應(yīng)用木腐菌處理松材線蟲病疫木伐樁的研究

鄧習(xí)金 劉 暉 羅惠文 黃燕洪

（1.贛州市森林防火指揮部辦公室，江西 贛州341000；2.贛州市峰山森林公園管理處，江西 贛州341000；

3.贛州市林業(yè)有害生物防治檢疫局，江西 贛州341000）

松材線蟲病病死樹的疫木伐樁中含有松材線蟲（Bursaphelenchus xylophilus(Steinerffamp;Buhrer)Nickle）（pine wilt nematode,PWN)和松褐天牛幼蟲，也是松材線蟲病重要侵染源之一[1]。然而，目前生產(chǎn)上大多關(guān)注的是病木的處理，即在發(fā)病當(dāng)年的秋冬季清理病木,集中進(jìn)行藥劑熏蒸等處理，以消滅病木中的松褐天牛幼蟲和減少疫木中所含松材線蟲數(shù)量，而往往忽視了對伐樁的除害處理[2]。要保證松材線蟲病除治質(zhì)量就必須對伐樁進(jìn)行有效的除害[3-4]。但伐樁是松材線蟲病除治中的難點(diǎn)，目前松材線蟲病疫木伐樁的除害處理技術(shù)措施主要有：利用生防真菌（包括木腐菌）的生物防治措施，直接挖樹樁燒毀、剝皮挖蟲和覆土處理等物理機(jī)械措施，以及藥物熏蒸、藥物灌注和生石灰處理等化學(xué)措施[2]。

木材腐朽就是木材細(xì)胞壁被真菌分解時(shí)所引起的木材糟爛和解體的現(xiàn)象，能分解木材細(xì)胞壁的真菌為木材腐朽菌，簡稱木腐菌[5]。應(yīng)用在疫木伐樁上的產(chǎn)毒真菌多為木腐菌，利用木腐菌對松材線蟲的抑殺作用及對木材的分解、腐爛作用，在疫木早期被伐倒后，其它腐生菌尚未大量在伐樁上定殖時(shí),人工接種木腐菌使其在伐樁上定殖生長，解決即消滅疫木伐樁上的松材線蟲問題[6]。利用木腐菌、食用真菌接種處理松材線蟲病疫木伐樁是一項(xiàng)環(huán)保、有效的伐樁處理技術(shù)[7]。將松材線蟲病疫木伐樁作為木腐菌、食用真菌的栽培材料,能夠給疫區(qū)帶來良好的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益[8]，這一處理技術(shù)值得在松材線蟲病疫區(qū)推廣應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地概況

峰山國家森林公園在原省級森林公園的基礎(chǔ)上擴(kuò)建，位于贛州中心城區(qū)的東南角。公園總面積20735.2公頃，其中林業(yè)用地面積17323.7公頃。馬尾松是森林公園的主要植物。森林公園的馬尾松大部分是1986～1990年飛播造林后經(jīng)過長時(shí)間的封山育林形成的，以馬尾松純林為主，面積約3333.3公頃，主要位于龍村村、流坑村、南田村、火燃村、東風(fēng)村、雙橋村等。近幾年，該區(qū)域馬尾松林陸續(xù)受到松材線蟲病入侵和危害。

1.2 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)菌種：從野外分離培養(yǎng)并保存于本實(shí)驗(yàn)室的菌種見表1.斜面菌種在4℃冰箱中保藏。

松材線蟲：從上述試驗(yàn)地的疫木中分離得到，并接種在長滿盤多毛孢(Pestalotias sp.)的玉米粒培養(yǎng)基上，于25℃條件下培養(yǎng)12 d后獲得大量松材線蟲，放置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 木腐菌的篩選

將以上保存的真菌在PDA培養(yǎng)基上生長良好的木腐菌菌種，切取直徑為5 mm的同質(zhì)等量菌絲塊(帶有瓊脂培養(yǎng)基)，分別接入到PDA平板培養(yǎng)基的中間部位。接種后的培養(yǎng)基置于25℃溫箱中培養(yǎng)12 d，使菌種長滿或基本長滿平板。

將松材線蟲接入上述菌株的木腐菌菌落上，每皿接種1 000條，每菌株接種3皿，置于恒溫培養(yǎng)箱中，25℃培養(yǎng)12d，以貝爾曼漏斗法對線蟲進(jìn)行分離并計(jì)數(shù)。

1.3.2 優(yōu)良菌株的擴(kuò)大培養(yǎng)

將上述篩選出的優(yōu)良菌株置于液體培養(yǎng)基（成分為：玉米粉3g，蛋白胨1.5g，MgSO4·7H2O 0.05g，KH2PO40.1g，水100mL)內(nèi)恒溫27℃振蕩培養(yǎng)7d。

1.3.3 伐樁接種木腐菌

選擇晴天午后或陰天進(jìn)行接種，根據(jù)各個(gè)木腐菌的栽培特點(diǎn)在伐樁上進(jìn)行接種，接種時(shí)將事先準(zhǔn)備好的接種材料涂抹在伐樁表面，然后蓋上透氣薄膜以利保濕，一袋接種材料接種4～5個(gè)伐樁。每株木腐菌接種處理25個(gè)伐樁。接菌處理時(shí)間為70d。

1.4 數(shù)據(jù)分析

所有數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行方差分析、新復(fù)極差法差異顯著性檢驗(yàn)及多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 木腐菌對松材線蟲的抑制作用

將松材線蟲接入13種木腐菌菌落上培養(yǎng)10d后分離的松材線蟲數(shù)量見表1。由表1可見，從虎掌菌、松生擬層孔菌、粗皮側(cè)耳、硫磺菌、茯苓和靈芝等菌落上完全沒有分離到松材線蟲，說明這6個(gè)菌的菌落完全抑制了松材線蟲的數(shù)量增加；從繡球菌、黑木耳、潔麗香菇、樺褶孔菌和密粘褶菌等菌落上只分離到少量的松材線蟲，說明這5個(gè)菌對松材線蟲的數(shù)量增加也有明顯抑制作用；裂褶菌和雜色云芝的菌落上分離到大量的松材線蟲，而且其數(shù)量與其他各處理分離的松材線蟲數(shù)量存在明顯差異（P≤0.05），說明這2種菌對松材線蟲的生長與繁殖沒有抑制作用。

表1 松材線蟲在木腐菌菌落上培養(yǎng)10d的數(shù)量Tab.1 Number of B.xylophilus on wood decaying fungiin 10d

2.2.1 對伐樁樣品重量的影響

野外試驗(yàn)所選的木腐菌為虎掌菌、松生擬層孔菌、粗皮側(cè)耳、硫磺菌和茯苓，接菌處理70d后93個(gè)接菌伐樁樣品及24個(gè)對照伐樁樣品的重量及不同木腐菌對伐樁樣品重量的影響顯著性檢驗(yàn)結(jié)果見表2。由表2知，接菌處理后的伐樁樣品重量均比對照伐樁樣品重量低，在伐樁上接種粗皮側(cè)耳菌、虎掌菌、松生擬層孔菌、硫磺菌和茯苓菌處理伐樁70d后伐樁樣品平均重量均比對照伐樁樣品平均重量輕；接種硫磺菌處理伐樁70d后伐樁樣品的重量與對照伐樁樣品的重量差異顯著，接種另外4個(gè)菌處理伐樁70d后伐樁樣品的重量與對照伐樁樣品的重量差異不顯著。

2.2 木腐菌對松材線蟲病疫木伐樁的作用

表2 伐樁樣品重量及顯著性檢驗(yàn)(t檢驗(yàn))Tab.2 The weight of samples from stumps and Samples T Test

2.2.2 伐樁樣品中松材線蟲的數(shù)量

在松材線蟲病疫木伐樁上接菌處理70d后，定量（30g）分離伐樁樣品中松材線蟲數(shù)量及不同木腐菌對伐樁中松材線蟲數(shù)量的影響顯著性檢驗(yàn)結(jié)果見表3。由表3可見，在野外接種試驗(yàn)的各個(gè)伐樁中都分離到一定數(shù)量的松材線蟲，其中接種硫磺菌處理伐樁70d后從伐樁樣品中分離到的松材線蟲數(shù)量最少，僅為897.9條，與對照相比較差異顯著。接種松生擬層孔菌和獲苓菌處理后從伐樁中分離到的松材線蟲數(shù)量比對照還多（但差異不顯著），分別為2534.6條和2616.2條，而對照伐樁中分離到的松材線蟲為2428.3條。

2.2.3 伐樁中松材線蟲數(shù)量和伐樁樣品重量的相關(guān)性分析

在松材線蟲病疫木伐樁上接菌處理70d后，對每個(gè)伐樁內(nèi)分離到的松材線蟲數(shù)量和伐樁樣品重量作線性相關(guān)分析（見圖1），得出兩者之間的相關(guān)系數(shù)為0.5786，該結(jié)果表明伐樁內(nèi)松材線蟲數(shù)量與伐樁樣品重量呈正相關(guān)關(guān)系（y=4113.2x-6676.9），其相關(guān)性達(dá)到了顯著水平，說明伐樁受木腐菌侵染被其分解后對伐樁內(nèi)的松材線蟲數(shù)量有顯著的影響。

表3 伐樁樣品中松材線蟲的數(shù)量及顯著性檢驗(yàn)(t檢驗(yàn))Tab.3 The number of PWN isolated from stumps and Samples T Test

圖1 伐樁中松材線蟲數(shù)量和伐樁樣品重量的相關(guān)性Fig.1 The correlation of the PWN number and the weight of samples from stumps

3 結(jié)論與討論

據(jù)報(bào)道，某些真菌對松材線蟲的生長和繁殖具有較強(qiáng)的抑制作用[9-11]。線蟲生防真菌，根據(jù)其侵害線蟲的習(xí)性，可分為捕食真菌、內(nèi)寄生真菌和產(chǎn)毒真菌，前2類是利用其生物活體對線蟲進(jìn)行防治，產(chǎn)毒真菌是以其代謝產(chǎn)物毒殺線蟲[9-11]。向紅瓊等(2000)報(bào)道，粗皮側(cè)耳對線蟲致病的實(shí)質(zhì)是殺主寄生，菌絲分泌的毒素首先將線蟲擊倒并殺死，然后菌絲從線蟲體孔侵入，或靠酶和機(jī)械力的作用從表皮侵入，最后消解、吸收和利用線蟲[12]。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)所用的13種木腐菌（含食用菌）除裂褶菌和雜色云芝菌外,其它所用菌均能夠很好地抑制松材線蟲的繁殖。其中虎掌菌、松生擬層孔菌、粗皮側(cè)耳、硫磺菌、茯苓和靈芝對松材線蟲的繁殖有很強(qiáng)的抑制作用，松材線蟲在其菌落上完全不能存活,可見本試驗(yàn)所用的木腐菌對松材線蟲具有比較強(qiáng)的抑殺作用。

對本次試驗(yàn)中各個(gè)處理伐樁樣品的重量分析表明，接菌處理的伐樁樣品重量比對照伐樁樣品重量輕，說明接菌處理70d后，5個(gè)木腐菌都分別對疫木伐樁起到了一定的分解作用。但在野外試驗(yàn)過程中，由于定殖競爭力的存在導(dǎo)致各個(gè)木腐菌在伐樁上的定殖能力出現(xiàn)差異，從而造成了各個(gè)木腐菌對伐樁分解能力的差異。

對每個(gè)伐樁內(nèi)分離到的松材線蟲數(shù)量和伐樁樣品重量作相關(guān)分析結(jié)果表明，木腐菌對伐樁的分解能力越強(qiáng)則該菌株對伐樁內(nèi)的松材線蟲的抑殺作用也越強(qiáng)。由此可見，接種木腐菌處理松材線蟲病疫木伐樁效果的好壞在于所接種木腐菌對伐樁分解能力的強(qiáng)弱，而木腐菌在野外試驗(yàn)條件下對伐樁的分解能力強(qiáng)弱取決于該菌株在伐樁上定殖能力的強(qiáng)弱，定殖能力強(qiáng)的木腐菌能夠很好地在伐樁上定殖，進(jìn)而對伐樁進(jìn)行分解同時(shí)有效地作用于伐樁內(nèi)的松材線蟲。如硫磺菌處理的伐樁樣品質(zhì)量減少最多、所含線蟲數(shù)最少，說明其對疫木伐樁具有較強(qiáng)的分解力和定殖力以及對線蟲的抑殺作用。

本試驗(yàn)所用的5個(gè)木腐菌菌株都具有一定的藥用或食用價(jià)值，該5個(gè)菌株在田間試驗(yàn)中都表現(xiàn)出對伐樁具有不同的分解能力。可見利用木腐菌、食用真菌接種處理松材線蟲病疫木伐樁是一項(xiàng)環(huán)保、有效的伐樁處理技術(shù)，值得推廣應(yīng)用[8]。

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