中藥商陸利尿作用的實驗研究

賈金萍，邢 婕，秦雪梅(山西大學中醫(yī)藥現代研究中心，太原 030006)

中藥商陸(Radix Phytolaccae)為商陸科植物商陸(Phytolacca acinosa Roxb.)或垂序商陸(Phytolacca americana L.)的干燥根，為傳統(tǒng)中藥，歷版中國藥典均有收載，具有瀉下逐水、解毒散結之功效，用于水腫漲滿，大便秘結，小便不利;外治癰腫。臨床上常用于腎性、心源性及肝性腹水［1，2］。第二軍醫(yī)大學的易揚華教授發(fā)現商陸皂苷及其皂苷元均無利尿作用［3］。目前，有關商陸利尿活性部位系統(tǒng)研究還未見報道。本文研究了商陸不同部位的利尿作用，比較其作用強度，為探討傳統(tǒng)中藥商陸的利尿活性部位及機制提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 健康Wistar大鼠，雄性，體重(250±20)g，由山西醫(yī)科大學實驗動物中心提供。

1.1.2 藥物與試劑 商陸:采購于河南省禹州市中藥材市場，經山西省藥品檢驗所中藥室鑒定為商陸科植物垂序商陸(Phytolacca americana L.)的干燥根;氫氯噻嗪(山東魯南制藥廠);生理鹽水(山東華魯制藥有限公司);其他試劑均為分析純。

1.1.3 儀器 5 L超臨界萃取裝置:江蘇華安超臨界萃取公司生產;大鼠代謝籠:淮北正華生物儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 商陸不同部位制備 取商陸藥材粗粉5 000 g，依次用超臨界CO2流體、正丁醇、水提取;收集超臨界CO2萃取部位(S-1-1);再將正丁醇、水提取提取液濃縮至膏狀，真空干燥后，得到正丁醇部位(S-1-2)及水部位(S-1-3)。另取商陸藥材細粉70 g，經熾灼燃燒灰化至恒重，得到商陸灰分(S-1-4)。再將正丁醇提取物(S-1-2)分成兩份，分別以溶劑法和酸堿法進行分離。一份采用溶劑法分離，即將正丁醇提取物依次用乙醚、乙酸乙酯超聲振蕩提取，分別濃縮，干燥，得到乙醚部位(S-2-1)、乙酸乙酯部位(S-2-2)及正丁醇殘余部位(S-2-3)。另一份采用酸堿法分離，將正丁醇提取物采用酸、堿及陽離子交換樹脂處理，得到兩部分，其中一部分經檢測主要含生物堿成分，即商陸粗生物堿部位(S-3-1)。另一部分經檢測主要含皂苷類成分，即商陸粗皂苷部位(S-3-2)。再將商陸粗生物堿和商陸粗皂苷按商陸生藥材量1∶1混合得到商陸粗生物堿和粗皂苷的混合部位(S-3-3)。樣品制備流程見圖1。

圖1 樣品制備流程圖Figure 1 The process of preparation of different fractions

1.2.2 供試藥液的制備 將1.2.1得到的商陸各部位用含0.3%CMC-Na生理鹽水配制成相當于商陸原藥材17 g/100 ml的混懸液。陽性對照藥氫氯噻嗪，配制成 0.4 mg/ml的0.3%CMC-Na 生理鹽水液，備用。

1.2.3 篩選合格實驗動物 取健康雄性Wistar大鼠，體重(250±20)g，按照隨機數表放入已標號的代謝籠(l只/籠)，喂養(yǎng)1-2 d，自由飲水，觀察大鼠尿量是否穩(wěn)定。實驗前18 h禁食，自由飲水。用藥前按2.5 ml/100 g生理鹽水灌胃大鼠，收集2 h的尿量，尿量超過生理鹽水灌胃量40%者為合格動物［4，5］。

1.2.4 利尿實驗［6-8］經篩選合格的大鼠，隨機分組，其中包括空白組(0.3%CMC-Na生理鹽水)，陽性對照組(氫氯噻嗪)及商陸各部位組。實驗前大鼠18 h禁食不禁水。實驗時，先以2.5 ml/100 g灌胃給予生理鹽水，30 min后，分別按2.5 ml/100 g灌胃給予0.3%CMC-Na生理鹽水、氫氯噻嗪及商陸各部位。給藥后壓迫大鼠下腹，使膀胱內余尿排盡，置代謝籠中，開始計時，每隔1 h記錄1次尿量，記錄7 h，分別計算0-2 h尿量，2-7 h及0-7 h累積尿量。

2 結果

2.1 商陸不同極性部位對大鼠尿量的影響

商陸超臨界CO2萃取物(S-1-1)、商陸正丁醇提取物(S-1-2)、商陸水提取物(S-1-3)及商陸灰分(S-1-4)對生理鹽水負荷大鼠累積排尿量的影響，結果見圖2。從0-2 h累積尿量得出，S-1-1不僅沒有促進大鼠排泄尿量的作用，還有一定的抑制趨勢。S-1-2有一定的利尿作用，但沒有氫氯噻嗪強。S-1-3及S-1-4均有一定的利尿趨勢，可能與其中含有無機鹽成分有關。從2-7 h累積尿量得出，S-1-2與空白對照組、氫氯噻嗪組均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，說明S-1-2有明顯的利尿作用。其他組均與空白對照組比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。從0-7 h累積尿量看，S-1-2與氫氯噻嗪作用相當，與空白組有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，說明S-1-2能顯著增加生理鹽水負荷大鼠的尿量，且與氫氯噻嗪相比利尿作用緩和持久。而S-1-1與空白組比較沒有顯著性差異(P＞0.05)，與氫氯噻嗪組比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，說明S-1-1沒有利尿作用;S-1-3及S-1-4均與空白組和氫氯噻嗪組均無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，說明S-1-3和S-1-4對生理鹽水負荷大鼠尿量有一定影響。

圖2 商陸不同極性部位對大鼠排尿量的影響Figure 2 Effect of different fractions of Phytolacca americana L.on urinary volume in rats

2.2 商陸正丁醇提取物不同萃取部位對大鼠尿量的影響

從圖3得出，通過0-2 h，2-7 h及0-7 h大鼠的累積尿量，商陸乙醚提取物(S-2-1)、乙酸乙酯提取物(S-2-2)與空白對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)，與氫氯噻嗪組相比有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，說明S-2-1、S-2-2無利尿作用。而正丁醇殘余物(S-2-3)，在0-2 h與空白對照組相比差異均無顯著性(P＞0.05)，與氫氯噻嗪組有顯著性差異;在2-7 h，與空白對照組有顯著性差異，說明S-2-3具有一定的利尿作用;從0-7 h累計尿量看，S-2-3與空白對照組和氫氯噻嗪組相比差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，說明S-2-3有一定利尿趨勢。

圖3 商陸正丁醇部位的不同萃取部位對大鼠尿量的影響Figure 3 Effect of different fractions of n-butylalcohol fractions of Phytolacca americana L.on urinary volume in rats

2.3 商陸粗生物堿與粗皂苷對大鼠尿量的影響

從圖4 看出，商陸粗皂苷(S-3-1)和商陸粗生物堿(3-3-2)對生理鹽水負荷大鼠無利尿作用。而商陸總皂苷和總生物堿混合物(S-3-3)在0-7 h的利尿作用與氫氯噻嗪相當(P＞0.05)，而0-2 h利尿作用比氫氯噻嗪組弱，在2-7 h利尿作用強于氫氯噻嗪(P＜0.05)。說明S-3-3的利尿作用與S-1-2作用一致，能顯著增加生理鹽水負荷大鼠的尿量，但與氫氯噻嗪相比利尿作用緩和持久。

圖4 商陸粗皂苷、粗生物堿對大鼠尿量的影響Figure 4 Effect of crude alkaloids and crude saponins of Phytolacca americana L.on urinary volume in rats

3 討論

中藥商陸國內外自古均用作利尿劑，在臨床上廣泛用于治療腎性、心源性及肝性腹水。但目前缺乏對商陸利尿作用物質基礎的研究。通過本研究表明，商陸利尿的物質基礎可能是商陸正丁醇提取物中商陸粗皂苷和粗生物堿的混合物，而且發(fā)現商陸粗皂苷和粗生物堿單獨使用對大鼠尿量沒有明顯的影響，推測可能是商陸粗生物堿和粗皂苷成分之間相互協(xié)同、相互促進類似復方的作用，并驗證了商陸在臨床上用于治療水腫的合理性。同時，在實驗過程中，發(fā)現商陸粗皂苷能導致大鼠出現腹瀉的現象，而與粗生物堿混合使用后，大鼠糞便正常，說明商陸成分之間存在減毒的作用。并再次驗證了商陸皂苷無利尿作用。另外，商陸灰分對大鼠排尿量有一定影響，但作用較弱，說明商陸中無機成分不是商陸利尿的主要物質基礎，可能起附加作用，與文獻報道［9-11］一致;商陸與氫氯噻嗪相比，商陸利尿作用緩和持久，故可避免西藥利尿作用快帶來的電解質紊亂等副作用，尤其對于治療慢性水腫疾病研究具有一定價值。

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