許國(guó)晶,杜興華, 王春生, 田功太, 張金路, 張明磊, 栗 明, 李 敏,
馬亞梅3
(1.山東省淡水漁業(yè)研究院,山東 濟(jì)南250013;2.上海海洋大學(xué)生命學(xué)院,上海201306;3.山東省魚臺(tái)縣漁業(yè)技術(shù)推廣站,山東 魚臺(tái)272300)
水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中排放的污染物危害了水域生態(tài)環(huán)境,對(duì)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展造成了一定影響。有效改善養(yǎng)殖池塘水環(huán)境質(zhì)量,減少污染物排放量,對(duì)保證水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展具有重要意義。目前,許多專家學(xué)者采用不同的方法研究養(yǎng)殖水體凈化。其中有益微生物菌群(Effective microoganisms,EM)對(duì)養(yǎng)殖廢水的凈化已經(jīng)得到很多學(xué)者的證實(shí)[1-3]。有效微生物菌是由多種有益菌群(光合細(xì)菌、乳酸菌、芽孢桿菌、硝化細(xì)菌等)組成[1,4],在凈化水質(zhì)、降低氨氮(NH+4-N)和亞硝態(tài)氮(NO-2-N)等污染物濃度和實(shí)現(xiàn)健康養(yǎng)殖方面發(fā)揮重要作用[5-6]。邵青[5]通過實(shí)驗(yàn)證明EM 菌可顯著提高氨氮(NH+4-N)和總磷(TP)的去除率;田功太等[6]研究了EM 菌原液對(duì)海參養(yǎng)殖水體的凈化效果,發(fā)現(xiàn)EM 菌能顯著降解NH+4-N、NO-2-N、化學(xué)耗氧量(Chemical oxygen demand,COD)。
利用水生植物凈化修復(fù)水體是一種成本低廉、節(jié)約能源、簡(jiǎn)便易行的辦法,作為水體凈化修復(fù)的有效手段被廣泛運(yùn)用于研究和實(shí)踐[7-10]。其中大薸(Pistia stratiotes)為一種多年生漂浮性的水生植物,在養(yǎng)殖排放水和城市污水處理中發(fā)揮重要作用[11-17]。Nahlik 等[16]等利用水葫蘆(Eichhornia crassipes)和大薸凈化濕地廢水,結(jié)果表明兩種水生植物對(duì)NO-2-N、TP 有較好的去除效果;王國(guó)惠[17]在研究大薸和海芋(Alocasia macrorrhiza)對(duì)池塘水凈化時(shí)發(fā)現(xiàn),兩種植物對(duì)NH+4-N 和COD 有明顯的去除效果。但是目前把EM 菌和大薸(即有效微生物菌群和水生植物)相結(jié)合來凈化養(yǎng)殖排放水的研究還很少。水生植物及其根系為微生物生長(zhǎng)、繁殖提供了良好的生長(zhǎng)環(huán)境,直接或間接地促進(jìn)微生物對(duì)氮、磷、硫和COD 的代謝[18-20],從而有利于微生物和水生植物更好地聯(lián)合凈化養(yǎng)殖水體。因此,本研究利用EM 菌與大薸構(gòu)建微生物-水生植物聯(lián)合凈化體系,比較不同大薸覆蓋面積構(gòu)建的聯(lián)合凈化體系對(duì)總氮(TN)、TP、NH+4-N、NO2--N、COD 等的去除效果,分析該聯(lián)合凈化體系對(duì)養(yǎng)殖水體中氮、磷等物質(zhì)的去除率,從而為構(gòu)建養(yǎng)殖水凈化技術(shù)體系提供技術(shù)支撐。
EM 原液由山東濟(jì)寧九益生物科技有限公司提供,有效微生物含量為1.0 ×1010CFU/ml,主要成分為光合細(xì)菌(Photosynthetic bacteria)、硝化細(xì)菌(Nitrobacteria)、乳酸菌(Lactobacill)、放線菌(Actinomycetes)、酵母菌(Yeast)及芽孢桿菌(Bacillus cohn)。
水生植物采用大薸,選取個(gè)體均勻完整、葉子較小、具有快速生長(zhǎng)特性的植株,先用供試水體進(jìn)行14 d 的預(yù)馴化培養(yǎng),待用。
試驗(yàn)在山東濟(jì)寧浩洋生態(tài)科技有限公司養(yǎng)殖基地進(jìn)行。選擇12 個(gè)代表性的小池塘,單個(gè)池塘面積為24 m2(4 m×6 m),池塘水深1.5 m。在每個(gè)池塘中放養(yǎng)鯉魚(Cyprinus carpio,規(guī)格每尾0.06 kg,密度1 m230.0 尾)、鰱魚(Hypophthalmichthys molitrix,規(guī)格每尾0.05 kg,密度1 m25.6 尾)和鳙魚(Aristichthys nobilis,規(guī)格每尾0.05 kg,密度1 m21.5 尾),各池塘中放養(yǎng)魚的種類、數(shù)量、規(guī)格基本一致。試驗(yàn)共分4組,第1、2 組分別移植覆蓋面積為10%、20%的大薸(分別為3.5 kg、7.0 kg),浮床邊框采用竹竿為材料,并在此基礎(chǔ)上添加EM 菌液,終濃度為3.0×1010CFU/m3;第3 組只添加EM 菌液,終濃度同上;第4 組為空白對(duì)照組。每組3 個(gè)重復(fù)。在放置大薸及EM菌液前(即0 d)采樣1 次,作為對(duì)照,放置之后每隔2 d 采樣檢測(cè)1 次,連續(xù)檢測(cè)8 次。
魚種放入水泥池后第2 d 開始投喂德琨牌鯉魚配合飼料。每天分別于上午8∶ 00及下午15∶ 00投喂,每個(gè)池塘投喂量占魚體質(zhì)量的比例均為2% ~3%。投喂至試驗(yàn)結(jié)束。
每次取樣檢測(cè)時(shí)間均為當(dāng)日上午8∶ 00,在水面下30 cm 處采樣5 L,采集的水樣立即送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),在24 h 內(nèi)完成相應(yīng)的分析測(cè)試。水溫、pH 值、溶解氧(DO)采用YSI556MPS 多參數(shù)水質(zhì)儀現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定。濃度等用Spectroquant Pharo 100 分光光度計(jì)(德國(guó)MERCK 公司生產(chǎn))測(cè)定;COD 濃度測(cè)定方法:用消解爐148 ℃消解2 h 后,用Spectroquant Pharo 100 分光光度計(jì)測(cè)定。
考慮到試驗(yàn)條件下水體內(nèi)可能發(fā)生吸附、沉淀及降解等作用,為消除上述作用對(duì)去除效果的影響,準(zhǔn)確評(píng)價(jià)浮床的凈化效果,去除率計(jì)算中扣除了空白對(duì)照池塘的去除效果。計(jì)算方法為:去除率=(空白對(duì)照組濃度-處理組濃度)/空白對(duì)照組濃度×100%。
試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS16.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析。用Microsoft Excel 2007 進(jìn)行圖表處理。
圖1 反映了試驗(yàn)期間各池塘養(yǎng)殖水體中TN 隨時(shí)間的變化情況。從圖1 中可以看出,對(duì)照組和處理組中TN 濃度呈現(xiàn)隨時(shí)間上升的趨勢(shì)。從試驗(yàn)開始至試驗(yàn)結(jié)束時(shí),對(duì)照組池塘TN 的濃度從2.00 mg/L 上升到3.80 mg/L,增加1.80 mg/L;EM 菌液組從1.80 mg/L上升到3.00 mg/L,增加1.20 mg/L;EM 菌液+10% 大薸組從1.70 mg/L上升到2.33 mg/L,增加0.67 mg/L;EM 菌液+20% 大薸組從1.80 mg/L 上升到1.87 mg/L,增加0.07 mg/L。試驗(yàn)結(jié)果表明,各處理組TN 水平的絕對(duì)增加量均顯著低于對(duì)照組(P<0.05),同時(shí)EM 菌液+10%大薸組及EM 菌液+20%大薸組TN 絕對(duì)增加量顯著低于EM 菌液組(P<0.05),并且隨移植面積的增大,EM 菌液+大薸組TN 水平的絕對(duì)增加量呈下降趨勢(shì),但兩組間差異不顯著。在試驗(yàn)后期(14 d),各處理組TN 水平均能達(dá)到淡水養(yǎng)殖排放水一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)(SC/T9101-2007)。從圖1 還可以看出,EM 菌液組、EM 菌液+10%大薸組及EM 菌液+20%大薸組在前8 d 對(duì)TN 的去除速率較快,8 d 之后,去除速率明顯下降。到14 d 時(shí),EM 菌液+10%大薸組對(duì)TN的去除率為38.60%,EM 菌液+20%大薸組對(duì)TN的去除率為50.88%,均顯著高于EM 菌液組去除率21.05%(P<0.05)。
圖1 EM 菌和大薸處理組中總氮(TN)濃度及去除率的變化Fig.1 The changes of total nitrogen (TN)concentration and removal rate in effective microorganisms (EM)and Pistia stratiotes treatment groups
從圖2 中可以看出,試驗(yàn)期間對(duì)照組和EM 菌液組NH4+-N 濃度在第8 d 達(dá)到最高值,試驗(yàn)后期(8 ~14 d)有不同程度的下降;EM 菌液+10%大薸組及EM 菌液+20%大薸組NH+4 -N 濃度整體呈下降趨勢(shì)。對(duì)照組中NH+4-N 濃度變化范圍為0.35 ~1.24 mg/L,在14 d 時(shí)NH+4-N 濃度為0.99 mg/L,較試驗(yàn)初期(0 d)增加0.64 mg/L;EM 菌液組變化范圍為0.33 ~0.59 mg/L,在14 d 時(shí)NH+4-N 濃度為0.33 mg/L,較試驗(yàn)初期沒有變化;EM 菌液+10%大薸組變化范圍為0.17 ~0.31 mg/L,在14 d 時(shí)NH+4-N 濃度為0.20 mg/L,較試驗(yàn)初期下降0.11 mg/L,與對(duì)照組差異顯著(P<0.05);EM 菌液+20%大薸組變化范圍為0.17 ~0.28 mg/L,在14 d 時(shí)濃 度 為0.17 mg/ml,較試驗(yàn)初期下降0.11 mg/L,與對(duì)照組差異顯著(P<0.05)。試驗(yàn)結(jié)果表明,添加EM 菌液后,水體中NH+4-N 濃度得到了控制,其中EM 菌液+10%大薸組及EM 菌液+20%大薸組NH4+-N 減少量顯著高于EM 菌液組(P<0.05),但兩組之間NH+4-N 減少量差異不顯著。從圖2 還可以看出,EM 菌液+10%大薸組及EM 菌液+20%大薸組在前8 d 對(duì)NH+4-N 的去除速率較快,8 d 之后,去除速率明顯下降。到第14 d 時(shí),EM 菌液+10%大薸組對(duì)NH+4-N 的去除率為79.46%,EM 菌液+20%大薸組對(duì)NH+4 -N 的去除率為83.16%,均顯著高于EM 菌液組對(duì)NH+4-N 的去除率66.67%(P<0.05)。
圖2 EM 菌和大薸處理組中NH +4 -N 濃度及去除率的變化Fig.2 The changes of NH +4 -N concentration and removal rate in EM and P.stratiotes treatment groups
對(duì)照組、EM 菌液組、EM 菌液+10%大薸組和EM 菌液+20%大薸組水體中NO2--N 濃度的變化范圍分別在0.27 ~0.53 mg/L、0.18 ~0.25 mg/L、0.09~0.26 mg/L 和0.04 ~0.25 mg/L(圖3)。在14 d時(shí),對(duì)照組池塘較之于養(yǎng)殖初期NO-2-N 濃度上升0.26 mg/L;而EM 菌液組、EM 菌液+10%大薸組和EM 菌液+20%大薸組水體較之于養(yǎng)殖初期NO-2-N濃度分別下降0.07 mg/L、0.17 mg/L和0.21 mg/L。與對(duì)照組相比,各處理組NO-2-N 水平顯著降低(P<0.05),同時(shí)兩組EM 菌液+大薸處理組NO2--N減少量均顯著高于EM 菌液組(P<0.05),并且隨移植面積的增大,NO2--N水平的絕對(duì)減少量顯著增加(P<0.05)。EM 菌液+10%大薸組及EM 菌液+20%大薸組在前8 d 對(duì)NO-2 -N 的去除速率較快,8 d 之后,去除速率明顯下降。到14 d 時(shí),EM 菌液+10%大薸組對(duì)NO2--N 的去除率為81.63%,EM 菌液+20%大薸組對(duì)NO-2-N 的去除率為95.52%,均顯著高于EM菌液組對(duì)NO2--N 的去除率63.27%(P<0.05)。
圖3 EM 菌和大薸處理組中NO -2 -N 濃度及去除率的變化Fig.3 The changes of NO-2 -N concentration and removal rate in EM and P.stratiotes treatment groups
圖4 反映了試驗(yàn)期間各池塘養(yǎng)殖水體中NO3--N 濃度隨時(shí)間的變化情況。對(duì)照組中NO-3-N 的濃度變化范圍為0.80 ~1.10 mg/L,在14 d 時(shí)NO-3-N濃度為1.1 mg/L,較試驗(yàn)初期(0 d)增加0.30 mg/L;EM 菌液組NO-3-N 濃度變化范圍為0.90 ~1.40 mg/L,在14 d 時(shí)為1.40 mg/L,較試驗(yàn)初期增加0.40 mg/L,與對(duì)照組差異不顯著;EM 菌液+10%大薸組NO-3-N 濃度變化范圍為0.93 ~2.27 mg/L,在14 d 時(shí)為2.27 mg/L,較試驗(yàn)初期增加1.34 mg/L,與對(duì)照組差異顯著(P<0.05);EM 菌液+20%大薸組NO-3-N 濃度變化范圍為0.97 ~1.90 mg/L,在14 d 時(shí)較試驗(yàn)初期增加0.93 mg/L,與對(duì)照組差異顯著(P<0.05)。試驗(yàn)結(jié)果表明,EM 菌液+10%大薸組及EM 菌液+20%大薸組NO-3-N 增加量顯著高于EM 菌液組(P<0.05),但兩組之間NO3--N 增加量差異不顯著。
如圖5 所示,對(duì)照組、EM 菌液組、EM 菌液+10%大薸組和EM 菌液+20%大薸組水體中TP 濃度的變化范圍分別在0.08 ~0.43 mg/L、0.07 ~0.28 mg/L、0.07 ~0.20 mg/L 和0.07 ~0.18 mg/L。在14 d 時(shí),對(duì)照組池塘較之于養(yǎng)殖初期TP 濃度上升0.34 mg/L;EM 菌液組、EM 菌液+10%大薸組和EM 菌液+20%大薸組水體較之于養(yǎng)殖初期TP 濃度分別上升0.21 mg/L、0.12 mg/L、0.10 mg/L。各處理組TP 水平的絕對(duì)增加量均顯著低于對(duì)照組(P<0.05),同時(shí)兩組水生植物與EM 菌液處理組TP 增加量顯著低于EM 菌液組(P<0.05),并且EM 菌液+10%大薸組TP 增加量顯著低于EM 菌液+20%大薸組(P<0.05)。在試驗(yàn)后期(14 d),各處理組TP 水平均能達(dá)到淡水養(yǎng)殖排放水一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。從圖5 還可以看出,EM 菌液組、EM 菌液+10%大薸組及EM 菌液+20%大薸組在前8 d 對(duì)TN 的去除速率較快,8 d 之后,去除速率明顯下降。到14 d 時(shí),EM 菌液+10%大薸組對(duì)TP 的去除率為54.76%,EM 菌液+20%大薸組對(duì)TP 的去除率為60.32%,均顯著高于EM 菌液組對(duì)TP 的去除率33.33%(P<0.05)。
圖4 EM 菌和大薸處理組中NO -3 -N 濃度及去除率的變化Fig.4 The changes of NO -3 -N concentration in EM and P.stratiotes treatment groups
圖5 EM 菌和大薸處理組中總磷(TP)濃度及去除率的變化Fig.5 The dynamic changes of total phosphorus (TP)concentration and removal rate in EM and P.stratiotes treatment groups
對(duì)照組、EM 菌液組、EM 菌液+10%大薸組和EM 菌液+20%大薸組水體中COD 濃度的變化范圍分別在60 ~65 mg/L、48 ~61.67 mg/L、40 ~61.67 mg/L 和30.67 ~62.67 mg/L。在14 d 時(shí),對(duì)照組池塘COD 濃度較之于養(yǎng)殖初期COD 濃度下降3 mg/L;而EM 菌液組、EM 菌液+10%大薸組和EM 菌液+20%大薸組較之于養(yǎng)殖初期COD 濃度分別下降13.67 mg/L、21.67 mg/L、32 mg/L。與對(duì)照組相比,各處理組COD 水平顯著降低(P<0.05),同時(shí)兩組EM 菌液+大薸處理組COD 減少量均顯著高于EM菌液組(P<0.05),并且隨移植面積的增大,COD 水平的減少量顯著增加(P<0.05)。EM 菌液+10%大薸組對(duì)COD 的下降率為35.48%,EM 菌液+20%大薸組對(duì)COD 的下降率為50.54%,均顯著高于EM 菌液組對(duì)COD 的下降率22.58%(P<0.05)(圖6)。
圖6 EM 菌和大薸處理組中化學(xué)耗氧量(COD)濃度及下降率的變化Fig.6 The dynamic changes of chemical oxygen demand (COD)concentration and removal rate in EM and P.stratiotes treatment groups
對(duì)照組、EM 菌液組、EM 菌液+10%大薸組和EM 菌液+20%大薸組水體中DO 濃度的變化范圍分別在4.12 ~4.74 mg/L、4.14 ~5.54 mg/L、4.34 ~7.27 mg/L 和4.43 ~7.78 mg/L(圖7)。在14 d 時(shí),對(duì)照組池塘較之于養(yǎng)殖初期DO 濃度上升0.62 mg/L;而EM 菌液組、EM 菌液+10%大薸組和EM 菌液+20%大薸組水體較之于養(yǎng)殖初期DO 濃度分別上升1.40 mg/L、2.93 mg/L和3.35 mg/L。與對(duì)照組相比,各處理組DO 水平顯著上升(P<0.05),同時(shí)兩組EM 菌液+大薸處理組DO 增加量均顯著高于EM菌液組(P<0.05),但兩組之間差異不顯著。
圖7 EM 菌和大薸處理組中溶解氧(DO)濃度的變化Fig.7 The dynamic changes of dissolved oxygen(DO)concentration in EM and P.stratiotes treatment groups
本研究結(jié)果顯示,在養(yǎng)殖水體中添加EM 菌液的基礎(chǔ)上,移植漂浮植物大薸,構(gòu)建的微生物-10%水生植物體系及微生物-20%水生植物體系對(duì)TN、NH4+-N、NO2--N 去除率顯著高于EM 菌液組,且兩組微生物-水生植物體系凈化后的養(yǎng)殖水體中,TN、TP 水平分別達(dá)到淡水池塘養(yǎng)殖排放水一級(jí)標(biāo)準(zhǔn),NH4+-N 水平控制在0.3 mg/L 以下,NO2--N 水平控制在0.1 mg/L 以下,均顯著低于EM 菌液組及對(duì)照組,說明構(gòu)建的微生物-水生植物體系,通過聯(lián)合作用,提高了微生物-水生植物對(duì)TN、NH+4-N、NO-2-N的利用能力。這與鄒萬生等[21]研究微生物菌與水生植物聯(lián)合凈化養(yǎng)殖廢水的結(jié)果及吳偉等[22]研究微生物-水生植物強(qiáng)化系統(tǒng)對(duì)日本沼蝦養(yǎng)殖水體的生物凈化結(jié)果一致。推測(cè)原因是加入微生物菌液后,大薸發(fā)達(dá)的根系擴(kuò)大了微生物的附著面積,為微生物的生長(zhǎng)、繁殖提供了良好的環(huán)境,在增加養(yǎng)殖水體中微生物數(shù)量的同時(shí),提高了大薸根系表面微生物的數(shù)量,擴(kuò)大了其接觸養(yǎng)殖水體的時(shí)間和面積;同時(shí),大薸發(fā)達(dá)根系還能分泌一些有機(jī)物質(zhì),直接或間接促進(jìn)微生物的新陳代謝[23],促進(jìn)對(duì)N、P、S 和COD 等物質(zhì)的去除,大幅提高了聯(lián)合凈化體系對(duì)養(yǎng)殖水體的凈化效果。李淑英等[24]在研究水生植物凈化中微生物的變化及凈化效果時(shí)也發(fā)現(xiàn)大薸凈化水質(zhì)的效果明顯,根際效應(yīng)也明顯,根際微生物數(shù)量比水中微生物數(shù)量多。但是聯(lián)合凈化體系中大薸與微生物對(duì)水體污染物去除的貢獻(xiàn)率分別為多少還需要深入研究。本研究結(jié)果表明可利用EM 菌和大薸構(gòu)建微生物-水生植物凈化體系,有效控制池塘水體中的TN、TP、NH+4-N 和NO-2-N 水平。
本研究還發(fā)現(xiàn),各試驗(yàn)組NO3--N 濃度非但沒有降低,反而顯著升高,推測(cè)原因可能是試驗(yàn)池塘DO充足并且呈上升狀態(tài),在DO 充足的情況下,硝化細(xì)菌等好氧型細(xì)菌處于活躍狀態(tài),硝化作用強(qiáng)烈,將水體中NH+4-N、NO-2-N 等形式氮轉(zhuǎn)化為NO-3-N 狀態(tài)。同時(shí),受生物量的限制,水生植物的凈化能力是有限的,因而形成較高濃度的NO-3-N 積累[2,25]。這與劉福軍等[2]及田功太等[6]的研究結(jié)果一致,但與吳偉等[22]及常會(huì)慶等[26]的研究結(jié)果不同,推測(cè)是由于水生植物對(duì)N 吸收能力的不同。本試驗(yàn)中采用漂浮植物大薸,吳偉等及常會(huì)慶等分別采用沉水植物輪葉黑藻(Hydrilla verticillata)和伊樂藻(Elodea muttalli),同時(shí)水體中不同溶解氧含量對(duì)加入的微生物菌群的硝化、反硝化作用影響不同,造成水體中NO3--N 水平呈現(xiàn)不同變化趨勢(shì)。
從各處理組對(duì)污染物的去除情況看,微生物-水生植物聯(lián)合凈化體系對(duì)N、P 的去除效果與凈化體系使用時(shí)間呈現(xiàn)較好的正相關(guān)關(guān)系,在前8 d 對(duì)TN、NH4+-N、NO2--N、TP 去除速率較快,8 d 后去除速率明顯下降。同時(shí)隨移植時(shí)間的延長(zhǎng),水生植物覆蓋面積與去除效果的正相關(guān)性越明顯,尤其是對(duì)去除TP、NO-2-N、COD,EM 菌液+10%大薸組和EM菌液+20%大薸組差異顯著,說明適當(dāng)提高水生植物大薸的覆蓋面積,有利于微生物-水生植物聯(lián)合凈化體系去除水中N、P 等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。但是當(dāng)覆蓋面積超過最適范圍時(shí),水生植物的自屏效應(yīng)會(huì)影響水體的透光作用,進(jìn)而影響水體復(fù)氧及水體中微生物硝化和反硝化作用的進(jìn)行。因而,并不是水生植物覆蓋面積越大越有利于池塘的水質(zhì)凈化[27]。在本試驗(yàn)中,由于大薸覆蓋面積只設(shè)置了10%和20% 2個(gè)梯度,因此,在構(gòu)建微生物-水生植物聯(lián)合凈化體系時(shí)大薸的最佳覆蓋面積仍需進(jìn)一步研究。但值得說明的是,在本試驗(yàn)期間,各試驗(yàn)組池塘并沒有出現(xiàn)魚浮頭,并且3 組處理塘中DO 濃度均隨時(shí)間顯著增加,說明在構(gòu)建微生物-水生植物聯(lián)合凈化體系時(shí)大薸浮床覆蓋面積為20%時(shí)的效果比10%的效果更好。
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江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)2014年4期