多腫瘤標志物蛋白芯片檢測中AFP在惡性腫瘤中的診斷價值*

夏 煒，單錦露,李 清,許明芳,卿 毅,任 濤，彭 宇，王 東

(第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所腫瘤中心，重慶 400042)

論著·臨床研究

多腫瘤標志物蛋白芯片檢測中AFP在惡性腫瘤中的診斷價值*

夏 煒，單錦露,李 清,許明芳,卿 毅,任 濤，彭 宇，王 東△

(第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所腫瘤中心，重慶 400042)

目的 分析在各組人群中多腫瘤標志物蛋白芯片中甲胎蛋白(AFP)的表達情況以及與其他指標的伴隨情況，并探討其臨床意義。方法收集整理該院2003年12月至2011年7月可供分析的25 076例多腫瘤標志物蛋白芯片檢測結果，并分析蛋白芯片中AFP在各組人群表達情況和在各種腫瘤中的升高情況，以及AFP升高伴隨其他檢測指標升高在腫瘤中的分布情況。結果在惡性腫瘤患者中AFP的升高率(17.3%)明顯較良性病變患者(15.3%)及正常體檢者(12.1%)高，其中，AFP的升高率最高的為肝癌(54.3%)，且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；其次是卵巢癌與胃癌，它們的升高率分別為18.8%和17.1%；AFP伴隨升高指標以CA125最為常見，其次為CA199、CEA、Ferritin、CA242、CA15-3，CA242和CA15-3間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.01)。AFP/CA125伴隨最常見于胰腺癌(60.5%)和卵巢癌(46.2%)，AFP/CA19-9伴隨最常見于胰腺癌(58.1%)和肝癌(43.7%)。AFP+CA19-9+CA125聯(lián)合最常見于肝癌(17.9%)。結論AFP單項指標升高對肝癌的診斷具有較高價值，AFP伴隨或聯(lián)合CA19-9、CA125有助于提高胰腺癌和卵巢癌的診斷。

腫瘤標記，生物學；多腫瘤蛋白芯片；甲胎蛋白類；惡性腫瘤

近年來，由于受到環(huán)境、社會等多種因素的影響，惡性腫瘤發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢，其已成為危及人類生命健康的主要殺手之一。由于惡性腫瘤在早期常缺乏典型的臨床癥狀和體征，以及診斷手段與指標的局限性，患者一旦確診為惡性腫瘤多屬中晚期。因此，如何及早發(fā)現(xiàn)腫瘤及癌前病變已成為腫瘤學者亟待解決的重要課題。腫瘤標志物是腫瘤細胞在發(fā)生、發(fā)展、浸潤及轉移遷徙過程中分泌的具有生物活性的物質，及時準確地檢測腫瘤標志物對提高臨床腫瘤診療水平具有重要的意義。多腫瘤標志物蛋白芯片是腫瘤標志檢測的一個新型手段，其具有檢測迅速、操作簡便，以及高通量、聯(lián)合指標分析等優(yōu)點，之前許多文獻報道探討了多項指標聯(lián)合檢測對某一類型腫瘤的診斷價值[1-4]，而對其中單項指標在多種腫瘤中的診斷意義尚缺乏大宗樣本的系統(tǒng)研究。因此，本文對資料完整的25 076例多腫瘤標志物蛋白芯片結果進行了回顧性的分析，并著重分析了甲胎蛋白(AFP)的升高在各組人群及各種腫瘤中的分布情況，以及與其他腫瘤標志物的伴隨情況，從循證醫(yī)學角度首次為臨床深入了解AFP的診斷價值提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院2003年12月至2011年7月檢測的多腫瘤標志物蛋白芯片38 600例次，其中，診斷不明確者4 229例，同一患者多次檢測的11 106例次，可供分析的病例共計25 076例，其中，男15 993例，女9 083例;年齡12～94歲，平均(55.82±2.63)歲。上述所有的惡性腫瘤患者全部經過了病理學確診。

25 076例可供分析的病例中，惡性腫瘤組(腫瘤組)11 485例，其中，男7 226例，女4 259例，平均年齡(55.86±2.48)歲；包括肝癌1 069例，胃癌375例，卵巢癌208例，腸癌1 178例，肺癌4 004例，前列腺癌63例，乳腺癌477例，食管癌785例，胰腺癌266例。良性病變組(良性組)共3 803例，其中，男2 248例，女1 555例，平均年齡(55.91±2.55)歲。正常體檢組(正常組)9 788例，其中，男6 519例，女3 269例，平均年齡(55.73±2.66)歲。3組研究對象在性別、年齡等方面比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.01)。

1.2 檢測方法 抽取空腹肘靜脈血2 mL，分離血清，再嚴格按說明書運用HD2001A生物芯片檢測儀進行檢測，使用的試劑盒為C12型腫瘤診斷用蛋白芯片試劑盒(簡稱C12，浙江湖州數(shù)康生物科技有限公司)。共檢測的12種標志物包括AFP、CA125、CA19-9、CA242、CA153、NSE、Ferritin、CEA、PSA、fPSA、HGH、β-HCG。它們正常參考值范圍為:AFP<20 ng/mL，CA125<35 U/mL，CA19-9<35 U/mL，CA242<20 U/mL，NSE<13 ng/mL，F(xiàn)erritin<219 ng/mL(女) 和Ferritin<322 ng/mL(男)，CEA<5 ng/mL，CA153<35 U/mL，PSA<5 ng/mL，fPSA<1 ng/mL，HGH<7.5 ng/mL，高于正常參考值判定為升高。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 19.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行分析處理，應用t檢驗對年齡進行分析，其他計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P<0.01為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 AFP升高在各組人群中的分布情況 11 485例惡性腫瘤患者中，AFP升高1 984例(17.3%)；3 222例良性病變中，AFP升高581例(15.3%)；9 788例正常體檢者中，AFP升高1 182例(12.1%)。良性組的AFP升高率與正常組比較顯著升高(P<0.01)；腫瘤組的AFP升高率較良性組及正常組都顯著升高，且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表1。

表1 AFP升高在各組人群中的分布情況

腫瘤患者11 485例，各種腫瘤中AFP升高情況見表2和圖1。如表2所示，AFP升高在肝癌中發(fā)生率最高(54.3%)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；其次為卵巢癌(18.8%)、胃癌(17.1%)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，但卵巢癌和胃癌間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.01)。

2.2 AFP伴隨其他指標升高及分布情況 各組受檢者中AFP升高，并伴隨有其他檢測指標升高的情況為：腫瘤組1 074例，良性組241例，正常組62例(表3)。由表3可知，腫瘤組AFP升高伴隨有其他指標升高發(fā)生率明顯高于良性組及正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；良性組AFP升高伴隨有其他指標升高發(fā)生率明顯高于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

1 984例AFP升高的腫瘤患者中，其他指標伴隨升高具體情況見表4和圖2。由表4可見，CA125伴隨升高率高于其他指標伴隨升高例數(shù)，其后依次為CA199、CEA、Ferritin、CA242、CA15-3，CA242和CA15-3間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.01)，但高于β-HCG、HGH、f-PSA、PSA及NSE。AFP/CA125伴隨最常見于胰腺癌(60.5%)和卵巢癌(46.2%)，AFP/CA19-9伴隨最常見于胰腺癌(58.1%)和肝癌(43.7%)(表5)。

表2 AFP升高在各種腫瘤中的分布情況

圖1 AFP升高在各種腫瘤中的分布圖

表3 AFP升高伴隨其他指標升高在各組中的分布情況

表4 其他指標伴隨AFP升高具體情況

表5 AFP常見伴隨升高指標及其在各種腫瘤中的分布

2.3 AFP升高伴隨多項檢測指標升高情況 在3組患者1 984例AFP升高的病例中，最常見的為伴隨其他1項(427例)、2項指標升高(248例)，其次為伴隨其他3項(177例)、4項指標升高(104例)，見表6。

圖2 AFP升高時其他指標伴隨升高情況

表6 伴隨升高的指標項數(shù)分布情況

表7 AFP常見具體聯(lián)合升高情況

2.4 AFP升高聯(lián)合多項檢測指標升高情況 在1 984例AFP升高的病例中，AFP常見具體聯(lián)合升高情況中，CA125+AFP聯(lián)合升高例數(shù)最多241例(12.15%),明顯高于其他組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，見表7。AFP+CA19-9+CA125最常見于肝癌(17.9%)，明顯高于其他腫瘤,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，見表8。

表8 AFP常見伴隨升高情況在各種腫瘤中的分布

3 討 論

3.1 AFP的定義及診斷價值 人體在胚胎時期的卵黃囊與肝細胞共同合成的一種糖蛋白叫做AFP。胎兒在第11周由于卵黃囊發(fā)生變性而失去了合成功能，肝臟隨之成為產生AFP的主要場所。新生兒在出生約2周后AFP值在血液中逐漸降低，在出生后l～2年即可降至成人水平，成人血清中AFP值應不超過20 μg/L。但是當人體肝細胞發(fā)生癌變時，肝癌細胞和再生的肝細胞又恢復合成AFP的能力，并且它在血清中的水平伴隨著患者病情持續(xù)惡化而迅速增加；目前，作者已經把AFP作為公認的診斷肝癌的最佳標志物[5]。除常見于原發(fā)性肝癌外，AFP升高還可出現(xiàn)在急性病毒性肝炎、肝硬化、惡性畸胎癌、胃腸道惡性腫瘤、生殖系統(tǒng)惡性腫瘤以及孕婦等；但AFP水平一般不會超過300 ng/mL。孕婦血清AFP常常出現(xiàn)異常升高，應考慮胎兒脊柱裂、胎兒宮內窒息、先兆流產等[6]。

3.2 AFP在肝癌中的診斷價值 原發(fā)性肝癌惡性程度高，患者在確診時大多已經屬于中晚期，患病后生活質量往往很差、生存時間短。因此，實現(xiàn)對原發(fā)性肝癌的早期及時的診斷非常重要。從理論上講，影像檢查能發(fā)現(xiàn)1 g(109個癌細胞)以上的實體瘤，腫瘤標志物則可能檢查出1 mg(106個癌細胞)的腫瘤。若按腫瘤細胞平均倍增時間為60 d計算，腫瘤標志物可比影像學檢查早2年左右發(fā)現(xiàn)腫瘤[7]。很多臨床經驗發(fā)現(xiàn)在腫瘤發(fā)生、發(fā)展的早期，血液中腫瘤標志物可能已經有不同程度的升高，但是影像學等檢查還沒呈現(xiàn)出陽性結果，因而腫瘤標志物檢測被認為是早期發(fā)現(xiàn)腫瘤的最有價值的指標[8]。由圖1可更直觀地看出AFP在肝癌中的陽性表達顯著高于其他腫瘤標志物。由表1可知，腫瘤組的AFP升高顯著高于良性組與正常組(P<0.001)；AFP作為原發(fā)性肝癌PHC的輔助診斷指標應用較廣，但仍有30%～40%的肝癌患者呈低水平表達，15%～20%的假陰性率[9]；因此，在臨床工作中僅憑AFP一項指標來對原發(fā)性肝癌進行診斷，還是很容易出現(xiàn)漏診與誤診。本研究結果顯示AFP升高在惡性腫瘤患者中明顯高于良性病變患者及正常體檢者，而且肝癌最高(54.3%)，在AFP升高的同時常常伴隨有其他的腫瘤標志物的升高，伴隨升高率最高的為伴隨CA125升高，其伴隨升高例數(shù)高于其他指標的伴隨升高例數(shù)，其后依次為CA199、CEA、Ferritin、CA242、CA15-3。其中，AFP+CA19-9+CA125聯(lián)合在中肝癌最常見，其陽性率為17.9%。因此，雖然AFP對原發(fā)性肝癌的檢測靈敏度與特異度較高，但伴隨或聯(lián)合監(jiān)測腫瘤標志物可提高原發(fā)性肝癌的陽性檢出率。

本研究3 222例良性病變中，AFP升高581例(15.3%)；正常體檢者9 788例中，AFP升高1 182例(12.1%)。結果提示在正常體檢的人群中，AFP的陽性率也需得到關注。確診肝癌需要動態(tài)觀察AFP水平的變化，單純血清中檢出AFP陽性不能直接診斷為肝癌；但如果連續(xù)1個月以上AFP水平大于400 ng/L，則應高度考慮肝癌可能，若排除肝炎等其他導致AFP升高的可能，同時結合臨床特征與影像學檢查(B超、CT及MRI)后便可確診。有研究報道，幾乎所有肝炎患者都伴隨有血清AFP不同程度的升高，部分患者在轉氨酶、肝功能恢復正常時，AFP會出現(xiàn)一個峰值[10]；這一研究表明肝細胞修復新生可合成AFP，因此，一般肝炎患者的AFP在轉氨酶恢復正常后也會逐漸降低恢復正常，如果出現(xiàn)不下降而持續(xù)升高的情況時，應考慮有肝臟發(fā)生癌變的可能。當臨床中出現(xiàn)體檢AFP陽性患者時，需完善肝臟CT、全身PET、乙型肝炎病毒、肝功能等檢查。肝癌的早期篩查針對肝硬化及其他高危人群，每6個月1次肝臟超聲檢查。AFP>400 ng/mL超過2周時，肝癌的診斷仍需借助影像學才能明確。

3.3 AFP在胃癌、卵巢癌、胰腺癌中的診斷價值

3.3.1 AFP在胃癌中的診斷價值 自Takano等于1970年報道首例AFP陽性胃癌以來，已有不少學者進行了這方面的研究，其中,主要來自日本的文獻報道；已有研究明確報道AFP升高約占全部胃癌的1%～6%[11]。由表2可知，AFP升高除最常見的肝癌外，也可出現(xiàn)在其他類型腫瘤中。其中，陽性率較高的為卵巢癌(18.8%)和胃癌(17.1%)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，但卵巢癌和胃癌間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.01)。胃癌的比例僅次于肝癌與卵巢癌。因而，AFP在協(xié)助診治胃癌中有一定意義。

3.3.2 AFP在卵巢癌中的診斷價值 除原發(fā)性肝癌外，AFP升高也常見于畸胎瘤及卵巢胚胎性腫瘤。CA125由Bast等在1983年從上皮性卵巢癌抗原發(fā)現(xiàn)的可與單克隆抗體OC125結合的一種糖蛋白[12]。它是目前公認的卵巢癌的特異性腫瘤標志物，在健康成年婦女的血清中，其水平一般不會超過35 U/mL。它不僅出現(xiàn)在卵巢癌中，在宮頸癌、乳腺癌與肺癌患者中有時也會升高[13]。本研究中卵巢癌除了AFP單項指標(18.8%)比例較高外，與CA125伴隨指標中也較常見。AFP/CA125伴隨常見于卵巢癌(46.2%)；因而AFP及AFP伴隨聯(lián)合AFP、CA125對協(xié)助診斷卵巢癌均有一定臨床意義。AFP伴隨或聯(lián)合CA19-9、CA125有利于提高胰腺癌、卵巢癌診斷陽性率。

3.3.3 AFP在胰腺癌中的診斷意義 CA19-9是一種特異性診斷胰腺癌黏蛋白型的糖類蛋白腫瘤標志物。主要由消化道細胞分泌，正常人血清中水平極微[14]。有研究表明原發(fā)性肝癌的CA19-9的陽性率約為72.4%[15]。在AFP陰性的病例中CA19-9也有一定的陽性檢出率。本研究結果顯示,AFP/CA125伴隨最常見于胰腺癌(60.5%)。本研究中AFP/CA19-9伴隨最常見于胰腺癌(58.1%)和肝癌(43.7%)。2項研究結果提示AFP伴隨CA19-9有助于提高胰腺癌的診斷。

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Systematic analysis of alpha-fetoprotein within serum multiple tumor markers chip and its clinical significance in malignant tumor diagnosis*

XiaWei,ShanJinlu,LiQing,XuMingfang,QingYi,RenTao,PengYu,WangDong△

(CancerCenter,ResearchInstituteofSurgery,DapingHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400042,China)

Objective To investigate the expression of alpha-fetoprotein(AFP) in various people and situations along with other item of multiple tumor marker protein chip,and to explore its clinical significance.MethodsTotally 25 076 cases detected with multiple tumor markers chip from December 2003 and July 2011 were collected.The expression of AFP and its combination with other item of multiple tumor marker protein chip were analyzed in malignant tumors and other people.ResultsElevated AFP in patients with malignant tumors(17.3%) was significantly higher than in benign lesions(15.3%) and normal persons(12.1%),among them,the AFP rise rate was highest for liver cancer (54.3%),and the difference was statistically significant (P<0.01)，followed by ovarian cancer(18.8%) and gastric cancer(17.1%).The positive of AFP was commonly combined with other item elevated in patients with malignant tumors.The most common accompanied item was CA125,followed by CA199，CEA，F(xiàn)erritin，CA242，CA15-3，there was no statistically significant between CA242 and CA15-3(P>0.05).AFP/CA125 was most common pancreatic cancer (60.5%) and ovarian cancer (46.2%),AFP/CA19-9 was most common in pancreatic cancer (58.1%) and liver cancer (43.7%).AFP + CA19-9 + CA125 was most common in liver cancer (17.9%).ConclusionAFP increase alone was significantly valuable to diagnosis liver cancer，moreover it combined with CA19-9 or CA125 may help to improve the positive rate in pancreatic and ovarian cancer.

tumor marker,biological;multiple tumor marker protein chip;alpha-fetoprotein;malignancy

10.3969/j.issn.1671-8348.2015.35.019

國家自然科學基金資助項目(81101993)。

:夏煒(1985-)，主治醫(yī)師，碩士，主要從事肺癌研究?！?/p>

，Tel：13708380988；E-mail：dongwang64@hotmail.com。

R73.31

A

1671-8348(2015)35-4958-04

2015-06-21

2015-08-18)