外源NO供體硝普鈉（SNP）對鹽脅迫下黃連種子萌發(fā)及幼苗生理特性的影響

張春平等

摘 要：該研究通過對黃連種子萌發(fā)及幼苗生理特性的研究，尋找提高黃連種子及幼苗在鹽脅迫條件下抗性能力的途徑。采用100mmol·L-1的NaCl模擬鹽脅迫，在外源硝普鈉（SNP）處理后，對黃連種子的發(fā)芽勢（Gv）、發(fā)芽率（Gr）、發(fā)芽指數(shù)（Gi）和活力指數(shù)（Vi），以及對黃連幼苗葉片細胞質(zhì)膜透性、O2-.產(chǎn)生速率，H2O2含量，可溶性糖、可溶性蛋白、游離脯氨酸及丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）、過氧化氫酶（CAT） 和抗壞血酸過氧化物酶（APX）活性進行測定。結(jié)果顯示，NaCl脅迫下的黃連種子萌發(fā)受到顯著抑制，但是在經(jīng)過不同濃度的SNP處理后，各萌發(fā)指標均有升高。實驗結(jié)果表明，外源SNP處理顯著提高了黃連種子的發(fā)芽勢、發(fā)芽率、萌發(fā)指數(shù)和活力指數(shù)，明顯提高了鹽脅迫下黃連幼苗葉片的可溶性糖、可溶性蛋白和脯氨酸含量，不同程度的提高了葉片超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）和過氧化氫酶（CAT）的活性，顯著降低了葉片丙二醛（MDA）含量、質(zhì)膜透性、O2-產(chǎn)生速率及H2O2的含量。綜上所述，外源SNP通過提高黃連種子的萌發(fā)指數(shù)，提高滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量及抗氧化酶活性，降低細胞質(zhì)膜氧化程度，有效地減緩NaCl 脅迫對黃連種子及幼苗產(chǎn)生的傷害，提高了種子及幼苗的抗鹽能力。

關(guān)鍵詞：黃連；一氧化氮；鹽脅迫；種子萌發(fā)；生理特性

中圖分類號 S567 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）23-10-06

Abstract：In order to get the method of improve the salt resistance of seeds and seedlings for Coptis chinensis Franch.under NaCl stress，seed germination and physiological characteristics of C.chinensis seedlings were studied.Several physiological indexes of C.chinensis seeds and seedlings treated by exogenous nitric oxide donor sodium nitroprusside （SNP） under NaCl stress like the germination vigor，germination rate，germination index and vigor index were measured.And other indexes like the memberane permeability，H2O2 content，production rate of O2-.，the contents of soluble surge，soluble protein，free proline，and malondialdehyde （MDA），the activities of superoxide （SOD），peroxidase （POD），catalase （CAT），and ascorbate peroxidase （APX） were also measured.The germination indexes of C.chinensis seeds under NaCl stress have an obvious inhibition.But after the treatment of SNP，every germination indexes were all increased.The result showed that the treatment of exogenous SNP obviously improve the germination vigor，germination rate，germination index and vigor index，increased the content of soluble sugars，free proline，and soluble protein，decrease the content of malondialdehyde （MDA），H2O2 content，production rate of O2-..Meanwhile，the results also indicated that SNP improve the activities of superoxide （SOD），peroxidase （POD），catalase （CAT），and ascorbate peroxidase （APX）.Exogenous SNP with appropriate concentration could significantly alleviate the damages to the seeds and seedlings of C.chinensis under NaCl stress and promote the salt resistance of the seeds and seedlings through improve the germination indexes and antioxidase activities，decrease the memberane permeability and so on.

Key words：Coptis chinensis Franch.；Nitric oxide；Salt stress；Seed germination；Physiological characteristics

黃連（Coptis chinensis Franch），又名味連、川黃連、雞爪連，為毛茛科黃連屬多年生草本植物，是國家三級保護漸危種[1]。野生黃連大多分布于四川、重慶、湖南、湖北、陜西、貴州等地海拔1 200～1 700m的山谷密林之中。黃連性寒、味苦，根莖入藥，具有清熱燥濕、瀉火解毒等作用[2]，臨床上還用于細菌性痢疾、局部化膿性感染、心律失常、胃炎及十二指腸潰瘍等的治療[3]。由于黃連根莖的有效成分小檗堿的獨特藥效，使得藥材市場對其需求量逐年增加。目前，對黃連的研究主要集中在化學(xué)成分、藥理作用、臨床應(yīng)用及資源保護等方面[4-5]，對黃連栽培過程中的環(huán)境脅迫的研究主要集中在熱脅迫、冷脅迫、干旱脅迫等方面，而對鹽脅迫的報道相對較少，且對外源性物質(zhì)處理緩解脅迫的報道僅見于極少量文獻[6]。

土壤鹽漬化是農(nóng)業(yè)栽培生產(chǎn)中的主要障礙之一，目前我國的鹽漬土地面積不斷擴大，土壤鹽漬化制約了藥用植物的發(fā)展，對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟損失。研究表明，NO作為信號分子參與了植物適應(yīng)逆境的生理調(diào)節(jié)過程，適當濃度的NO能夠提高植物對環(huán)境的適應(yīng)能力。有學(xué)者研究認為，NO可緩解鹽脅迫對黃瓜造成的傷害，提高其生長量和抗氧化酶活性。但是，NO在藥用植物上的研究鮮有報道。本研究基于以上因素，運用NO的外源供體硝普鈉對NaCl脅迫下的黃連若干生理生化指標的影響，找到SNP對鹽脅迫的緩解調(diào)節(jié)機制，為黃連在栽培生產(chǎn)中遇到的鹽脅迫問題提供理論依據(jù)和解決方法。

1 材料與方法

1.1 材料 供試的黃連種子及2a期黃連幼苗均由重慶石柱黃連培育基地提供，經(jīng)西南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院何平教授鑒定為C.chinensis Franch.的干燥成熟種子。硝普鈉（SNP）為上海生工公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 種子萌發(fā)生理指標的測定 挑取籽粒飽滿、大小一致的黃連種子，用1.0%的次氯酸鈉（NaClO）溶液消毒處理5min，蒸餾水沖洗3～5次，將種子表面水分用濾紙吸干，以鋪有雙層濾紙和雙層紗布的培養(yǎng)皿為發(fā)芽床，進行種子發(fā)芽試驗。脅迫所用的NaCl濃度為100mmol·L-1，實驗共設(shè)置6個處理：（1）水對照（ck）；（2）100mmol·L-1的NaCl鹽處理（S）；（3）100mmol·L-1NaCl+0.01mmol·L-1 SNP（T1）；（4）100mmol·L-1NaCl+0.05mmol·L-1SNP（T2）；（5）100mmol·L-1NaCl+0.10mmol·L-1SNP（T3）；（6）100mmol·L-1 NaCl+0.25mmol·L-1SNP（T4）。黃連種子在培養(yǎng)箱中進行（23±2）/（15±2）℃的變溫培養(yǎng)，光照時間設(shè)為12/12h（晝/夜），光照強度為2 500lx。每個培養(yǎng)皿100粒種子，4次重復(fù)，每天定時統(tǒng)計發(fā)芽數(shù)，第28天計算發(fā)芽勢（Gv），第40天計算發(fā)芽率（Gr）、發(fā)芽指數(shù)（Gi）和活力指數(shù)（Vi）。計算公式如下：發(fā)芽勢（Gv）=（28d內(nèi)發(fā)芽的種子數(shù)/供試的所有種子數(shù)）×100；發(fā)芽率（Gr）=（40d內(nèi)發(fā)芽的種子/供試的所有種子數(shù)）×100；發(fā)芽指數(shù)（Gi）=∑（Gt/Dt）；活力指數(shù)（Vi）=S×∑（Gt/Dt）。式中，Gt為t日內(nèi)的發(fā)芽數(shù)，Dt為相應(yīng)的發(fā)芽天數(shù)，S為植株的平均鮮重。

1.2.2 幼苗相關(guān)生理指標的測定 選取長勢一致的2a期期幼苗移入小花盆中，每盆植入1株，經(jīng)過10d的緩苗期后，進行鹽脅迫試驗，共設(shè)置以下6個處理：（1）Hoagland營養(yǎng)液空白對照（ck）；（2）Hoagland營養(yǎng)液+100mmol·L-1 NaCl鹽處理（S）；（3）Hoagland營養(yǎng)液+100mmol·L-1 NaCl+0.05mmol·L-1SNP（T1）；（4）Hoagland營養(yǎng)液+100mmol·L-1NaCl +0.10mmol·L-1SNP（T2）；（5）Hoagland營養(yǎng)液+100mmol·L-1 NaCl +0.25mmol·L-1SNP（T3）；（6）Hoagland營養(yǎng)液+100mmol·L-1NaCl +0.50mmol·L-1SNP（T4）。每個處理10株幼苗，3次重復(fù)，每天定期向花盆內(nèi)補充Hoagland營養(yǎng)液。分別于鹽脅迫后的第5、10和15d進行取樣，取樣時選取植株中等大小的功能葉片。測量的相關(guān)指標包括幼苗葉片質(zhì)膜透性、質(zhì)膜氧化程度（丙二醛含量、O2-.產(chǎn)生速率及H2O2含量）、可溶性糖含量、游離脯氨酸含量、可溶性蛋白含量、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）、過氧化氫酶（CAT）和抗壞血酸過氧化物酶（APX）的活性。

1.2.2.1 可溶性糖、可溶性蛋白及游離脯氨酸含量的測定 可溶性糖、可溶性蛋白和游離脯氨酸含量均采用張志良[7]的方法進行測量，含量分別以mg·g-1FW、mg·g-1FW和μg·g-1FW來表示。

1.2.2.2 質(zhì)膜透性的測定 黃連幼苗葉片的原生質(zhì)膜透性采用電導(dǎo)儀法測定[8]，以相對電導(dǎo)率來表示細胞膜受脅迫傷害的程度。相對電導(dǎo)率（%）=未煮之前的電導(dǎo)率/煮沸后的電導(dǎo)率×100，測量用電導(dǎo)儀型號為LIDA DDS-307W。

1.2.2.3 H2O2含量的測定 采用Lee等[9]的方法進行測定，在436nm下測量吸光度，根據(jù)標準曲線計算含量，單位為μmol·g-1FW。

1.2.2.4 O2-.產(chǎn)生速率的測定 采用張志良[10]的方法進行測定，在530nm處的吸光值，單位為μmol·g-1·min-1 FW。

1.2.2.5 丙二醛含量的測定 丙二醛（MDA）含量參照Velikova等[11]的硫代巴比妥酸（TBA）檢測法，分別于532nm和600nm處檢測吸光度，以μmol·g?1 FW表示丙二醛含量。

1.2.2.6 抗氧化酶活性的測定 超氧化物歧化酶（SOD）活性的測定采用Xu等[12]的方法，在560nm處檢測吸光度，單位為U·mg-1 protein。過氧化物酶（POD）活性的測量方法采用愈創(chuàng)木酚法進行測量[13]，檢測波長為465nm，單位為U·mg-1 protein。過氧化氫酶（CAT）活性的測量方法采用Dhindsa等[14]的方法，檢測波長為240nm，單位為U·mg-1protein。抗壞血酸過氧化物酶（APX）活性的測量方法采用Nakano等[15]的方法，于290nm處檢測吸光度，單位為U·mg-1protein。

1.3 數(shù)據(jù)處理 采用SSPS 12.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行方差分析，以Duncans新復(fù)級差法比較不同處理間的差異性。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同處理對鹽脅迫下黃連種子萌發(fā)的影響 由圖1-A，B可以看出，黃連種子在不同的處理下，發(fā)芽率和發(fā)芽勢都有不同程度的變化。與未經(jīng)任何處理（ck）的發(fā)芽勢（55.36%）和發(fā)芽率（78.49%）相比，可以得出，100mmol·L-1的NaCl處理（S）的種子發(fā)芽勢（25.17%）和發(fā)芽率（39.22%）顯著降低，這表明NaCl處理顯著抑制了黃連種子的正常萌發(fā)。當用不同濃度的SNP處理后，黃連種子的發(fā)芽勢和發(fā)芽率與NaCl處理（S）相比均有不同程度的提高，其中經(jīng)過0.05mmol·L-1的SNP處理后（T2）的結(jié)果最為顯著，發(fā)芽勢和發(fā)芽率達到52.74%和79.10%，與其余各SNP處理相比差異顯著。圖1-C，D所示為發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)的變化趨勢，其趨勢與發(fā)芽勢和發(fā)芽率的變化相似。經(jīng)過NaCl處理后，發(fā)芽指數(shù)也顯著降低，但是經(jīng)過不同濃度的SNP處理后，發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)都有明顯的升高，并且也是在經(jīng)過0.05mmol·L-1的SNP處理后結(jié)果最為顯著，發(fā)芽指數(shù)（35.70）和活力指數(shù)（396.00）達到最大，顯著高于鹽處理S（16.37和180.39），分別為S處理的2.18和2.19倍，比空白對照（ck）略低，但差異不顯著，這說明適宜濃度的SNP可有效緩解鹽脅迫對黃連種子萌發(fā)造成的傷害，在提高黃連種子各萌發(fā)生理指標中具有顯著的促進效應(yīng)。

2.2 不同處理對鹽脅迫下黃連幼苗葉片細胞膜脂過氧化及質(zhì)膜透性的影響 圖2所示為鹽脅迫下黃連葉片O2-.產(chǎn)生速率及H2O2含量的變化，結(jié)果顯示，經(jīng)過NaCl進行脅迫后，兩者均有不同程度的升高。在脅迫初期，兩者水平與對照組ck相比均顯著升高，且隨著脅迫時間的延長，提高幅度不斷變大；當用外源SNP進行處理后，兩者均有不同程度的降低。圖2-A所示，SNP在處理初期（5d）對O2-.產(chǎn)生速率的影響表現(xiàn)為：低濃度處理效果并不明顯，但是隨著濃度的升高，效果越來越明顯，在濃度為0.25mmol·L-1時（T3）時降到最小值（1.270μmol·g-1·min-1FW），并且與空白對照ck（1.249μmol·g-1·min-1FW）差異不顯著。圖2-B所示，在SNP處理初期，H2O2含量及有明顯的降低，并且同樣在濃度為0.25mmol·L-1時（T3）達到最小值（1.31μmol·g-1FW），甚至低于空白對照ck（1.32μmol·g-1FW），這說明SNP顯著地緩解了鹽脅迫下黃連葉片H2O2含量升高的趨勢。圖2-C所示為鹽脅迫下丙二醛（MDA）含量的變化，未經(jīng)任何處理的黃連葉片MDA含量隨著時間的延長并無顯著變化。而經(jīng)過NaCl處理后（S）的黃連葉片MDA含量自脅迫初期便呈現(xiàn)出顯著升高的趨勢，隨著脅迫時間的延長，升高的幅度不斷增大，在經(jīng)過SNP處理后，含量均有顯著降低，處理前期（T3，5d）達到最低值（0.078μmol·g-1FW）。圖2-D所示為鹽脅迫下黃連葉片電導(dǎo)率的變化，鹽脅迫初期電導(dǎo)率隨著脅迫程度和時間的延長而呈現(xiàn)出增大的趨勢，并在脅迫后期（15d）達到最大，在經(jīng)過SNP處理后均有不同程度的降低。以上結(jié)果表明，在鹽脅迫下，黃連葉片細胞膜透性發(fā)生了改變，從而引起部分離子外流，導(dǎo)致電導(dǎo)率發(fā)生了變化；而在經(jīng)過SNP處理后，顯著地降低了鹽脅迫下黃連葉片的相對電導(dǎo)率水平，保護了葉片細胞，維持了細胞膜的相對穩(wěn)定性。

2.3 不同處理對鹽脅迫下黃連幼苗葉片滲透性調(diào)節(jié)物質(zhì)含量的影響 圖3所示為鹽脅迫不同處理下黃連幼苗葉片滲透物質(zhì)含量的變化情況，圖3-A所示為鹽脅迫下黃連幼苗葉片可溶性糖含量的變化趨勢，可溶性糖含量與對照ck相比，呈現(xiàn)出升高的趨勢，并且差異顯著。但是隨著NaCl處理時間的延長，可溶性糖含量升高的趨勢并不明顯。當用外源SNP進行處理后，可溶性糖含量均有不同程度的變化，SNP處理隨著時間的延長呈現(xiàn)出持續(xù)升高的趨勢，并且在處理后期（10d），處理濃度為0.25mmol·L-1時，達到最大值17.10mg·g-1FW，與鹽處理S（13.92mg·g-1 FW）形成顯著性差異。圖4-B所示脯氨酸含量的變化與可溶性糖趨勢基本一致，都是在未經(jīng)處理前含量最低，經(jīng)過鹽脅迫后，含量有所增加。但是經(jīng)過外源SNP處理后，增加幅度顯著提高，使葉片內(nèi)積累了大量的滲透性物質(zhì)，以抵抗鹽脅迫對葉片造成的傷害。圖4-C所示可溶性蛋白在鹽脅迫下呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢，但是經(jīng)過SNP處理后，呈現(xiàn)出顯著升高的趨勢，與鹽脅迫處理S相比差異顯著，外源SNP有效地減緩了葉片內(nèi)可溶性蛋白減少的趨勢，增加了可溶性蛋白的含量。

2.4 不同處理對鹽脅迫下黃連幼苗葉片4種抗氧化酶活性的影響 由圖4可以看出，在經(jīng)過鹽脅迫后，4種抗氧化酶的活性都有不同程度的提高，這說明黃連幼苗對脅迫的反應(yīng)比較比較明顯。但是4種酶的具體變化規(guī)律并不完全相同，在受到鹽脅迫后，隨著脅迫時間的推移，SOD和APX呈現(xiàn)出先升后降的趨勢，而POD和CAT則呈現(xiàn)出持續(xù)上升的趨勢。在經(jīng)過外源處理SNP后，4種抗氧化酶的活性均呈現(xiàn)出顯著升高的趨勢，并與空白對照ck和鹽處理S形成顯著差異。并且當SNP濃度達到0.25mmol·L-1時（T3），其效果最好。SOD和CAT的酶活性均在第15d時達到最大值，分別為840.11和9.20U·mg-1protein。POD和APX則是在第10d達到最大值，分別為88.90和1.79U·mg-1protein。這說明，外源SNP顯著地提高了4種抗氧化酶的活性，用于減輕細胞氧化程度，維持細胞正常生理活動，并且具有一定的持續(xù)作用。

3 結(jié)論與討論

鹽脅迫導(dǎo)致細胞膜透性增加，質(zhì)膜透性可以反映植物細胞膜的破損程度，而MDA是植物細胞膜脂過氧化作用的最終產(chǎn)物，對細胞膜具有毒害作用，是衡量植物細胞膜脂過氧化程度大小的最常用指標。本實驗中，NaCl處理造成黃連幼苗葉片質(zhì)膜透性和MDA含量均高于對照處理，表明鹽脅迫能使植物細胞膜脂過氧化作用增強，膜透性增加，加劇植物的氧化損傷。但是當用外源SNP以后，MDA含量顯著降低，說明SNP對減緩鹽脅迫所造成的傷害具有積極的緩解作用，通過外源物質(zhì)的處理，有效地降低了H2O2含量及O2-.的產(chǎn)生速率，緩解了二者對細胞膜造成的氧化傷害，從而降低了細胞膜的透性。

SOD、POD、CAT和APX是植物體內(nèi)酶促防御系統(tǒng)的4個重要保護酶，這些酶類共同作用維持細胞內(nèi)活性氧代謝的平衡，從而使需氧生物體免受傷害。本研究中，在經(jīng)過SNP處理后，黃連幼苗葉片中4種抗氧化酶都表現(xiàn)出明顯的變化，但是變化趨勢略有不同。說明4種酶在遇到脅迫時具有不同的分工，在經(jīng)過外源SNP處理以后，4種酶的活性大幅度升高以抵抗過氧化對細胞帶來的傷害，有效地清除因為膜質(zhì)過氧化積累下來的活性氧，以實現(xiàn)緩解氧化的目標。本試驗結(jié)果也證明了外源SNP通過誘導(dǎo)抗氧化酶活性來降低活性氧水平，減輕氧化脅迫對黃連幼苗造成的傷害。Mata等的研究表明[16]，NO緩解干旱脅迫造成的氧化損傷主要是通過NO與活性氧自由基發(fā)生反應(yīng)，從而中斷對細胞膜的損傷。外源性NO緩解脂膜過氧化，提高保護酶的活性，可能是由于NO對含鐵的相關(guān)酶類有很高的親和性，NO可通過調(diào)節(jié)CAT等含血紅素鐵的酶類活性和抑制含非血紅素鐵的順烏頭酸酶等活性來參與植物抗性生理反應(yīng)。NO作為信號分子參與了植物適應(yīng)逆境的生理調(diào)節(jié)過程，適當濃度的NO能夠提高植物對環(huán)境的適應(yīng)能力。樊懷福等[17]認為NO可緩解鹽脅迫對黃瓜造成的傷害，提高其生長量和抗氧化酶活性；王羅霞等[18]研究表明低濃度NO對滲透脅迫下小麥葉片膜脂過氧化有明顯的緩解效應(yīng)。

綜上所述，SNP通過提高鹽脅迫下黃連幼苗的抗氧化酶活性，加強清除活性氧能力，增加膜穩(wěn)定性，降低細胞滲透勢，減少膜質(zhì)過氧化作用，從而緩解黃連幼苗所受的氧化損傷，增強其抗鹽性。

參考文獻

[1]傅立國.中國植物紅皮書—稀有瀕危植物（第一冊）[M].北京：科學(xué)出版社，1991：522.

[2]趙中振，肖培根.當代藥用植物典（第一冊）[M].上海世界圖書出版社，2007：24.

[3]馬伏英.黃連等中藥抗實驗性小鼠柯薩奇B3病毒性心肌炎的實驗研究[J].武警醫(yī)學(xué)，1998，9（4）：187-190.

[4]Kuo C L，Chi C W，Chan T Y，et al.The anti-inflammatory potential of berberine in vitro [J].Cancer letter，2004，109 （3）：407-414.

[5]吳昊，王燕枝，王德珍，等.黃連生物堿對金黃地鼠血脂代謝及低密度脂蛋白受體基因表達的影響[J].中國中藥雜志，2014，39（11）：2102-2105.

[6]田桂香，湯紹虎，武敬亮，等.干旱脅迫對黃連生理作用的影響[J].西南師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2006，31（2）：133-136.

[7]張志良，瞿偉菁.植物生理學(xué)實驗指導(dǎo)[M].北京：高等教育出版社，2003：127，67.

[8]劉寧，高玉葆，賈彩霞，等.滲透脅迫下多花黑麥草葉內(nèi)過氧化物酶活性和脯氨酸含量以及質(zhì)膜相對透性的變化[J].植物生理學(xué)通訊，2000，36（1）：11-14.

[9]Lee D H，Lee C B.Chilling stress-induced changes of antioxidant enzymes in the leaves of cucumber：in gel enzyme activity assays[J].Plant Sci，2000，159：75-85.

[10]張志良，瞿偉菁，李小方.植物生理學(xué)實驗指導(dǎo)[M].北京：高等教育出版社，2009：223-224.

[11]Velikova V，Yordanov I，Edreva A.Oxidative stress and some antioxidant systems in acid rain2-treated bean plants protective role of exogenous polyamines[J].Plant Sci，2000，151（2）：59-66.

[12]Xu P L，Guo Y K，Bai J G，et al.Effects of long-term chilling on ultrastructure and antioxidant activity in leaves of two cucumber cultivars under low light[J].Physiol Plant，2008，132：467-478.

[13]郝再彬，蒼晶，徐仲.植物生理實驗[M].哈爾濱：哈爾濱工業(yè)大學(xué)出版社，2004，115-116.

[14]Dhindsa R S，Plumb-Dhindsa P，Thorpe TA.Leaf senescence：correlated with increased levels of membrane permeability and lipid peroxidation，and decreased levels of superoxide dismutase and catalase[J].J Exp Bot，32：93-101.

[15]Nakano Y，Asada K.Hydrogen peroxide is scavenged by ascorbate specific peroxidase in spinach chloroplasts[J].Plant Cell Physiol，1981，22：867-880.

[16]Mata C G，Lamattina L.Nitric oxide induces stomatal closure and enhances the adaptive plant responses against drought stress [J].Plant Physiology，2001，126（7）：1196-1204.

[17]樊懷福，郭世榮，焦彥生，等.外源一氧化氮對NaCl脅迫下黃瓜幼苗生長、活性氧代謝和光合特性的影響[J].生態(tài)學(xué)報，2007，27（2）：546-557.

[18]王羅霞，趙志光，王鎖民.一氧化氮對水分脅迫下小麥葉片活性氧代謝及膜脂過氧化的影響[J].草業(yè)學(xué)報，2006，15（4）：104-108.

（責編：張宏民）

綜上所述，SNP通過提高鹽脅迫下黃連幼苗的抗氧化酶活性，加強清除活性氧能力，增加膜穩(wěn)定性，降低細胞滲透勢，減少膜質(zhì)過氧化作用，從而緩解黃連幼苗所受的氧化損傷，增強其抗鹽性。

參考文獻

[1]傅立國.中國植物紅皮書—稀有瀕危植物（第一冊）[M].北京：科學(xué)出版社，1991：522.

[2]趙中振，肖培根.當代藥用植物典（第一冊）[M].上海世界圖書出版社，2007：24.

[3]馬伏英.黃連等中藥抗實驗性小鼠柯薩奇B3病毒性心肌炎的實驗研究[J].武警醫(yī)學(xué)，1998，9（4）：187-190.

[4]Kuo C L，Chi C W，Chan T Y，et al.The anti-inflammatory potential of berberine in vitro [J].Cancer letter，2004，109 （3）：407-414.

[5]吳昊，王燕枝，王德珍，等.黃連生物堿對金黃地鼠血脂代謝及低密度脂蛋白受體基因表達的影響[J].中國中藥雜志，2014，39（11）：2102-2105.

[6]田桂香，湯紹虎，武敬亮，等.干旱脅迫對黃連生理作用的影響[J].西南師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2006，31（2）：133-136.

[7]張志良，瞿偉菁.植物生理學(xué)實驗指導(dǎo)[M].北京：高等教育出版社，2003：127，67.

[8]劉寧，高玉葆，賈彩霞，等.滲透脅迫下多花黑麥草葉內(nèi)過氧化物酶活性和脯氨酸含量以及質(zhì)膜相對透性的變化[J].植物生理學(xué)通訊，2000，36（1）：11-14.

[9]Lee D H，Lee C B.Chilling stress-induced changes of antioxidant enzymes in the leaves of cucumber：in gel enzyme activity assays[J].Plant Sci，2000，159：75-85.

[10]張志良，瞿偉菁，李小方.植物生理學(xué)實驗指導(dǎo)[M].北京：高等教育出版社，2009：223-224.

[11]Velikova V，Yordanov I，Edreva A.Oxidative stress and some antioxidant systems in acid rain2-treated bean plants protective role of exogenous polyamines[J].Plant Sci，2000，151（2）：59-66.

[12]Xu P L，Guo Y K，Bai J G，et al.Effects of long-term chilling on ultrastructure and antioxidant activity in leaves of two cucumber cultivars under low light[J].Physiol Plant，2008，132：467-478.

[13]郝再彬，蒼晶，徐仲.植物生理實驗[M].哈爾濱：哈爾濱工業(yè)大學(xué)出版社，2004，115-116.

[14]Dhindsa R S，Plumb-Dhindsa P，Thorpe TA.Leaf senescence：correlated with increased levels of membrane permeability and lipid peroxidation，and decreased levels of superoxide dismutase and catalase[J].J Exp Bot，32：93-101.

[15]Nakano Y，Asada K.Hydrogen peroxide is scavenged by ascorbate specific peroxidase in spinach chloroplasts[J].Plant Cell Physiol，1981，22：867-880.

[16]Mata C G，Lamattina L.Nitric oxide induces stomatal closure and enhances the adaptive plant responses against drought stress [J].Plant Physiology，2001，126（7）：1196-1204.

[17]樊懷福，郭世榮，焦彥生，等.外源一氧化氮對NaCl脅迫下黃瓜幼苗生長、活性氧代謝和光合特性的影響[J].生態(tài)學(xué)報，2007，27（2）：546-557.

[18]王羅霞，趙志光，王鎖民.一氧化氮對水分脅迫下小麥葉片活性氧代謝及膜脂過氧化的影響[J].草業(yè)學(xué)報，2006，15（4）：104-108.

（責編：張宏民）

綜上所述，SNP通過提高鹽脅迫下黃連幼苗的抗氧化酶活性，加強清除活性氧能力，增加膜穩(wěn)定性，降低細胞滲透勢，減少膜質(zhì)過氧化作用，從而緩解黃連幼苗所受的氧化損傷，增強其抗鹽性。

參考文獻

[1]傅立國.中國植物紅皮書—稀有瀕危植物（第一冊）[M].北京：科學(xué)出版社，1991：522.

[2]趙中振，肖培根.當代藥用植物典（第一冊）[M].上海世界圖書出版社，2007：24.

[3]馬伏英.黃連等中藥抗實驗性小鼠柯薩奇B3病毒性心肌炎的實驗研究[J].武警醫(yī)學(xué)，1998，9（4）：187-190.

[4]Kuo C L，Chi C W，Chan T Y，et al.The anti-inflammatory potential of berberine in vitro [J].Cancer letter，2004，109 （3）：407-414.

[5]吳昊，王燕枝，王德珍，等.黃連生物堿對金黃地鼠血脂代謝及低密度脂蛋白受體基因表達的影響[J].中國中藥雜志，2014，39（11）：2102-2105.

[6]田桂香，湯紹虎，武敬亮，等.干旱脅迫對黃連生理作用的影響[J].西南師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2006，31（2）：133-136.

[7]張志良，瞿偉菁.植物生理學(xué)實驗指導(dǎo)[M].北京：高等教育出版社，2003：127，67.

[8]劉寧，高玉葆，賈彩霞，等.滲透脅迫下多花黑麥草葉內(nèi)過氧化物酶活性和脯氨酸含量以及質(zhì)膜相對透性的變化[J].植物生理學(xué)通訊，2000，36（1）：11-14.

[9]Lee D H，Lee C B.Chilling stress-induced changes of antioxidant enzymes in the leaves of cucumber：in gel enzyme activity assays[J].Plant Sci，2000，159：75-85.

[10]張志良，瞿偉菁，李小方.植物生理學(xué)實驗指導(dǎo)[M].北京：高等教育出版社，2009：223-224.

[11]Velikova V，Yordanov I，Edreva A.Oxidative stress and some antioxidant systems in acid rain2-treated bean plants protective role of exogenous polyamines[J].Plant Sci，2000，151（2）：59-66.

[12]Xu P L，Guo Y K，Bai J G，et al.Effects of long-term chilling on ultrastructure and antioxidant activity in leaves of two cucumber cultivars under low light[J].Physiol Plant，2008，132：467-478.

[13]郝再彬，蒼晶，徐仲.植物生理實驗[M].哈爾濱：哈爾濱工業(yè)大學(xué)出版社，2004，115-116.

[14]Dhindsa R S，Plumb-Dhindsa P，Thorpe TA.Leaf senescence：correlated with increased levels of membrane permeability and lipid peroxidation，and decreased levels of superoxide dismutase and catalase[J].J Exp Bot，32：93-101.

[15]Nakano Y，Asada K.Hydrogen peroxide is scavenged by ascorbate specific peroxidase in spinach chloroplasts[J].Plant Cell Physiol，1981，22：867-880.

[16]Mata C G，Lamattina L.Nitric oxide induces stomatal closure and enhances the adaptive plant responses against drought stress [J].Plant Physiology，2001，126（7）：1196-1204.

[17]樊懷福，郭世榮，焦彥生，等.外源一氧化氮對NaCl脅迫下黃瓜幼苗生長、活性氧代謝和光合特性的影響[J].生態(tài)學(xué)報，2007，27（2）：546-557.

[18]王羅霞，趙志光，王鎖民.一氧化氮對水分脅迫下小麥葉片活性氧代謝及膜脂過氧化的影響[J].草業(yè)學(xué)報，2006，15（4）：104-108.

（責編：張宏民）