黃方千,李強(qiáng)林,楊東潔,伏宏斌
(1.四川省紡織品生態(tài)染整高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,四川成都611731;2.成都紡織高等??茖W(xué)校,四川成都611731)
胭脂蟲紅,又稱胭脂紅酸、洋紅酸(圖1),是從寄生在仙人掌上的雌性胭脂蟲體內(nèi)提取的一種蒽醌類天然色素,呈粉紅至紫紅,其LD50>21.5g/kgBW,無(wú)毒、無(wú)致癌致畸性,其安全性很高,它是美國(guó)唯一允許用于眼部的有機(jī)色素,也是唯一一種美國(guó)食品藥物管理局允許既可用于食品又可用于藥品和化妝品的天然色素,是保持經(jīng)久不衰的顏料之一[1],被視作最安全的天然色素而用于食品、化妝品、藥品及紡織品等領(lǐng)域[2,3]。并且,胭脂蟲紅酸在成熟的雌性蟲體內(nèi)含量占干蟲體質(zhì)量的17%~24%,其年產(chǎn)量在200噸左右并以每年3% ~5%的速度增加[4]。目前世界上進(jìn)行胭脂蟲色素生產(chǎn)及技術(shù)研究的主要國(guó)家有西班牙、秘魯、日本、韓國(guó)、德國(guó)、丹麥等,其中秘魯系胭脂蟲主產(chǎn)國(guó)。中國(guó)無(wú)胭脂蟲的自然分布,自2000年開始引進(jìn)了胭脂蟲及其優(yōu)良寄主印榕仙人掌并在云南省繁育成功[5]。因此胭脂蟲色素的研究與應(yīng)用在我國(guó)還有很大的潛力。
圖1 胭脂蟲紅的分子結(jié)構(gòu)式
本文綜述了近十多年來(lái)采用超聲波或微波輔助水提取法、樹脂純化法、膜分離法、蛋白酶預(yù)處理法等方法提取純化胭脂蟲紅色素的工藝,及其在紡織品染色中的應(yīng)用。
根據(jù)國(guó)內(nèi)外胭脂蟲的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,結(jié)合其產(chǎn)地、養(yǎng)殖方法和含量等性質(zhì)不同,提取工藝不同,胭脂紅酸的收率也不同,一般采用的提取工藝流程如圖2。
胭脂蟲紅色素可采用傳統(tǒng)的水/乙醇浸泡、煮沸回流和索氏提取法,也可以采用超聲波或微波輔助水/醇提取法,還可采用蛋白酶水解法除去具有致敏性的蟲體蛋白等雜質(zhì),其處理工藝一般包括圖2單點(diǎn)劃線框內(nèi)流程。
1.1.1 水提取法
在胭脂蟲紅的水提取的條件實(shí)驗(yàn)中,將正交試驗(yàn)[6]、響應(yīng)面分析法和回歸分析法[7]應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中。
張弘小組[8]制備胭脂蟲紅提取液的方法是稱取一定量的胭脂蟲干體,先石油醚(4ml/1g色素)煮沸回流6h,再乙醇(4ml/1g色素)煮沸回流6h,最后用純水(4ml/1g色素)提取4h,提取次數(shù)8次,用紗布過濾兩次,合并濾液,減壓濃縮至合并液體積的1/3,即得胭脂蟲紅色素粗提液。再對(duì)粗提取液進(jìn)行預(yù)處理,預(yù)處理?xiàng)l件為:室溫,pH≈4,靜置24h后減壓抽慮得濾液,可直接將濾液干燥的粗制胭脂蟲紅色素。
該小組[6]又利用正交試驗(yàn)研究了水溶法提取胭脂蟲紅色素的工藝,得出最佳工藝條件:料液比1:4(g:ml),提取溫度80℃,提取時(shí)間5h、提取次數(shù)6次,紅色素提取率41.89%,其純度達(dá)32.15%。
西北大學(xué)崔易[7]將響應(yīng)面分析法(RSM)應(yīng)用于胭脂蟲紅色素的索氏提取中,得出最佳提取條件:液料比1∶2(g:ml),60%的乙醇提取劑,提取溫度為40℃,提取時(shí)間32min,提取次數(shù)3次,提取率達(dá)30.62%。
1.1.2 超聲波輔助水提取法
張弘小組[9]通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)法研究了超聲波輔助提取胭脂蟲紅色素的方法。其處理工藝:胭脂蟲→除雜→石油醚除蠟→乙醇除醇溶物→超聲波處理→水浴浸提→抽濾→色素提取液。結(jié)果表明,最佳工藝條件:超聲波功率1400W,超聲波處理時(shí)間12min,脈沖時(shí)間(10s,4s),料液比1∶6(g∶ml),提取次數(shù)5次,色素得率可達(dá)42.08%,其純度達(dá)31.97%。
1.1.3 微波輔助水提取法
張弘小組[10]利用正交試驗(yàn)研究了微波萃取胭脂蟲紅色素的影響因素,確定了最佳提取工藝:微波功率560W,微波作用時(shí)間40s,料液比1∶4(g∶ml),合適的萃取次數(shù) 10次,色素收率可達(dá)42.11%。
該小組[11]利用微波輔助水提取胭脂蟲紅色素,其處理工藝如下:胭脂蟲→水浸泡→微波處理→水浴浸提→色素提取液。單因素試驗(yàn)最佳工藝:5g胭脂蟲干樣,先常溫浸泡40min,液料比7∶1(g:ml),微波功率700W,輻射60s后用75℃水浴浸提40min適宜于色素提取。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,進(jìn)行3因素3水平響應(yīng)面分析試驗(yàn),得到最優(yōu)條件為5g胭脂蟲干樣,液料比7∶5(g:ml),微波功率714W,輻射73s,提取12次,首次色素得率可達(dá)7.30%,色素總得率達(dá)到 29.95%,提取率為95.13%。
崔永珠小組等[12]利用蛋白酶輔助提取胭脂蟲紅。蛋白酶萃取工藝:將風(fēng)干蟲體原料10 g加入250 mL水中,萃取采用(a)酶法提取(1%酶w/w,pH=4,50℃,2h)、(b)酶-水法提取(1% 酶,pH=4,50℃,1h,再 pH=4,90℃,1h)和(c)水法提取(pH=4,90℃,2h)三種方法進(jìn)行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn),(b)酶-水法萃取染液的吸光度比(c)水法高28.47%,比(a)酶法高6.59%。這是由于在蛋白酶的作用下,胭脂蟲體內(nèi)的蛋白質(zhì)水解成多肽,蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)被破壞,減小萃取的阻力,致使胭脂蟲酸紅容易從胭脂蟲體內(nèi)溶出,且溫度越高越有利于色素溶入萃取介質(zhì)中。高效、專一的蛋白酶能縮短萃取時(shí)間達(dá)到良好的萃取效果。因此,采用(b)酶-水法達(dá)到最佳萃取效果。
圖2 胭脂蟲紅的提取純化工藝流程
為了除去胭脂蟲色素粗提取液中含有的大分子蟲體蛋白和類似污染物等,可以采取如圖2的雙點(diǎn)劃線框內(nèi)流程預(yù)處理工藝,調(diào)節(jié)色素粗提液的pH值,對(duì)其進(jìn)行酸解,再靜置后過濾可以除去大部分有機(jī)膠體、機(jī)械顆粒等雜質(zhì)[8,13]。
為了進(jìn)一步除去胭脂蟲色素中的小分子蟲體蛋白等雜質(zhì),可以利用酶解法消除雜蛋白,可采用超濾膜、納濾、反滲透和電滲析純化分離技術(shù),也可利用大孔吸附樹脂法富集、純化胭脂蟲紅色素。
張弘小組[8]用膜分離技術(shù)處理胭脂蟲色素提取液,用的Prep/scale超濾系統(tǒng)(Millipore公司生產(chǎn)),其裝置圖見圖3。操作方法:樣品液經(jīng)輸液泵輸入卷式膜分離組件,以切相流的方式通過超濾膜,分為透過液和截留液,在壓力驅(qū)動(dòng)下分別從膜分離柱外腔的透過口和循環(huán)口流出,如此反復(fù)循環(huán),一直達(dá)到分離要求,超濾過程中壓力可以通過改變泵的轉(zhuǎn)速與調(diào)節(jié)循環(huán)口端的開閉度實(shí)現(xiàn)。該方法先調(diào)節(jié)色素粗提液的pH≈4,靜置24h后濾去沉淀,所得液體用截留分子量為5000 Da的螺旋卷式再生纖維素超濾膜進(jìn)行精制,可以截留73%蟲體蛋白,提高胭脂蟲紅色素的純度,胭脂蟲紅酸含量可達(dá)54%。
圖3 Prep/scale超濾系統(tǒng)
大孔吸附樹脂是一種不溶于酸、堿和有機(jī)溶劑的有機(jī)高分子聚合物,大孔吸附樹脂分離技術(shù)是20世紀(jì)60年代末發(fā)展起來(lái)的繼離子交換樹脂后的分離新技術(shù)。
天津科技大學(xué)呂曉玲等[14]研究了S-8大孔吸附樹脂純化胭脂蟲紅色素的工藝(表1)。以胭脂蟲干體為原料,通過粉碎、蒸餾水熱浸提、過濾、濾液經(jīng)樹脂吸附、蒸餾水沖柱、乙醇解吸、濃縮、冷凍干燥等得到胭脂蟲紅色素粉末。實(shí)驗(yàn)表明最佳粗提取工藝條件:料液比1∶60(g:ml)、提取溫度85℃、浸提時(shí)間2h、提取次數(shù)2次。通過靜態(tài)吸附和解吸實(shí)驗(yàn)確定最佳的純化樹脂為S-8大孔吸附樹脂。通過解吸率研究確定了最佳純化工藝條件:上柱濃度 0.75×15、流速2BV/h、pH=4;洗脫劑pH=2的60%的乙醇、洗脫流速2BV/h,得到色素粉末的色價(jià)為102,胭脂蟲紅酸的含量達(dá)到70.93%。
劉錫建等[15,16]研究了 D-101 大孔吸附樹脂純化胭脂蟲紅色素的吸附特性和純化工藝(表1)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),D-101樹脂對(duì)胭脂蟲紅色素的吸附速率快(120min達(dá)到平衡),吸附量高(143.17mg/g樹脂),吸附過程為放熱反應(yīng),低溫有利于吸附。通過優(yōu)化得到最佳工藝條件:調(diào)節(jié)提取液pH=3,上柱液體積為2BV,上柱流速為3BV/h,體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇洗脫,洗脫液體積為3.5BV,洗脫速率為2BV/h,在此條件下,吸附量為42.15mg/g樹脂,洗脫率高達(dá)98.24%,胭脂蟲紅產(chǎn)品純度可達(dá)58.47%,能夠滿足一般食品工業(yè)的對(duì)胭脂蟲紅色素的純度要求。
表1 不同樹脂提取胭脂蟲紅色素
大孔吸附樹脂的內(nèi)部具有三維空間立體孔結(jié)構(gòu),具有物理化學(xué)穩(wěn)定性高、比表面積大、吸附容量大、選擇性好、吸附速度快、解吸條件溫和、洗脫率高、樹脂再生處理方便、使用周期長(zhǎng)、宜于構(gòu)成閉路循環(huán)、節(jié)省費(fèi)用等諸多優(yōu)點(diǎn),適合工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。
美國(guó)專利 US 20020058016 A1[17]和 US 20030003201 A1[18]發(fā)明了一種胭脂蟲紅色素提取純化的多種處理工藝,主要包括:使用蛋白酶水解提取液中的蛋白質(zhì),然后選擇樹脂吸附,離子交換,酸處理和膜過濾等多種處理方法,其產(chǎn)品中幾乎不含分子量不大于6000的蛋白質(zhì)分子。其工藝流程如下:
胭脂蟲→水提取→蛋白酶處理→過濾→樹脂吸附→洗脫→陶瓷膜過濾→減壓濃縮→色素。
該方法采用的膜分離法包括超濾(UF)、納濾(NF)和反滲透(RO)純化胭脂蟲色素??捎贸瑸V法去除分子量1萬(wàn)-100萬(wàn)的大分子,可選用的超濾膜有 Nitto Denko公司的 NTU-3150、NTU-3250、NTU-3550、NTU-3800,NGK Insulator和 Cefilt-UF;也可以用 Asahi Chemical公司的 AHP-2013、AHP-3013和AHP-1010等??捎眉{濾和反滲透去除2k-8k的低分子量非色素成分,可選用的膜有 NittoDenko公司的 NTR-7250、NTR-7410、NTR-7430、NTR-7450、CF30-S和 Asahi Chemical公司的 AIP-3013、ACP-2013、AIP-2013、AIO-1010 以及相應(yīng)截留分子量或型號(hào)的膜。經(jīng)過上述方法精制的色素?zé)o致敏蟲體蛋白,去除了胭脂蟲色素提取物的特殊臭味,其水溶液在5℃下放置6個(gè)月無(wú)沉淀。
該專利采用的離子交換樹脂包括陽(yáng)離子交換樹脂(如Mistsubishi Chemical公司的Diaion SK1B,Diaion SK102,Diaion SK116,Diaion PK208,Diaion WK10和Diaion WK20)和陰離子交換樹脂(如Mistsubishi Chemical公 司 的 Diaion SA12,Diaion SA20,Diaion PA306,Diaion WA10 和 Diaion WA20)
專利的具體操作方法[17]:將35kg胭脂蟲干粉中加入800L水,用檸檬酸調(diào)節(jié)pH值為6,于溫度80~90℃攪拌提取20~30min;用60目金屬篩過濾提取液,用檸檬酸調(diào)節(jié)液相pH=4,冷卻到約50℃,在這一步中加入0.1%蛋白酶,并在該溫度攪拌混合物3h;再用檸檬酸調(diào)節(jié)蛋白酶水解產(chǎn)物的pH=3,并與助濾劑和硅藻土相混合,通過濾紙過濾,得到約250L水解產(chǎn)物;將水解產(chǎn)物通過150L的Amberlite XAD-7樹脂柱,用8倍體積的水洗滌樹脂柱,用130L pH=7.5的50%乙醇-水溶液洗脫被吸附的色素,接著采用0.2μm的MF陶瓷膜濾器,在20×104Pa壓力和溫度20℃下過濾82L洗脫液,再用截留分子量6000的納濾膜在30×104Pa和溫度20℃下處理,得到80L濾液。減壓濃縮濾液,得到20kg色素溶液,其色值E為200。在此色素溶液中加入32.4kg水、13kg乙醇和600g檸檬酸,得到66kg胭脂蟲紅色素溶液,其色值E為60。
為了保證胭脂蟲紅色素和其下游產(chǎn)品的品質(zhì),研究胭脂蟲紅色素在不同環(huán)境下的穩(wěn)定性十分重要,便于產(chǎn)品的保存、運(yùn)輸和使用。我國(guó)學(xué)者[5,19,20]相繼研究了光、熱、pH 值、氧化劑、還原劑對(duì)胭脂蟲紅色素溶液穩(wěn)定性的影響。
由表2可以看出,胭脂蟲紅色素對(duì)光照較為穩(wěn)定,在室內(nèi)暗處和散射光下3d后仍能保留90% 以上,在遮光和室內(nèi)散射光下穩(wěn)定;在室外陽(yáng)光直射下3d衰減約20%,7d衰減50%,極不穩(wěn)定;在白熾燈下,6h后損耗了6.73%,基本穩(wěn)定,1d衰減約15%,3d衰減約40%。隨光照時(shí)間延長(zhǎng),胭脂紅酸溶液的色素衰減呈下降趨勢(shì),特別在日光直射下極不穩(wěn)定。在胭脂蟲的分析、測(cè)定及加工過程中,應(yīng)避免日光直射或長(zhǎng)時(shí)間白熾燈照射,并在6h內(nèi)完成工作;在室內(nèi)散射光及遮光條件下,胭脂蟲及其產(chǎn)品的加工、分析測(cè)定可延長(zhǎng)至3d,作為紡織品染料時(shí),需研究加入穩(wěn)定劑提高胭脂蟲紅染料的光穩(wěn)定性。
表2 胭脂蟲紅色素溶液的光穩(wěn)定性
由表3可以看出,在60℃以下,胭脂紅酸色素幾乎無(wú)衰減;60~80℃衰減幅度很小,在100℃回流8小時(shí)后衰減小于5%,說明胭脂蟲紅色素對(duì)溫度較為穩(wěn)定,在低溫和高溫環(huán)境下保存率與常溫保存率差異不顯著。
表3 不同穩(wěn)定對(duì)胭脂蟲紅色素穩(wěn)定性影響
由表4可以看出,隨著水溶液pH值的增高,最大吸光度的波長(zhǎng)也相應(yīng)增加,色素水溶液由橙紅色轉(zhuǎn)變?yōu)槊倒寮t、紫紅色。胭脂蟲紅色素在強(qiáng)酸環(huán)境下(pH<4),7d的衰減率達(dá)10%,穩(wěn)定性差;當(dāng)pH值為6時(shí),保存率最高,最穩(wěn)定;而在堿性環(huán)境下,隨著pH值的增加,胭脂蟲紅色素保存率急劇下降,當(dāng)pH值為11時(shí),色素水溶液1d后由紫紅色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色,極不穩(wěn)定。說明胭脂蟲紅色素在堿性條件下穩(wěn)定性變差,適合在酸性和中性范圍內(nèi)保存,最好pH=6~7保存。
表4 不同pH值對(duì)胭脂蟲紅色素穩(wěn)定性的影響
由表5可以看出,在添加過氧化氫5%濃度下1d后依然有很高的保存率。胭脂蟲紅色素的抗氧化性較高。
表5 H2O2氧化劑對(duì)胭脂蟲紅色素穩(wěn)定性的影響
由表6可看出,向胭脂蟲紅色素水溶液中加入不同濃度的抗壞血酸或亞硫酸鈉時(shí),隨著時(shí)間的延長(zhǎng),其吸光度均有下降;而亞硫酸鈉的下降比抗壞血酸下降更顯著。且低濃度的還原劑對(duì)胭脂紅酸是相對(duì)穩(wěn)定的,還原劑濃度越高,胭脂紅酸溶液越不穩(wěn)定。
表6 常見金屬離子對(duì)胭脂蟲紅色素穩(wěn)定性的影響
由表7可以看出,在胭脂蟲紅色素水溶液中加入不同金屬離子,其吸光度均有變化,這可能是由于金屬離子與胭脂紅酸發(fā)生反應(yīng)生成絡(luò)合物,導(dǎo)致溶液吸光度的變化。Fe3+、Fe2+、Ca2+和Sn2+等離子在胭脂蟲紅色素水溶液中引起顏色變化、產(chǎn)生沉淀,致使紅色素?fù)p失。Al3+和Mn2+可使胭脂蟲紅色素稍不穩(wěn)定。而 Na+、K+、Mg2+、Zn2+、Cu2+等離子對(duì)紅色素較為穩(wěn)定,并有增色效應(yīng)。因此,在胭脂蟲紅色素加工和儲(chǔ)存、使用過程中應(yīng)不與鐵、錫等材料接觸,盡量避免使用硬水來(lái)提取和配制胭脂蟲紅色素。
表7 常見金屬離子對(duì)胭脂蟲紅色素穩(wěn)定性的影響
(接上表)
胭脂蟲紅可用于固體粉末劑型著色時(shí),宜先將其溶于小量濃氨液中,然后加至粉末中,經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間研磨,以期獲得分布均勻的最佳顏色用鋁鹽或錫鹽媒染,可將蠶絲和羊毛染成鮮艷的紅色。胭脂蟲紅也可與天然色素姜黃素、胭脂樹橙、辣椒紅、β-胡蘿卜素等混合可調(diào)出一系列不同色調(diào)的產(chǎn)品[21]。
日本稻波治等[22]制備了一種熱穩(wěn)定性極佳的胭脂蟲紅鮮紅色制劑。該法將100g胭脂蟲紅粉(色值100)與10g~20g NH4HCO3或 (NH4)2CO3混合,即成穩(wěn)定化色素。該色素能完全溶于95℃熱水中,用檸檬酸調(diào)節(jié)pH=3.0后,在85℃加熱10min,溶液仍為鮮艷的紅色,而對(duì)照樣此時(shí)轉(zhuǎn)變?yōu)槌壬?/p>
發(fā)明專利2013102882238[23]公開了一種幻彩效果的胭脂蟲紅顏料制備工藝,該產(chǎn)品系基于多重涂覆片狀基材的強(qiáng)干涉顏料。制備方法是以鋁鹽、胭脂蟲紅、透明片狀基材為原料,在常溫常壓,連續(xù)攪拌,pH值維持在6.3-6.5的條件下反應(yīng),再通過過濾、洗滌、干燥,即得成品。該工藝簡(jiǎn)單,生產(chǎn)效率高,可獲得色相豐富,色彩艷麗,具有幻彩閃光效果的珠光顏料,且無(wú)毒,可廣泛應(yīng)用于食品、化妝品、醫(yī)藥和織物染色等領(lǐng)域,擴(kuò)展了胭脂蟲紅的應(yīng)用范圍。
胭脂蟲紅可用于蠶絲、膠原膜、羊毛等紡織品染色,宜用鋁鹽等金屬離子為媒染,可將染成鮮艷的紅色。
大連工業(yè)大學(xué)崔永珠小組[12]研究了天然染料胭脂蟲紅色素對(duì)柞蠶絲織物進(jìn)行染色工藝。通過實(shí)驗(yàn)得到了最佳的染色工藝:胭脂蟲紅質(zhì)量濃度1.5g/L,染色溫度80℃,染色時(shí)間40min,pH值為4,浴比 1∶40。
天津工業(yè)大學(xué)周嵐等[24]通過對(duì)棉纖維陽(yáng)離子化改性,有效地改善了胭脂蟲紅、胭脂樹橙等天然染料在棉纖維上的染色性能,其優(yōu)化的染色工藝為:染色溫度60~70℃,染色時(shí)間50~60min,浴比1∶20;染色織物的耐洗色牢度達(dá)到4級(jí),耐摩擦色牢度達(dá)到3級(jí),且具有很好的紫外防護(hù)效果。
四川大學(xué)李國(guó)英小組[25]研究了天然染料胭脂蟲紅對(duì)膠原膜進(jìn)行染色。結(jié)果表明,最佳染色工藝為:在胭脂蟲紅色素濃度0.15%、溫度50℃及pH值為5的染浴液中反應(yīng)60s。紅外光譜分析表明胭脂蟲紅分子的引入增強(qiáng)了膠原氫鍵的作用。染色后膠原膜的熱變性溫度提高了10.5℃,起始分解溫度升高了約90℃,耐熱性得到了較大的改善。染色后膠原膜的吸水率和親水性增加,機(jī)械強(qiáng)度均有所提高。
蘇州大學(xué)柳艷等[26]從染液pH值、染色溫度、染色時(shí)間、染料提升性等方面入手對(duì)胭脂蟲紅色素上染羊毛織物的性能進(jìn)行研究,并對(duì)染色牢度和生態(tài)安全性進(jìn)行測(cè)試。研究表明,最佳工藝條件為:染液pH值3~4,染色溫度為80℃以上,染色時(shí)間為50~60min,胭脂蟲紅色素對(duì)羊毛織物具有較好的提升性;染色后的羊毛織物的金屬離子含量和禁用偶氮染料含量達(dá)到生態(tài)紡織品的要求。
隨著人們對(duì)生態(tài)紡織品的關(guān)注增加,人類社會(huì)對(duì)天然染料的需求量將會(huì)越來(lái)越大,胭脂蟲紅及其制品作為一種安全健康的天然染料,其需求量也將隨之增加。據(jù)估計(jì),市場(chǎng)需求量將會(huì)以每年3% ~5%的速度增加,因此,胭脂蟲紅染料及其制品將有很廣闊的發(fā)展前景。
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