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      不同貯藏時間及花瓣張開角度對番茄花粉活力的影響

      2015-01-08 19:24:52李定藍(lán)唐太菊李玥梁鳳嬌王輝
      長江蔬菜·學(xué)術(shù)版 2014年8期
      關(guān)鍵詞:番茄角度

      李定藍(lán)+唐太菊+李玥+梁鳳嬌+王輝

      摘 要:為了研究不同貯藏時間及花瓣張開角度對花粉活力的影響,采用I2-KI染色法和蔗糖培養(yǎng)基培養(yǎng)法對花瓣張開角度為A(0°~45°)、B(45°~90°)和C(90°~180°)的番茄花粉活力及花粉管長度進行測定。試驗結(jié)果表明,不同貯藏時間及花瓣張開不同角度間的花粉活力存在顯著差異?;ò陱堥_角度A的花粉活力隨著貯藏時間增加呈先升高后降低的趨勢,以室溫貯藏3 d的花粉染色率最高?;ò陱堥_角度B和C則以采摘當(dāng)天活力最強,5 d后所有花粉活力均低于5%,基本喪失萌發(fā)能力。新采摘的有活力花粉散落于蔗糖15 g/L+H3BO3 0.03 g/L+CaCl2 0.02 g/L+瓊脂6 g/L的培養(yǎng)基表面,1~2 min即開始萌動,20 min時,花粉管長度已達(dá)到花粉粒直徑的2.75倍,60 min時達(dá)到7.5倍。花粉管在培養(yǎng)基上相互接觸會出現(xiàn)相互作用,抑制部分花粉管生長。

      關(guān)鍵詞:番茄;貯藏時間;角度;花粉活力

      中圖分類號:Q944.42 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:1001-3547(2014)16-0039-04

      番茄(Lycopersicon esculentum Mill)為茄科番茄屬漿果類的一年生蔬菜[1]。因其特定的形態(tài)學(xué)和生理學(xué)特性,到目前為止,一代雜交制種多采用人工授粉的方法[2,3]。在授粉時,父本花粉活力直接影響雜交坐果率和雜交種子的產(chǎn)量和品質(zhì)[4]。許多研究者認(rèn)為,番茄花粉活力與花藥的取材時期、貯藏時間和貯藏方法等密切相關(guān)[1]?;ò甑膹堥_角度是判斷授粉時機的形態(tài)參考依據(jù),而花粉的貯藏時間對因花期不遇而造成的遠(yuǎn)距離授粉和異地授粉也有重要參考價值。因此,研究花瓣張開角度及貯藏時間對番茄花粉活力的影響,對指導(dǎo)番茄雜交制種、提高制種產(chǎn)量有一定參考價值。

      目前,針對番茄花粉貯藏的報道較少。王吉慶等[2]研究認(rèn)為,番茄制種可在蕾期去雄,利用干燥器貯藏24 h的花粉于開花當(dāng)天授粉能夠獲得較高的制種產(chǎn)量。此外,對于花藥適宜的取材時期及標(biāo)準(zhǔn)的研究也鮮有報道。試驗以花瓣張開不同角度為外部形態(tài)標(biāo)準(zhǔn),采用I2-KI染色法[6]和蔗糖培養(yǎng)基培養(yǎng)法[7],結(jié)合花藥的貯藏時間,研究不同取材標(biāo)準(zhǔn)下花粉的活力及貯藏時間對花粉活力的影響,為番茄人工雜交制種、花粉貯藏及異地授粉提供參考。

      1 材料與方法

      1.1 試驗材料

      供試材料為番茄自交系。于2011年3月底在內(nèi)江師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院園藝大棚育苗,正常管理,5月中旬現(xiàn)蕾,6月上旬進入盛花期。試驗于盛花期8:00~9:00時,采集花瓣張開角度A為0°~45°、B為45°~90°和C為90°~180°的番茄花朵,分別放入標(biāo)記好的瓷杯,置于干燥器中,保存?zhèn)溆谩?/p>

      1.2 試驗方法

      花粉活力和萌發(fā)率的測定分別采用I2-KI染色法和蔗糖培養(yǎng)基培養(yǎng)法對比試驗,略有改動,測定A、B和C花藥在采集1、3、5 d時的花粉活力和萌發(fā)率。培養(yǎng)基配方為蔗糖15 g/L+H3BO3 0.03 g/L+CaCl2 0.02 g/L+瓊脂6 g/L,至完全溶解;用膠頭滴管吸取溶液2~3滴于凹形載玻片上,搖勻,微凝后迅速蘸取花粉于培養(yǎng)基表面。在30℃恒溫箱中培養(yǎng),每隔2~3 min挑取少量培養(yǎng)材料觀察花粉萌動情況,培養(yǎng)20 min時統(tǒng)計萌發(fā)率,每處理4次重復(fù),每個重復(fù)觀察10個視野,以花粉管長度超過花粉粒半徑作為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn),萌發(fā)(染色)率(%)=已萌發(fā)(染色)的花粉粒數(shù)/觀察花粉??倲?shù)×100%。同時固定2~3個花粉粒分散的視野,保持培養(yǎng)基表面溫度和濕度,連續(xù)測量4次,以統(tǒng)計花粉萌發(fā)速率?;ǚ勖劝l(fā)情況和花粉管長度測定時,采取同樣的方法進行。由于操作時間有長短,時間間隔以4 min為參照,超過4.5 min則記為5 min,不足3.5 min則記為3 min,以此類推,按照實際測量完成時間記錄數(shù)據(jù),時間更真實可靠。

      1.3 數(shù)據(jù)分析

      所有的試驗數(shù)據(jù)用Excel 2003與Spss 13.0軟件進行統(tǒng)計分析。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 I2-KI染色測定法測定花粉活力

      花粉粒的染色程度與淀粉含量的多少有關(guān),花粉活力越強,積累的淀粉等營養(yǎng)成分越多,著色越深。本試驗染色結(jié)果表明(圖1),有活力的花粉被染成深褐色,呈圓球形,萌發(fā)孔較明顯;弱活力或無活力的花粉粒染色較淺,且部分花粉粒破裂,有內(nèi)溶物溢出。由表1可知,測定采集當(dāng)天的花粉時,以花瓣張開角度B的花粉活力最高,染色率為71.50%,其次為C,染色率為70.45%,二者差異不顯著;最差是A,為54.67%,較B、C差異顯著。當(dāng)花藥于干燥器中貯存至第3天時測定,其花粉染色率表現(xiàn)為A最強,達(dá)74.61%;其次為B,而C表現(xiàn)最差,僅有56.17%的花粉染色。到貯藏第5天時,所有不同花瓣張開角度的花粉活力迅速下降,染色均低于5%,基本無授粉能力。試驗結(jié)果表明,花瓣張開角度為A的花粉活力隨著貯藏時間增加呈先升高后降低的趨勢,以貯藏3 d的花粉活力較強,可用于短期保存和異地授粉;B、C以采摘當(dāng)天活力最強,是授粉的最佳時期;貯藏時間≥5 d時,95%以上的花粉均未染色。

      2.2 蔗糖培養(yǎng)基培養(yǎng)法測定花粉活力

      培養(yǎng)基溫度、蔗糖培養(yǎng)基上花粉的數(shù)目與花粉活力是花粉萌發(fā)的關(guān)鍵。本試驗觀察離體花粉在蔗糖培養(yǎng)基上萌發(fā)時花粉管生長情況。結(jié)果表明(圖2),花瓣張開角度B的花粉采集當(dāng)天萌發(fā)率最高,達(dá)44%;其次為C,花粉采集當(dāng)天萌發(fā)率為41%,隨著貯藏時間的增加,其萌發(fā)率呈下降趨勢,且差異明顯,A處理花粉萌發(fā)率隨貯藏時間增加呈先升高后下降趨勢,以貯藏3 d的花粉萌發(fā)率最高,達(dá)33.3%,較采摘當(dāng)天的萌發(fā)率(26.4%)提高26%,但差異不明顯。所有處理的花粉貯藏5 d時,萌發(fā)率均低于5%,與染色觀察結(jié)果基本一致。分析原因可能是A處理由于花粉尚未完全發(fā)育成熟,經(jīng)過2 d的貯藏保存,成熟花粉數(shù)量增加導(dǎo)致萌發(fā)率增加,處理B和C因花瓣張開角度大于A,發(fā)育成熟的花粉數(shù)量相對較多,故萌發(fā)率較高。到第5天時,所有花粉的萌發(fā)率都明顯下降,可能是貯藏時間過長,花粉活力下降。

      2.3 番茄花粉萌發(fā)速率的測定

      試驗觀測C處理采摘當(dāng)天花粉萌發(fā)時花粉管生長情況。結(jié)果表明,新采摘成熟有活力花粉散落于蔗糖15 g/L+H3BO3 0.03 g/L+CaCl2 0.02 g/L+瓊脂6 g/L培養(yǎng)基表面,1~2 min即開始萌發(fā),培養(yǎng)20 min時,花粉管長度已達(dá)到花粉粒直徑的2.75倍(圖3a),60 min時花粉管生長長度已超過花粉粒直徑的7.5倍(圖3d);而呈不規(guī)則形狀或者花粉粒破裂的花粉則無明顯變化,分析此類花粉為弱活力或無活力。另外,圖3、圖4顯示,A、B花粉管在未發(fā)生接觸時,均表現(xiàn)快速生長趨勢;A花粉管接觸到B花粉管時,即停止生長(圖4),而B花粉管仍快速生長,平均生長速度約90 μm/min。分析原因可能是B花粉管生長過程中分泌的某些化學(xué)物質(zhì)分布于花粉管周圍,抑制與之接觸的花粉管生長(圖3b、c和d),其具體抑制機理有待進一步研究。

      3 結(jié)論與討論

      試驗比較了番茄花粉活力的2種測定方法,結(jié)果基本一致。番茄花瓣張開角度為B和C的花粉于采摘當(dāng)天,活力最強,但隨著室溫干燥貯藏的時間增加,活力呈下降趨勢,貯藏5 d時,基本無活力,因此不宜作貯藏或異地授粉的材料。A花粉多數(shù)可能還不完全成熟,在相同的儲藏條件和時間下,花粉的活力呈先上升后下降趨勢,以采摘當(dāng)天活力較低,貯藏至第3天時,活力明顯增強,但不能超過5 d。這與郟艷紅等[1]、王吉慶等[2]的結(jié)論基本一致。該結(jié)論為番茄雜交制種時花期不遇和異地雜交等提供參考。

      另外,從試驗結(jié)果可以看出,相同張開角度、相同貯藏時間,I2-KI染色法測定有活力的花粉率比培養(yǎng)基法相對要高,這與郝瑞娟等[8]研究百合花粉得出的結(jié)果相似,說明I2-KI染色法是一種較初步的測定方法,不適合番茄花粉活力的精確測定。有研究者認(rèn)為,花粉的萌發(fā)與環(huán)境溫度[9]及培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分[10]有關(guān),這為我們今后增加培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分,提高花粉生活力提供參考。

      試驗同時發(fā)現(xiàn),花粉在蔗糖15 g/L+H3BO3 0.03 g/L+CaCl2 0.02 g/L+瓊脂6 g/L培養(yǎng)基上萌發(fā)時,花粉粒的分布不宜過密,花粉管相互接觸會出現(xiàn)相互作用,抑制花粉管生長。有研究認(rèn)為,花粉管生長受到抑制可能是花粉管頂端質(zhì)膜的鈣依賴蛋白激酶和小G蛋白活性受到抑制,導(dǎo)致膜肌動蛋白骨架重排,進而引起鈣離子濃度梯度的消失而抑制花粉管生長[11],其作用機理仍有待進一步研究。另外,植物雜交成功與否還與柱頭的可授性[12]以及最佳授粉時期的選擇[13]等有密切關(guān)系,試驗下一階段將對此開展相關(guān)研究。

      參考文獻(xiàn)

      [1] 郟艷紅,王姝,劉仲齊.影響番茄花粉活力和制種產(chǎn)量的主要因素[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,16(3):97-100.

      [2] 王吉慶,趙月平,喬保健.貯藏花粉和授粉時期對番茄雜交制種效果的影響[J].種子,2006(25):90-91.

      [3] 李景富,許向陽,王傲雪,等.中國番茄育種學(xué)(精)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2011.

      [4] 毛秀杰,魏毓棠,金燕,等.不同光照條件下番茄花粉活力的品系間差異[J].沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2005(2):224-226.

      [5] 吳淑云,曹辰興.蔬菜良種繁育原理和技術(shù)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1995.

      [6] 張志良,瞿偉菁,李小芳.植物生理學(xué)實驗指導(dǎo).4版[M].北京:高等教育出版社,2009:181.

      [7] 趙興華,張道旭,印東生,等.百合花粉活力測定和貯藏方法研究[J].北方園藝,2009(2):172-175.

      [8] 郝瑞娟,王周鋒,穆鼎.不同百合花粉活力的測定方法比較[J].北方園藝,2008(11):95-97.

      [9] 陳士強.關(guān)于稻麥花粉管伸長和極核受精過程的研究[D]. 江蘇:揚州大學(xué),2007:31-32.

      [10] Firas B D, Youssef C, Anja G. Optimization of conditions for germination of cold-stored Arabidopsis thaliana pollen[J]. Plant Cell Rep, 2009(28): 347-357.

      [11] 孫穎,孫大業(yè).花粉萌發(fā)和花粉管生長發(fā)育的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[J].植物學(xué)報,2001,43(12):1 211-1 217.

      [12] Hewage N P, Hampton J G, Hill M J. Effect of pollen source and stigma receptivity on seed production in ten cultivars of Dianthus plumarius L. [J]. Journal of Applied Seed Production, 1999(17): 43-47.

      [13] 葉要妹,張俊衛(wèi),齊迎春,等.百日草柱頭可授性和花粉生活力的研究[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,40(10):2 376-2 381.

      2.3 番茄花粉萌發(fā)速率的測定

      試驗觀測C處理采摘當(dāng)天花粉萌發(fā)時花粉管生長情況。結(jié)果表明,新采摘成熟有活力花粉散落于蔗糖15 g/L+H3BO3 0.03 g/L+CaCl2 0.02 g/L+瓊脂6 g/L培養(yǎng)基表面,1~2 min即開始萌發(fā),培養(yǎng)20 min時,花粉管長度已達(dá)到花粉粒直徑的2.75倍(圖3a),60 min時花粉管生長長度已超過花粉粒直徑的7.5倍(圖3d);而呈不規(guī)則形狀或者花粉粒破裂的花粉則無明顯變化,分析此類花粉為弱活力或無活力。另外,圖3、圖4顯示,A、B花粉管在未發(fā)生接觸時,均表現(xiàn)快速生長趨勢;A花粉管接觸到B花粉管時,即停止生長(圖4),而B花粉管仍快速生長,平均生長速度約90 μm/min。分析原因可能是B花粉管生長過程中分泌的某些化學(xué)物質(zhì)分布于花粉管周圍,抑制與之接觸的花粉管生長(圖3b、c和d),其具體抑制機理有待進一步研究。

      3 結(jié)論與討論

      試驗比較了番茄花粉活力的2種測定方法,結(jié)果基本一致。番茄花瓣張開角度為B和C的花粉于采摘當(dāng)天,活力最強,但隨著室溫干燥貯藏的時間增加,活力呈下降趨勢,貯藏5 d時,基本無活力,因此不宜作貯藏或異地授粉的材料。A花粉多數(shù)可能還不完全成熟,在相同的儲藏條件和時間下,花粉的活力呈先上升后下降趨勢,以采摘當(dāng)天活力較低,貯藏至第3天時,活力明顯增強,但不能超過5 d。這與郟艷紅等[1]、王吉慶等[2]的結(jié)論基本一致。該結(jié)論為番茄雜交制種時花期不遇和異地雜交等提供參考。

      另外,從試驗結(jié)果可以看出,相同張開角度、相同貯藏時間,I2-KI染色法測定有活力的花粉率比培養(yǎng)基法相對要高,這與郝瑞娟等[8]研究百合花粉得出的結(jié)果相似,說明I2-KI染色法是一種較初步的測定方法,不適合番茄花粉活力的精確測定。有研究者認(rèn)為,花粉的萌發(fā)與環(huán)境溫度[9]及培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分[10]有關(guān),這為我們今后增加培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分,提高花粉生活力提供參考。

      試驗同時發(fā)現(xiàn),花粉在蔗糖15 g/L+H3BO3 0.03 g/L+CaCl2 0.02 g/L+瓊脂6 g/L培養(yǎng)基上萌發(fā)時,花粉粒的分布不宜過密,花粉管相互接觸會出現(xiàn)相互作用,抑制花粉管生長。有研究認(rèn)為,花粉管生長受到抑制可能是花粉管頂端質(zhì)膜的鈣依賴蛋白激酶和小G蛋白活性受到抑制,導(dǎo)致膜肌動蛋白骨架重排,進而引起鈣離子濃度梯度的消失而抑制花粉管生長[11],其作用機理仍有待進一步研究。另外,植物雜交成功與否還與柱頭的可授性[12]以及最佳授粉時期的選擇[13]等有密切關(guān)系,試驗下一階段將對此開展相關(guān)研究。

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      [12] Hewage N P, Hampton J G, Hill M J. Effect of pollen source and stigma receptivity on seed production in ten cultivars of Dianthus plumarius L. [J]. Journal of Applied Seed Production, 1999(17): 43-47.

      [13] 葉要妹,張俊衛(wèi),齊迎春,等.百日草柱頭可授性和花粉生活力的研究[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,40(10):2 376-2 381.

      2.3 番茄花粉萌發(fā)速率的測定

      試驗觀測C處理采摘當(dāng)天花粉萌發(fā)時花粉管生長情況。結(jié)果表明,新采摘成熟有活力花粉散落于蔗糖15 g/L+H3BO3 0.03 g/L+CaCl2 0.02 g/L+瓊脂6 g/L培養(yǎng)基表面,1~2 min即開始萌發(fā),培養(yǎng)20 min時,花粉管長度已達(dá)到花粉粒直徑的2.75倍(圖3a),60 min時花粉管生長長度已超過花粉粒直徑的7.5倍(圖3d);而呈不規(guī)則形狀或者花粉粒破裂的花粉則無明顯變化,分析此類花粉為弱活力或無活力。另外,圖3、圖4顯示,A、B花粉管在未發(fā)生接觸時,均表現(xiàn)快速生長趨勢;A花粉管接觸到B花粉管時,即停止生長(圖4),而B花粉管仍快速生長,平均生長速度約90 μm/min。分析原因可能是B花粉管生長過程中分泌的某些化學(xué)物質(zhì)分布于花粉管周圍,抑制與之接觸的花粉管生長(圖3b、c和d),其具體抑制機理有待進一步研究。

      3 結(jié)論與討論

      試驗比較了番茄花粉活力的2種測定方法,結(jié)果基本一致。番茄花瓣張開角度為B和C的花粉于采摘當(dāng)天,活力最強,但隨著室溫干燥貯藏的時間增加,活力呈下降趨勢,貯藏5 d時,基本無活力,因此不宜作貯藏或異地授粉的材料。A花粉多數(shù)可能還不完全成熟,在相同的儲藏條件和時間下,花粉的活力呈先上升后下降趨勢,以采摘當(dāng)天活力較低,貯藏至第3天時,活力明顯增強,但不能超過5 d。這與郟艷紅等[1]、王吉慶等[2]的結(jié)論基本一致。該結(jié)論為番茄雜交制種時花期不遇和異地雜交等提供參考。

      另外,從試驗結(jié)果可以看出,相同張開角度、相同貯藏時間,I2-KI染色法測定有活力的花粉率比培養(yǎng)基法相對要高,這與郝瑞娟等[8]研究百合花粉得出的結(jié)果相似,說明I2-KI染色法是一種較初步的測定方法,不適合番茄花粉活力的精確測定。有研究者認(rèn)為,花粉的萌發(fā)與環(huán)境溫度[9]及培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分[10]有關(guān),這為我們今后增加培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分,提高花粉生活力提供參考。

      試驗同時發(fā)現(xiàn),花粉在蔗糖15 g/L+H3BO3 0.03 g/L+CaCl2 0.02 g/L+瓊脂6 g/L培養(yǎng)基上萌發(fā)時,花粉粒的分布不宜過密,花粉管相互接觸會出現(xiàn)相互作用,抑制花粉管生長。有研究認(rèn)為,花粉管生長受到抑制可能是花粉管頂端質(zhì)膜的鈣依賴蛋白激酶和小G蛋白活性受到抑制,導(dǎo)致膜肌動蛋白骨架重排,進而引起鈣離子濃度梯度的消失而抑制花粉管生長[11],其作用機理仍有待進一步研究。另外,植物雜交成功與否還與柱頭的可授性[12]以及最佳授粉時期的選擇[13]等有密切關(guān)系,試驗下一階段將對此開展相關(guān)研究。

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