臨床分離腸桿菌科細菌1 580株的耐藥性分析

方亞平， 劉 周， 童 楊， 周 強， 管世鶴， 沈繼錄

·論著·

臨床分離腸桿菌科細菌1 580株的耐藥性分析

方亞平1， 劉 周1， 童 楊1， 周 強1， 管世鶴1， 沈繼錄2

目的分析臨床分離腸桿菌科細菌的分布及耐藥性，為臨床合理使用抗菌藥物提供實驗室依據。方法用常規(guī)方法分離和鑒定細菌，K-B法進行藥敏試驗，結果參照CLSI 2011年版標準判讀。結果2012年共分離1 580株腸桿菌科細菌，以大腸埃希菌、克雷伯菌屬和腸桿菌屬為主，分別占51.3%、26.4%和12.2%；主要分離自尿液標本和痰標本。藥敏結果顯示，腸桿菌科細菌中不同菌種對碳青霉烯類抗生素仍呈敏感，耐藥率＜5%；其次為對阿米卡星和哌拉西林-他唑巴坦，耐藥率均＜20%；對氨芐西林和頭孢唑林的耐藥率較高，均＞50%。結論該院腸桿菌科細菌對碳青霉烯類抗生素雖最敏感，但已出現耐藥菌株。

腸桿菌科細菌； 耐藥性； 碳青霉烯類

臨床抗菌藥物的不合理應用，使細菌對抗菌藥物的耐藥性明顯上升。大腸埃希菌、克雷伯菌屬等腸桿菌科細菌是醫(yī)院感染常見的病原菌，因其耐藥率快速增長，尤其是多重耐藥和泛耐藥菌株的出現受到臨床越來越多的關注［1］。通過對腸桿菌科細菌的耐藥性進行監(jiān)測和分析，可為臨床合理使用抗菌藥物提供依據。

1 材料與方法

1.1 菌株來源

菌株來自2012年1—12月安徽醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院臨床標本分離的腸桿菌科細菌共1 580株，剔除同一患者相同部位重復分離菌株。質控菌株為大腸埃希菌ATCC 25922、大腸埃希菌ATCC 35218、肺炎克雷伯菌ATCC 700603。

1.2 抗菌藥物及培養(yǎng)基

抗菌藥物紙片及MH培養(yǎng)基為英國OXOID公司產品。

1.3 細菌鑒定及藥敏試驗

細菌的分離培養(yǎng)按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》進行［2］，采用MicroScan-40Si微生物鑒定儀鑒定菌株，藥敏試驗采用K-B紙片法，并依據CLSI 2011年版標準判定結果［3］。

1.4 產超廣譜β內酰胺酶（ESBL）測定

依據CLSI 2011推薦的ESBL紙片篩選法和酶抑制劑增強試驗確證法測定大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇異變形桿菌中產ESBL株。

1.5 統(tǒng)計分析

采用WHONET5.6軟件進行數據分析。

2 結果

2.1 菌株分布

1580株腸桿菌科細菌標本分布以尿液、痰液和膿液為主，且主要分離自急診外科、呼吸內科、腎內科和泌尿外科等科室，見表1、2。1 580株腸桿菌科細菌主要包括大腸埃希菌、克雷伯菌屬和腸桿菌屬，菌株構成情況見表3。

2.2 藥敏試驗

常見腸桿菌科細菌對抗菌藥物的藥敏結果見表4、5。

表11 580株腸桿菌科細菌在各類標本中的分布Table1 Distribution of 1 580 strains of Enterobacteriaceae by specimen source

表2 常見標本的科室分布Table2 Distribution of the isolates by hospital department

表31 580株腸桿菌科細菌構成Table3 Distribution of the 1 580 strains of Enterobacteriaceae by bacterial species in 2012

表4 常見腸桿菌科細菌對抗菌藥物的耐藥率Table4 Resistance rates of Enterobacteriaceae species to antimicrobial agents （%）

表5 產和非產ESBL大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇異變形桿菌對抗菌藥物的耐藥率Table5 Resistance rates of ESBLs-producing and ESBLs-nonproducing E.coli，Klebsiella and Proteus strains to antimicrobial agents （%）

3 討論

腸桿菌科細菌為條件致病菌，近年來已成為醫(yī)院感染最常見的病原菌之一，并有多重耐藥及泛耐藥菌株的出現。多重耐藥是指細菌對3類或以上化學結構不同的抗菌藥物耐藥，泛耐藥是指細菌對所有抗菌藥物都耐藥［4］。本次監(jiān)測結果顯示，2012年我院標本中已經出現多重耐藥菌株，主要分布在重癥監(jiān)護病房（ICU）。1 580株腸桿菌科細菌主要來源于尿液和痰液，分別占33.4%和32.2%；主要分布的科室為急診外科、腎內科、泌尿外科和ICU等，這些科室的患者導尿管應用較多，易造成尿路感染。1 580株腸桿菌科細菌主要以大腸埃希菌、克雷伯菌屬和腸桿菌屬為主，這與胡付品等［5］報道結果一致。

對本院腸桿菌科細菌耐藥性數據分析，結果顯示腸桿菌科細菌對大部分青霉素類和頭孢菌素類抗生素耐藥率高，對氨芐西林和哌拉西林的耐藥率達30%以上，對頭孢唑林和頭孢呋辛的耐藥率達40%以上，對環(huán)丙沙星和甲氧芐啶-磺胺甲口惡唑的耐藥率亦較高，與張晉會等［6］監(jiān)測數據一致；對慶大霉素耐藥率達20%以上，但對阿米卡星的耐藥率低于10%。大腸埃希菌對頭孢吡肟的耐藥率達50.2%，克雷伯菌屬、腸桿菌屬、變形桿菌屬和枸櫞酸桿菌屬對頭孢吡肟的耐藥率均較低。大腸埃希菌為分離率最高的細菌，該菌對哌拉西林-他唑巴坦耐藥率為4.0%；大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌產ESBL菌株對頭孢他啶的耐藥率低于頭孢曲松和頭孢噻肟，與王輝等［7］報道一致。第三代頭孢菌素的廣泛應用是導致ESBL菌株出現和傳播的因素，因此，臨床應少用第三代頭孢菌素，防止ESBL菌株的進一步播散［8］。

目前碳青霉烯類抗生素是治療革蘭陰性桿菌感染，尤其是多重耐藥腸桿菌科細菌感染最有效的抗菌藥物［9］，然而，隨著該類藥物在臨床中的廣泛應用，已出現相應耐藥菌株。Rhomberg等［10］報道，肺炎克雷伯菌對美羅培南的耐藥率由2004年的0.6%升至2008年的5.6%。Hidron等［11］報道在導管相關感染的患者中，大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對碳青霉烯類抗生素耐藥率分別為4.0%和10.8%。Deshpande等［12］對1999—2005年收集的8 885株腸桿菌科細菌調查發(fā)現，亞胺培南和美羅培南對51株菌株的MIC值升高。本研究除變形桿菌屬外，大腸埃希菌、克雷伯菌屬、腸桿菌屬和枸櫞酸桿菌屬均分離出對碳青霉烯類抗生素的耐藥株，大腸埃希菌對美羅培南的耐藥率為1.1%，克雷伯菌屬對厄他培南的耐藥率為4.8%，腸桿菌屬對美羅培南的耐藥率為1.2%，枸櫞酸桿菌屬對美羅培南的耐藥率為2.1%。目前，國內報道碳青霉烯類抗生素耐藥的腸桿菌科細菌的主要耐藥機制是產生KPC-2型碳青霉烯酶，少數菌株為產ESBL和AmpC酶合并外膜孔蛋白缺失等［13］，本研究中出現的耐藥菌株屬于何種機制，值得進一步研究。

建立細菌耐藥監(jiān)測體系，了解臨床細菌尤其是耐藥菌的分布和傳播趨勢，為臨床合理使用抗菌藥物提供實驗室依據，對臨床治療和采取措施控制這些耐藥菌株在醫(yī)院內的傳播和流行有著重要意義。

［1］ Oplustil CP，Nunes R，Mendes C，et al.Multicenter evaluation of resistance patterns ofKlebsiella pneumoniae，Escherichia coli，Salmonellaspp.andShigellaspp.isolated from clinical specimens in Brazil；Resistnet Surveillance Program［J］.Braz J Infect Dis，2001，5（1）；8-12.

［2］ 葉應嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程［M］.3版.南京；東南大學出版社，2006；801-821.

［3］ Clinical and Laboratory Standards Institute（CLSI）.Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing，Tweentyfirst Informational Supplement［S］.2011，M100-S21.

［4］ Falagas ME，Karageorgopoulos DE.Pandrug resistance（PDR），extensive drug resistance（XDR），and multidrug resistance（MDR）among Gram-negative bacilli；need for international harmonization in terminology［J］.Clin Infect Dis，2008，46 （7）；1121-1122.

［5］ 胡付品，朱德妹，汪復，等.2011年中國CHINET細菌耐藥性監(jiān)測［J］.中國感染與化療雜志，2012，12（5）；321-329.

［6］ 張晉會，申瑞翔，牛俊杰.2007—2010年醫(yī)院分離細菌的耐藥性分析［J］.中華醫(yī)院感染學雜志，2012，22（1）；179-181.

［7］ 王輝，侯萬樂，龔志偉.醫(yī)院感染革蘭陰性桿菌的分布及耐藥性分析［J］.中華醫(yī)院感染學雜志，2010，20（3）；414-416.

［8］ 劉紅.產超廣譜β內酰胺酶肺炎克雷伯菌耐藥性分析［J］.臨床肺科雜志，2010，15（3）；426.

［9］ 王金果，余方友.革蘭陰性桿菌對亞胺培南耐藥率的變遷［J］.中國抗生素雜志，2008，33（5）；300-302.

［10］ Rhomberg PR，Jones RN.Summary trends for the meropenem yearly susceptibility test information collection program；a 10-year experience in the United States（1999-2008）［J］.Diagn Microbiol Infect Dis，2009，65（4）；414-426.

［11］ Hidron AI，Edwards JR，Patel J，et al.NHSN annual update；antimicrobial resistant pathogens associated with healthcareassociated infections；annual summary of data reported to the National Healthcare Safety Network at the Centers for Disease Control and Prevention，2006—2007［J］.Infect Control Hosp Epidemiol，2008，29（11）；996-1011.

［12］ Deshpande LM，Rhomberg PR，Sader HS，et al.Emergence of serine carbapenemases（KPCand SME）among clinical strains ofEnterobacteriaceaeisolates in the United States Medical Centers；report from the MYSTIC Program（1999-2005）［J］.Diagn Microbiol Infect Dis，2006，56（4）；367-372.

［13］ Chen S，Hu F，Xu X，et al.High prevalence of KPC-2 type carbapenemase coupled with CTX-M type extended-spectrum beta-lactamases in carbapenem-resistanceKlebsiella pneumoniaein a teaching hospital in China［J］.Antimicrob Agents Chemother，2011，55（5）；2493-2494.

Analysis of antibiotic resistance in 1 580 clinical strains of Enterobacteriaceae

FANG Yaping，LIU Zhou，TONG Yang，ZHOU Qiang，GUAN Shihe，SHEN Jilu.（Department of Laboratory Medicine，the Second Hospital Affiliated to Anhui Medical University，Hefei 230601，China）

；ObjectiveTo investigate the distribution and antibiotic resistance ofEnterobacteriaceaeisolates in 2012.MethodsThe bacterial strains were routinely isolated and identified.Antimicrobial susceptibility testing was performed using Kirby-Bauer method.The results were analyzed according to the standards recommended by CLSI 2011.ResultsA total of 1 580Enterobacteriaceaestrains were collected.The most common species wereE.coli（51.3%），Klebsiellaspp.（26.4%）andEnterobacterspp.（12.2%）.The main source of the isolates was urine and sputum.The antimicrobial susceptibility results showed thatEnterobacteriaceaestrains were the least resistant to carbapenems（＜5%）.The resistance rate to amikacin and piperacillin-tazobactam was lower than 20%.These strains showed the highest resistance rate to ampicillin and cefazolin.ConclusionsEnterobacteriaceaeisolates are mostly sensitive to carbapenem antibiotics，but resistant strains are emerging.

；Enterobacteriaceae； antibiotic resistance； carbapenems

R378

A

1009-7708（2015）02-0171-04

2014-05-21

2014-08-08

國家自然科學基金（81171618）；安徽省教育廳科研基金（KJ2012Z165）。

1.安徽醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院檢驗科，合肥 230601；2.安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院。

方亞平（1974—），女，醫(yī)學碩士，主管技師，主要從事臨床微生物檢驗。

沈繼錄，E-mail；Shenjilu?126.com。