓環(huán)病毒2型感染后引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、呼吸道病綜合征（PRDC）等免疫抑制性綜合征的報(bào)道文獻(xiàn)資料很多[1-2]。其中，有報(bào)道證實(shí)引起此類綜合征的主要元兇是豬圓環(huán)病毒2型與豬藍(lán)耳病病毒的混合或協(xié)同感染[3]；有報(bào)道證實(shí)豬關(guān)于圓環(huán)病毒2型和高致病性豬藍(lán)耳病病毒在豬體內(nèi)均存在病毒抗原與抗體共存現(xiàn)象[4-5]；還有報(bào)道關(guān)于高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗免疫后檢測(cè)疫苗毒持續(xù)期一般為6周[6]。本次田間調(diào)查高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗免疫后2個(gè)月還能檢測(cè)到30%的病毒核酸，說(shuō)明檢出的病毒核酸主要是疫苗毒，如果如此，那么是否可以斷定在豬圓環(huán)病毒2型自然感染條件下，進(jìn)行高致病性豬藍(lán)耳病免疫后，其持續(xù)帶毒現(xiàn)象會(huì)明顯延長(zhǎng)。至于豬圓環(huán)病毒2型感染后對(duì)高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗免疫產(chǎn)生何種影響以及程度如何，將有待于進(jìn)一步開展試驗(yàn)研究驗(yàn)證。

3.2 小結(jié) 本次調(diào)查初步結(jié)論是：斷奶仔豬在受到豬圓環(huán)病毒2型自然感染條件下，進(jìn)行高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗免疫后26 d時(shí)，抗體合格率未達(dá)到國(guó)家規(guī)定的70%標(biāo)準(zhǔn)，免疫后64 d時(shí)，抗體合格率明顯高于70%。

[1][美]斯特勞（Barbara E.St raw）等主編；趙德明等主譯.豬病學(xué)（第9版）[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2008.2：313-318，423-446.

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Investigation immunity effective of the porcine circovirus type 2 of the highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome in natural infection

Wang Kecai1,Li Zhutian2,Zheng Hongl ing1,Yu Changyong,Yang Guol i1, Zhang Li3,An Pengwei4,Li Hongkui1
(1.Animal Epidemic Diseases Control and Prevention Center of Liaoning Province,Liaoning Shenyang 110164; 2.Animal Sanitary cont rol station of Wafangdian City,Liaoning Wafangdian 116300; 3.security detection station of livestock products of Tieling City,Liaoning Tiel ing 112000; 4.Animal husbandry economic management stations in l iaoning province，Liaoning Shenyang 110032)

99 piglets f rom 10 l itters which were probably infected with porcine cirvirus type 2 were immunized with the pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome activated vaccine on the 30th day af ter bir th.Blood were col lected at the 28th,56thand the 94thdays af ter bir th to detects antibody and viral nucleic acid of PCV2 and PRRS2.The test resul ts that,the viral nucleic acid and antibody positive detection rate di f ference were 3.0%and 14.1%、13.1%and 96.0%、98.0% and 98.0%of PCV2,0 and 97.0%、10.1%and 61.6%、30.3%and 94.9%of HP-PRRS.The resul ts suggested that the antibody qual i fied rate didn’t achieve 70%that was formulary count ry af ter immunity HPPRRS S l ive vaccine 26 days,it obviously top 70%af ter immunity HP-PRRS l ive vaccine 64 days when the weaning swinery was ef fected porcine cirvirus type 2 in natural to under take,

Porcine circovirus type 2;Natural ef fective;HP-PRRS;Immunity;Ef fect

S852.65

1672-9692(2015)07-0035-05

2015-04-26

王克才（1965-），男，漢族，專科，高級(jí)獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病防控等工作。