A和521T>C在南昌地區(qū)漢族原發(fā)性高脂血癥人群中的分布。方法分別采用PCR-RFLP和ARMS-PCR方法對280名居住于南昌地區(qū)漢族原發(fā)性高脂血癥患者SLCO1B1的388G>A和521T>C位點進行基因分型,并對其進行Hardy-Weinberg平"/>
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    南昌地區(qū)漢族原發(fā)性高脂血癥人群中 SLCO1B1基因的分布

    2015-01-05 00:53:39唐斌黃丹傅強
    中國現(xiàn)代醫(yī)生 2014年34期
    關(guān)鍵詞:基因型

    唐斌+黃丹+傅強

    [摘要] 目的 分析SLCO1B1的主要突變388G>A和521T>C在南昌地區(qū)漢族原發(fā)性高脂血癥人群中的分布。 方法 分別采用PCR-RFLP和ARMS-PCR方法對280名居住于南昌地區(qū)漢族原發(fā)性高脂血癥患者SLCO1B1的388G>A和521T>C位點進行基因分型,并對其進行Hardy-Weinberg平衡檢驗。 結(jié)果 280名受試者中,SLCO1B1的388G>A位點:110名為388G>A突變雜合子,141名為388G突變純合子,分別占總?cè)藬?shù)的39.3%和50.3%,余29名為388A野生型純合子,占總?cè)藬?shù)的10.4%,突變等位基因的發(fā)生頻率為70.0%。521T>C位點:60名為521T>C突變型雜合子,6名為521C突變型純合子,分別占總?cè)藬?shù)的21.4%和2.1%,余214名為521T野生型純合子,占總?cè)藬?shù)的76.5%,突變等位基因的發(fā)生頻率為12.9%。 結(jié)論 南昌地區(qū)漢族原發(fā)性高脂血癥人群中的SLCO1B1 388G>A和521T>C突變與日本及中國漢族男性健康人群分布相似,388G>A突變率顯著高于白人,521T>C突變率顯著高于黑人。

    [關(guān)鍵詞] SLCO1B1;基因型;原發(fā)性高脂血癥

    [中圖分類號] R394 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2014)34-0001-03

    有機陰離子轉(zhuǎn)運多肽OATP1B1是一種表達在竇狀隙基底側(cè)細胞膜上的攝入型轉(zhuǎn)運體,為具有基因多態(tài)性的跨膜轉(zhuǎn)運蛋白[1,2] ,由SLCO1B1基因編碼,它主要分布于人的肝臟,其他還可見于腎臟、腦、小腸等器官,具有介導(dǎo)肝細胞膜轉(zhuǎn)運內(nèi)、外源性物質(zhì)并對其進行代謝和消除的生理功能。轉(zhuǎn)運物質(zhì)包括他汀類、降糖藥、利福平、血管緊張素Ⅱ 受體拮抗劑和膽汁酸、非結(jié)合型膽紅素、甲狀腺素、PGE和某些肽類[3],Hirouchi M[4]等和Chung JY等[5]研究發(fā)現(xiàn),SLCO1B1多態(tài)性在OATP1B1的轉(zhuǎn)運功能和藥代動力學(xué)個體差異上起著重要作用。日本研究者報道,388G>A和521T>C是其人群中常見基因突變,頻率分別為66%和15.8%[6]。然而關(guān)于南昌地區(qū)原發(fā)性高脂血癥人群中的情況分別未見報道,本文擬對此作一研究,以期為原發(fā)性高脂血癥患者藥效和藥動學(xué)的個體差異提供依據(jù)。

    1 對象與方法

    1.1 研究對象

    參考《血脂異常防治建議》從江西省人民醫(yī)院2013 年7~12月門診就診患者中篩選280名居住于南昌地區(qū)漢族無血源關(guān)系原發(fā)性高脂血癥患者,男132例,女148例,年齡33~70 (55.8±9.2)歲;身高144~184(163.6±8.6)cm;體重40~90(66.6±10.5)kg。

    1.2 方法

    1.2.1 材料 引物:南昌長城生物科技有限公司合成;DNA 提取試劑:美國Pel-Freez 公司;LA Taq DNA 聚合酶,Taq DNA 聚合酶,限制性內(nèi)切酶TaqI及dNTP (MBI Fermentas,Lithuania):深圳晶美生物工程有限公司。

    1.2.2 DNA抽提 采取受試者清晨空腹外周EDTA抗凝靜脈血5 mL,以DNA提取試劑盒提取外周血DNA。

    1.2.3 基因分型 參考基因分型優(yōu)化文獻[7]。

    1.2.3.1 388G>A分型:采用PCR-RFLP進行:其引物為:F:5-ATAATGGTGCAAATAAAGGGG-3,R:5-ACTATCTCAGGTGATGCTCTA-3。反應(yīng)體系(25 μL):10×PCR Master Mix 2.5 μL,DNA模板約200 ng,前后引物各40 pmol/L,Taq酶2.0 U,0.4 mmol/L dNTP,余額體積補充純水完成。PCR反應(yīng)條件:94℃ 5 min,94℃30 s,44℃ 30 s,72℃ 30 s,38個循環(huán),72℃ 7 min。388G>A 位點PCR擴增產(chǎn)物2.5%的瓊脂糖凝膠對酶切產(chǎn)物進行電泳分型。擴增產(chǎn)物酶切反應(yīng)體系:10 μLPCR擴增產(chǎn)物,1 μL的Taq I 酶,1 μL 10×H Master Mix,3 μL純水,65℃溫育4 h。2.5%的瓊脂糖凝膠對酶切產(chǎn)物進行電泳分型。

    1.2.3.2 521T>C 分型:以ARMS-PCR方法進行分型。引物:OuterP1:5-AAGTAGTTAAATTTGTAATAGAAATGC-3,InnerP1:5-GGGTCATACATGTGGATATAAGT-3,InnerP2:5-AAGCATATTACCCATGAACG-3,OuterP2:-GTAGACAAAGGGAAAGTGATCATA-3,反應(yīng)體系(25 μL):10×PCR Master Mix 2.5μL,Taq酶2U,dNTP 0.4 mmol/L,hDNA模板200 ng,各引物均為40 pmol/L,余額取純水補足。PCR反應(yīng)條件:94℃ 5 min,94℃ 30 s,48℃ 30 s,72℃ 30 s,38個循環(huán),72℃ 5 min。2.5%的瓊脂糖凝膠對酶切產(chǎn)物進行電泳分型。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

    采用SPSS 12.0軟件包進行數(shù)據(jù)分析。使用頻率計數(shù)法計算基因型頻率及等位基因頻率,兩組間比較采用卡方檢驗基因型是否符合Hardy-Weinberg平衡。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 基因型的判定

    388G>A基因:如圖1: 2.5%的瓊脂糖凝膠電泳拍照圖所示:突變型雜合子:23bp、63bp、123bp與151bp等4處顯示亮帶;突變型純合子:23bp 、63bp及128bp等3處顯示亮帶,野生型純合子:63bp和151bp 2處顯示亮帶。521T>C基因:如圖2:2.5%的瓊脂糖凝膠電泳拍照圖所顯:突變型雜合:123bp、179bp與260bp等3處顯示亮帶;突變型純合子:123bp 和260bp 2處顯示亮帶;野生型純合子:179bp和 260bp 2處顯示亮帶。

    2.2 基因型分布及等位基因頻率分布

    基因型和各等位基因的頻率如表1。280名南昌地區(qū)漢族原發(fā)性高脂血癥患者中,388G>A:檢測出29例受試者為野生型純合子,占總?cè)藬?shù)的10.4%;突變純合子141例,占比為50.3%;其余110例是比例為39.3%的突變雜合子,等位基因突變發(fā)生率為70.0%。521T>C:檢測出214例野生型純合子,占總?cè)藬?shù)的76.5%;6例突變型純合子,占2.1%,余60例突變型雜合子,占總?cè)藬?shù)的21.4%,等位基因突變發(fā)生率為12.9%。兩基因觀察值符合Hardy-weinberg 遺傳平衡。表明本研究資料具有群體代表性(P=0.31和P=0.94)。

    3 討論

    目前大多研究證實轉(zhuǎn)運體及藥物代謝酶的遺傳多態(tài)性與藥物相互作用的個體差異具有重要的相關(guān)性。近年來體內(nèi)或體外研究證明攝入型轉(zhuǎn)運蛋白OATP1B1在藥物底物的轉(zhuǎn)運代謝起著重要的作用。目前在不同研究人群中各國研究者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)SLCO 1B1基因(編碼OATP1B1蛋白)多達20種基因突變[7]。當前研究多集中在常見的兩個突變位點,位于第5外顯子的388A>G與第6外顯子的521T>C,上述兩個位點的突變明顯影響許多底物的轉(zhuǎn)運活性、轉(zhuǎn)運速度及與底物結(jié)合力。

    本文將南昌地區(qū)漢族原發(fā)性高脂血癥人群388G>A與521T>C等位基因突變分布情況與報道的中國漢族男性健康、歐美和日本人群作一比較:本研究388G>A等位基因突變頻率為70.0%,顯著高于白人30%的突變率(P<0.05),與報道中國漢族男性健康人群(73.4%)、黑人(74%)及日本人群(62.9%)之間無顯著差異(P>0.05)。在本研究中521T>C等位基因突變率為12.9%,顯著高于黑人的2%的突變率(P<0.05),與報道中國漢族男性健康人群(14.0%)、白人(14%)及日本人群(15.8%)之間無顯著差異(P>0.05)[6,8,9]。上述結(jié)果表明,在不同人群中388G>A和521T>C突變率不同種族間具有顯著的差異。

    目前多數(shù)報道顯示,SLCO1B1基因多態(tài)性明顯影響其參與轉(zhuǎn)運藥物的藥效動力學(xué)、藥物毒性以及藥代動力學(xué)[10]。如目前報道的廣泛應(yīng)用于高脂血癥治療的HMG-CoA還原酶抑制劑瑞舒伐他汀,其被SLCO1B1轉(zhuǎn)運入肝而行調(diào)脂作用,熊玉卿等[11]研究報道,521T>C 位點突變影響瑞舒伐他汀藥代動力學(xué),使其轉(zhuǎn)運體活性下降,增高血藥濃度,可能與突變后增加瑞舒伐他汀在人體內(nèi)的吸收程度,減慢消除過程有關(guān)。國外日本與德國研究者分別報道顯示,521T>C野生型純合子組血藥濃度顯著低于突變組,而其非腎清除率顯著高于突變組。而對于388G>A的突變是否影響藥效動力學(xué)、藥代動力學(xué)目前研究結(jié)論不一致。德國研究者報道,388G>A突變組普伐他汀血藥濃度顯著升高,然而較多數(shù)體內(nèi)外實驗未見該突變的上述影響[12,13]。而在關(guān)于非結(jié)合膽紅素水平的研究中,日本、臺灣與中國大陸的研究者報道SLCO1B1521T>C突變導(dǎo)致個體血漿濃度明顯高于非突變?nèi)巳篬7,14,15]。以上顯示,SLCO1B1基因多態(tài)性顯著影響某些藥物的藥代動力學(xué)及藥物濃度,其研究對于臨床個體化用藥具有重要指導(dǎo)意義,如臨床醫(yī)師在使用涉及到該兩個突變基因參與轉(zhuǎn)運與代謝的底物如他汀類,抗結(jié)核藥及降糖等藥物時, 應(yīng)參考其基因型檢測結(jié)果,以期提高藥物療效及減少副作用。

    綜上所述:在南昌地區(qū)漢族原發(fā)性高脂血癥人群中SLCO1B1的388G>A和521T>C突變比較常見,其突變率與日本、中國漢族男性健康人相近,與報道的白人和黑人頻率有顯著差異,提示其突變率可能與原發(fā)性高脂血癥發(fā)病無關(guān),但可能與種族有關(guān),此種差異可能是遺傳因素與環(huán)境因素等多因素的相互作用結(jié)果,具體機制有待進一步研究。

    [參考文獻]

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    (收稿日期:2014-09-24)

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